Incorporando o cérebro de Drosophila em uma matriz para imagens de lapso de tempo dos neurônios do relógio circadiano

Comece com uma tampa de placa de Petri contendo o cérebro larval de Drosophila, pré-exposto a um ciclo claro / escuro. A fatia contém neurônios fluorescentes que expressam proteínas.

Adicione um meio rico em nutrientes com antibióticos para apoiar a sobrevivência neuronal e uma solução de fibrinogênio quente.

Misture suavemente a solução para distribuir o fibrinogênio uniformemente.

Coloque uma pequena quantidade dessa mistura na lamínula de um prato com fundo de vidro.

Adicione trombina para reagir com o fibrinogênio para induzir a formação de uma matriz de fibrina tridimensional.

Transfira o cérebro para esta matriz, posicionando-a com o lado anterior para baixo para alinhar os neurônios do relógio para a imagem.

Dobre a matriz sobre o cérebro para ancorá-lo e prevenir o movimento.

Adicione meio rico em nutrientes para inativar a atividade da trombina.

Sele o prato com uma membrana permeável ao gás para manter a hidratação e a viabilidade neuronal.

Realize imagens de fluorescência de lapso de tempo em intervalos específicos.

As mudanças de fluorescência nos neurônios do relógio revelam sua ativação e inibição rítmica, sincronizadas com o ciclo claro/escuro, refletindo os ritmos ci