Determinando a ruptura da barreira hematoencefálica usando corantes fluorescentes em um modelo de camundongo EAE

Comece com uma solução contendo corante fluorescente verde ligado a uma grande cadeia de dextrana. Em seguida, adicione uma solução de corante vermelho ligada a uma pequena cadeia de dextrano.

Misture bem os corantes e leve para uma seringa.

Injete essa mistura de corante por via intravenosa em um camundongo anestesiado através do seio retro-orbital, uma veia atrás do olho.

Este camundongo sofre de encefalomielite autoimune experimental ou EAE.

Nessa condição, a barreira hematoencefálica é perturbada com junções estreitas enfraquecidas entre as células endoteliais dos vasos sanguíneos do cérebro com lacunas.

Permita que o mouse desperte totalmente e recupere a motilidade, permitindo que os corantes circulem.

O corante vermelho com a pequena cadeia de dextrano se difunde facilmente através das pequenas lacunas no tecido cerebral, enquanto o corante verde ligado à grande cadeia de dextrano se difunde se o dano for grave.

A quantidade de cada corante fluorescente no tecido cerebral se correlaciona com a extensão da ruptura da barreira hematoencefálica.

Para preparar soluções estoque de dextrano, dissolva 10 miligramas de três quilodalton Dextran Texas Red em 500 microlitros de solução