Entrega de genes subpiais na medula espinhal de camundongos para avaliar a expressão gênica

Pegue um camundongo anestesiado, raspe suas costas e desinfete a pele.

Incisar a pele, separar os músculos das vértebras e retrair-os usando grampos.

Perfure as lâminas vertebrais para criar rachaduras e, em seguida, remova os fragmentos ósseos para expor a dura-máter, a membrana externa da medula espinhal.

Usando uma agulha, crie uma abertura dural e perfure a pia-máter subjacente para entrar no espaço subpial para acesso direto ao tecido espinhal.

Pegue uma agulha de entrega contendo uma suspensão de vírus adeno-associado recombinante carregando um gene que expressa proteínas fluorescentes e injete a suspensão.

Retire a agulha, suture os músculos e a pele e permita que o camundongo se recupere.

O vírus se liga a receptores em neurônios e células gliais e é endocitado.

Uma vez dentro do núcleo, o vírus desencadeia a expressão gênica para produzir proteínas fluorescentes.

O modelo de entrega de genes subpiais está agora pronto para avaliar a expressão do gene alvo na medula espinhal.

Comece anestesiando adequadamente o animal para a cirurgia. O isoflurano é usado aqui. Certifique-se da ausência de uma resposta de beliscão da pata antes de prosseguir. Em seguida, cubra os olhos com pomada o