Avaliação da função motora em um modelo experimental de neurite autoimune em camundongo

Coloque um mouse em uma esteira para registrar seu movimento de corrida, avaliando sua função motora, que representa a capacidade de controlar os movimentos do corpo.

Após o teste, injete a toxina da coqueluche na cavidade abdominal do camundongo anestesiado, para enfraquecer sua barreira hematonervosa.

Em seguida, remova o cabelo entre as omoplatas do camundongo, desinfete a área e injete peptídeos que imitam a mielina com um adjuvante no tecido subcutâneo.

Repita ambas as injeções para reações ideais.

Os peptídeos estimulam as células apresentadoras de antígenos, que migram para os gânglios linfáticos e produzem células T autorreativas.

Essas células T entram na corrente sanguínea, atravessam a barreira hematonervosa prejudicada e têm como alvo os nervos periféricos, levando à liberação de citocinas.

Isso atrai macrófagos e células B, que liberam moléculas efetoras que degradam a bainha de mielina.

A quebra da mielina prejudica a transmissão do sinal nervoso e o aparecimento de neurite autoimune experimental ou EAN.

Por fim, repita o teste da esteira. O camundongo mostra dificuldade em correr e coordenar os movimentos dos membros, indicando disfunção motora.

Três dias antes da indução da doença, ligue o aparelho de avaliação da função motora e ligue o botão de luz. Pegue o mouse e abaixe-o em um recipiente de corante alimentar vermelho. Coloque o mouse no compartimento de caminhada e defina a velocidade da esteira para 15 centímetros por segundo. Ligue a esteira e clique em "gravar" para usar o sistema de imagem da função de marcha para capturar o movimento de corrida do mouse por 36 segundos.

Após 36 segundos, pare a gravação e a esteira e salve o vídeo da prática file da prática executada na pasta designada.

Um dia antes da primeira imunização, use uma seringa de 0,5 mililitro equipada com uma agulha de calibre 30_1/2 para administrar 1,6 microgramas por mililitro de toxina coqueluche em 250 microlitros de PBS IP isotônico de camundongo, para camundongos C57 pretos 6 machos anestesiados de seis a oito semanas de idade.

No dia seguinte, combine volumes iguais de soluções recém-preparadas de peptídeo em solução salina a 0,9% e 20 miligramas por mililitro de Mycobacterium tuberculosis em adjuvante de Freund completo em um batedor de esferas e misture as soluções na velocidade máxima por 1 minuto em temperatura ambiente.

Carregue uma seringa equipada com uma agulha de calibre 23 com o inóculo e inverta e agite a seringa antes de evacuar qualquer ar dentro do eixo da seringa.

Antes de administrar o inóculo, remova o cabelo logo lateral à linha média entre as escápulas e desinfete a pele exposta com etanol a 70%.

Em seguida, use uma pinça Addison para agarrar a pele e administrar 50 microlitros da solução ao camundongo injetado com toxina coqueluche por meio de injeção subcutânea.

Na manhã seguinte, administre 1,2 microgramas por mililitro de toxina coqueluche em 250 microlitros de PBS IP, como acabamos de demonstrar, seguido por outra injeção de 1,2 microgramas por mililitro de toxina convulsão IP 48 horas depois.

Três dias depois, após a terceira injeção de coqueluche, administrar mais 50 microlitros de inóculo recém-preparado no mesmo local de injeção de antes e monitorar o escore clínico e a função motora dos animais duas vezes por semana até o final do experimento.