Isolamento de fibrilas amilóides do extrato de tecido cerebral

Tome um extrato de tecido cerebral de camundongo contendo proteínas não amilóides e fibrilas amilóides, um agregado de proteína insolúvel.

Adicione sacarose sólida e misture, aumentando a densidade da solução.

Transfira-o e centrifugue para separar as proteínas mais densas dos detritos.

Rejeitar o sobrenadante, ressuspender o pellet num tampão de maior concentração de sacarose, misturar e centrifugar.

Colete a camada superior contendo algumas fibrilas amilóides em um tubo novo, adicione um tampão de lavagem e misture.

Agora, descarte a camada intermediária e transfira o pellet enriquecido com fibrilas amilóides para o tubo que contém a fração da camada superior para isolamento máximo.

Centrifugar as fracções combinadas e rejeitar o sobrenadante. Adicione um tampão de digestão e incube para degradar exclusivamente as proteínas não amilóides.

Centrifugue e remova o sobrenadante. Lave o pellet para remover as proteínas digeridas residuais.

Ressuspenda o pellet em um tampão de solubilização à base de sacarose contendo detergente que solubiliza as proteínas não amilóides restantes.

Centrifugue, remova o sobrenadante e ressuspenda as fibrilas amilóides isoladas.

Comece colocando uma regi