Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:41 min. • July 8th, 2025
Pegue um modelo de barreira hematoencefálica in vitro, ou BBB, compreendendo dois compartimentos separados por uma membrana porosa.
O compartimento superior ou luminal contém células endoteliais microvasculares. Essas células expressam junções apertadas, imitando o endotélio da barreira hematoencefálica que limita a passagem de células e moléculas.
O compartimento inferior ou abluminal contém neurônios, astrócitos e micróglia, representando o parênquima cerebral.
Introduza um vírus neurotrópico no compartimento luminal para simular uma infecção transmitida pelo sangue e incubar.
O vírus é endocitado pelas células endoteliais, sofre tráfego intracelular dentro das vesículas e é liberado no lado abluminal.
Após a incubação, remova a câmara superior. Colete amostras do meio do lado abluminal para avaliar a quantidade viral, confirmando o cruzamento bem-sucedido da camada endotelial.
Adicione meio fresco e incube novamente.
O vírus entra nas células neurais por endocitose, replica-se e libera progênie viral.
Quantifique o aumento da carga viral extracelular para confirmar a neuroinvasão e replicação viral.
Depois de configurar um mini dispositivo cerebral BBB, conforme demonstrado, adicione 3.500 unidades formadoras de placas da cepa do vírus neurotrópico francês do vírus da febre amarela, diluídas em 50 microlitros de meio de células endoteliais FBS a 2% com muito cuidado no topo do compartimento luminal. Inocular o mini cérebro BBB controle com 50 microlitros de meio de células endoteliais FBS a 2% sem vírus. Em seguida, coloque o mini dispositivo cerebral BBB exposto ao vírus na incubadora por 24 horas.
No dia seguinte, remova as inserções para determinar a permeabilidade das células endoteliais em um poço complementar, como acabamos de demonstrar, e guarde 1 mililitro de amostra de cada poço para determinar o título do vírus no compartimento abluminal.
Sob o inserto suavemente para evitar vazamento do compartimento luminal para o compartimento abluminal.