Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:42 min. • July 8th, 2025
Pegue uma pipeta de registro com um eletrodo de fio em uma solução eletrolítica.
Posicione a pipeta acima de uma fatia de cérebro imobilizada.
Ajuste a corrente da pipeta para reduzir os sinais de fundo.
Use um microscópio para localizar o neurônio alvo e mova a pipeta em direção ao neurônio.
Aplique uma leve pressão positiva e trave-a.
A pressão positiva perturba a superfície do tecido, indicando proximidade com a célula.
Aproxime a pipeta até formar uma covinha na membrana, significando o posicionamento correto.
Libere a pressão positiva.
Observe um aumento na resistência à medida que a célula forma uma vedação com a pipeta.
Mantenha o potencial da membrana em uma tensão negativa constante para estabilidade.
Puxe a micropipeta para remover o excesso de pressão.
Ajuste as respostas elétricas rápidas e lentas da pipeta para precisão.
Aplique uma breve sucção para romper a célula, estabelecendo uma conexão elétrica direta.
A configuração do grampo de tensão de célula inteira agora está pronta para o registro eletrofisiológico.
Para obter a configuração de célula inteira, coloque a pipeta de gravação logo acima da fatia e compense a corrente da pipeta no modo Voltage Clamp. Aplique uma leve pressão positiva na pipeta e trave a torneira.
Em seguida, selecione uma célula saudável com uma membrana intacta e aborde o tecido com a pipeta. A pressão positiva deve causar uma ligeira perturbação no tecido. Aproxime lentamente a pipeta da célula em um movimento diagonal até formar uma pequena covinha na superfície da célula. Em seguida, solte a trava de pressão positiva. A célula começará a formar uma vedação e a resistência aumentará acima de um gigaohm. No grampo de tensão, segure a célula em -68 milivolts.
Em seguida, puxe levemente a pipeta para longe da célula na diagonal para remover o excesso de pressão. Compense a capacitância rápida e lenta da pipeta. Aplique uma breve sucção através do tubo conectado ao porta-pipeta para romper a célula e obter uma configuração de célula inteira.