Imunomarcação de interneurônios em uma secção hipocampal de rato

Pegue uma seção fixa do hipocampo de ratos contendo um interneurônio cheio de biocitina, uma molécula conjugada com biotina.

Em seguida, adicione uma solução contendo proteínas bloqueadoras e um detergente não iônico para evitar ligações inespecíficas e permeabilizar os neurônios.

Incubar com um anticorpo primário direcionado a receptores canabinóides específicos em interneurônios.

Lave com tampão para remover o excesso de anticorpos.

Em seguida, adicione um corante fluorescente conjugado com estreptavidina e um anticorpo secundário conjugado com fluoróforo.

Durante a incubação, a estreptavidina se liga fortemente à biocitina, permitindo a visualização do interneurônio preenchido com biocitina, enquanto o anticorpo secundário tem como alvo os anticorpos primários ligados ao receptor nos interneurônios.

Enxágüe com tampão, removendo as moléculas não ligadas.

Agora, monte a seção usando mídia de montagem aquosa. Posicione uma lamínula e feche-a.

Usando um microscópio de fluorescência, visualize a expressão do interneurônio e do receptor canabinóide preenchido com biocitina, permitindo a análise da morfologia do interneurônio e da distribuição do receptor.

Bloqueie os tecidos com soro