Marcação e transplante mediados por vírus de células de eminência ganglionar medial para estudos in vivo
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 6:31 min. • July 8th, 2025
Colher o tecido da eminência ganglionar medial, contendo progenitores interneurônios corticais, de embriões de camundongos geneticamente modificados.
Adicione um polímero catiônico e dissocie o tecido em uma suspensão unicelular.
Adicione vetores lentivirais carregando um repórter GFP dependente de Cre recombinase ladeado por locais de salmão defumado. Incubar.
O polímero neutraliza as cargas da membrana viral e da célula hospedeira, permitindo a fusão viral e a liberação de RNA.
O RNA viral é transcrito reversamente e integrado ao genoma do hospedeiro.
Centrifugue e descarte o sobrenadante. Absorva o excesso de mídia.
Transfira as células para uma superfície hidrofóbica e carregue-as em um dispositivo de injeção.
Injete as células no córtex de um filhote de camundongo anestesiado.
Permita que o filhote se recupere e cresça.
Os progenitores transplantados se diferenciam em interneurônios maduros no córtex.
Um subgrupo desses interneurônios co-expressa Cre recombinase e RFP.
Nesses interneurônios, Cre extirpa os locais de salmão defumado, invertendo o gene GFP e permitindo sua expressão.
Visualize a co-expressão RFP e GFP para identificar interneurônios que expressam Cre.
Depois de
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