Determinando a ruptura da barreira hematoencefálica usando corantes fluorescentes em um modelo de camundongo EAE

Comece com uma solução contendo corante fluorescente verde ligado a uma grande cadeia de dextrana. Em seguida, adicione uma solução de corante vermelho ligada a uma pequena cadeia de dextrano.

Misture bem os corantes e leve para uma seringa.

Injete essa mistura de corante por via intravenosa em um camundongo anestesiado através do seio retro-orbital, uma veia atrás do olho.

Este camundongo sofre de encefalomielite autoimune experimental ou EAE.

Nessa condição, a barreira hematoencefálica é perturbada com junções estreitas enfraquecidas entre as células endoteliais dos vasos sanguíneos do cérebro com lacunas.

Permita que o mouse desperte totalmente e recupere a motilidade, permitindo que os corantes circulem.

O corante vermelho com a pequena cadeia de dextrano se difunde facilmente através das pequenas lacunas no tecido cerebral, enquanto o corante verde ligado à grande cadeia de dextrano se difunde se o dano for grave.

A quantidade de cada corante fluorescente no tecido cerebral se correlaciona com a extensão da ruptura da barreira hematoencefálica.

Para preparar soluções estoque de dextrano, dissolva 10 miligramas de três quilodalton Dextran Texas Red em 500 microlitros de solução de cloreto de sódio a 0,9% e 5 miligramas de 10 quilodalton Dextran AlexaFluor 488 em 250 microlitros de solução de cloreto de sódio a 0,9%.

Para a solução de trabalho de dextrana, pouco antes da injeção, pipete 55 microlitros de solução estoque de Dextran AlexaFluor 488 de 10 quilodalton em um pedaço de filme de vedação e, em seguida, adicione 55 microlitros de solução estoque de Dextran Texas Red de três quilodaltons. Misture e colete 100 microlitros em uma seringa fina descartável.

Em seguida, coloque um mouse anestesiado em uma posição lateral sobre a mesa. Injete por via intravenosa 100 microlitros de marcadores fluorescentes no camundongo antes que ele acorde. Deixe o marcador circular por 15 minutos.