Avaliando a integridade da barreira hematoencefálica em um modelo de rato com lesão cerebral induzida por laser

Pegue um rato de controle anestesiado e um modelo de rato com lesão cerebral induzida por laser.

A aplicação de laser no hemisfério direito danificou as células e a barreira hematoencefálica, ou BBB, que separa o sangue do tecido cerebral.

Injete um corante de rastreamento na veia da cauda canulada que viaja pela circulação sistêmica para chegar ao cérebro.

O corante se liga às proteínas plasmáticas e vaza para o tecido cerebral através da BBB danificada.

Eutanasiar os ratos.

Perfunda os ratos através do coração para limpar o corante da circulação.

Extraia e corte o cérebro, isole as fatias do hemisfério lesionado e homogeneize-as.

Trate com uma solução ácida para desnaturar as proteínas, liberando o corante ligado às proteínas.

Centrifugue e isole o sobrenadante contendo corante. Adicione álcool para aumentar a fluorescência do corante.

Transfira a solução para uma microplaca. Após a excitação, uma intensidade de fluorescência mais alta no cérebro lesionado indica dano BBB induzido por laser.

Para avaliar a incidência de quebra da barreira hematoencefálica, 24 horas após a lesão induzida pelo laser, carregar uma seringa com corante azul de Evans a 2%, diluído em 4 mililitros por quilogram