Determinando um efeito de teste do hormônio do crescimento nos neurônios da kisspeptina usando um grampo de remendo de células inteiras

Fixe uma fatia hipotalâmica de camundongo transgênico em uma câmara de registro perfundida com aCSF.

A fatia contém neurônios de kisspeptina que expressam proteínas de fusão fluorescentes, cruciais para a regulação do sistema reprodutivo.

Monte uma micropipeta composta por um eletrodo de registro em uma solução interna.

Localize microscopicamente um neurônio de kisspeptina fluorescente.

Aplique pressão positiva na pipeta e avance-a em direção ao neurônio-alvo. Ao entrar em contato, a pressão cria um recuo na membrana neuronal.

Aplique uma breve pressão negativa, formando uma vedação de alta resistência entre a micropipeta e a membrana.

Defina a tensão de retenção no potencial fisiológico de repouso do neurônio para medições precisas.

Aplique breves pulsos de pressão negativa para romper a membrana, estabelecendo uma configuração de célula inteira.

Confirme a viabilidade do neurônio monitorando os parâmetros.

Introduza um hormônio do crescimento de teste, desencadeando vias de sinalização e induzindo mudanças no potencial de membrana do neurônio.

Meça as mudanças no potencial de membrana para determinar o efeito inibitório do hormônio do crescimento na atividade neuronal.

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