Estabelecendo um grampo de remendo de célula inteira para registro eletrofisiológico de uma retina de camundongo de montagem plana

Coloque uma retina de camundongo de montagem plana em uma solução fisiológica dentro de uma câmara de gravação.

Usando um microscópio, posicione uma pipeta de registro acima da retina. A pipeta contém um eletrodo e é preenchida com uma solução interna.

Aplique pressão positiva para evitar o entupimento da pipeta, insira-a na retina e reduza a pressão para evitar danos aos tecidos.

Avance a pipeta em direção às células amácrinas starburst, ou SACs, que estão sinapticamente ligadas a outros neurônios.

Aproxime-se de uma célula até que uma covinha se forme em sua membrana. Libere a pressão, permitindo que a membrana adira à ponta.

Use uma corrente negativa para puxar um adesivo de membrana para dentro da pipeta.

Aplique sucção para romper a membrana, estabelecendo continuidade entre o eletrodo e o citoplasma da célula, uma técnica chamada patch-clamp de célula inteira.

Para registrar as correntes sinápticas, aplique uma tensão para manter o potencial de membrana do SAC constante.

Os neurotransmissores liberados por neurônios ligados sinapticamente desencadeiam o fluxo de íons através dos receptores sinápticos SAC, medidos pelo eletrodo.

Neste procedimento, filtre a solução interna atr