Name: Expansão do sangue periférico humano γδ células T usando zoledronato (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 8 s
Description: Aprenda a expandir células T γδ de sangue periférico humano usando zoledronato e IL-2 para imunoterapia autóloga em câncer. Este método clínico permite obter células funcionais em grande escala.

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1. Isolamento de PBMC <ol><li> Coleta de sangue (7,5-8,0 ml) em um BD Vacutainer CPT Tubo preparação celular com heparina sódica. O tubo contém um anticoagulante heparina sódica e um fluido de densidade Ficoll-Hypaque, além de uma barreira de gel de poliéster, que separa os dois líquidos. Tubo de centrifugação / amostra de sangue em temperatura ambiente (18 ° C a 25 ° C) em um rotor horizontal (swing out-cabeça) por 20 min a 1800 x g. Interruptor centrífuga freios off. </li><li> Após a centrifugação, a seqüência de camadas ocorre da seguinte forma (visto de cima para baixo): um plasma) - b) células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e plaquetas - c) solução de densidade - d) gel de poliéster - e) granulócitos - f) glóbulos vermelhos (Fig. 1). </li><li> Coletar uma fração da camada de plasma, deixando 5 a 10 mm de plasma acima da interfase sem perturbar a camada de células. O plasma pode ser usado para a cultura (seção 2.5). </li><li> Colheita da fração enriquecida (PBMC) na interfase com uma pipeta e transferir para um tubo de 15 ml. </li><li> Lave o PBMC com 10 ml de tampão fosfato (PBS), invertendo o tubo 5 vezes, e então centrifugar por 5 min a 400 x g. </li><li> Repita os passos de lavagem duas vezes, e, em seguida, ressuspender o sedimento celular em 5 ml de PBS. Determinar o número de células. Normalmente, 1,3 x10 6 células são recuperados a partir de 1 ml de sangue total. </li><li> Determinar a freqüência e fenótipo de células T γδ em PBMC por citometria de fluxo (seção 3) (Fig. 2). </li></ol> 2. Expansão de células T γδ <ol><li> Centrífuga suspensões de células em 15 ml tubos cônicos por 5 min a 400 x g à temperatura ambiente, e descartar o sobrenadante. </li><li> Prepare meio de cultura (CM), acrescentando IL-2 humana (IL-2) e zoledronato (Zometa) para concentrações finais de 1000 UI / ml e 5 mM, respectivamente. ALyS203 (Cell Science &amp; Technology Institute) ou Optmizer (Invitrogen) o suporte a expansão de células γδ boa T (mais informações em referências 6 e 9). Zometa é fornecido na forma líquida (4 frasco mg/5-ml). Para preparar uma solução de M 5, adicione 50 ul de Zometa para 30 ml de meio de cultura. </li><li> Ressuspender pellet celular em meio de cultura e ajustar a 1x10 6 células / ml. </li><li> Ml pipeta 1 de CM contendo 1x10 6 células em cada poço de uma placa de 24 poços. De grande escala culturas, as células podem ser semeados em 0,5 x 10 6 células / cm 2 de acordo com as áreas de superfície dos poços da placa, prato, ou balão. </li><li> Adicionar plasma autólogo (seção 1.3), agrupados humano AB soros, ou FCS para que seja aproximadamente 10% do volume da cultura (100 l para cada poço de uma placa de 24 poços). Coloque as placas em um umidificado 37 ° C, 5% incubadora de CO 2 por 24-48 horas. </li><li> Manter a cultura, a uma densidade de células de 0,5-2 x 10 6 células / ml. Adicionar meio fresco contendo IL-2 humana (1000 UI / ml) apenas (sem Zometa) a cada 2-3 dias, ea transferência de células cultivadas em novos poços ou frascos, se necessário, de acordo com o grau de proliferação celular (Fig. 3). Fornecimento de plasma ou soro ao meio de modo que a concentração sérica pode ser mantida pelo menos 1%. </li><li> Células colheita no dia 14/12 e determinar a freqüência de fenótipo, e as funções de células T γδ por citometria de fluxo (veja abaixo). </li></ol> 3. Análise fenotípica por citometria de fluxo <ol><li> Transferência de 200 amostras l contendo 2 x 10 5 células para fluorescência-activated cell sorting (FACS) tubos. </li><li> Adicionar 2 ml de frio PBS e centrifugar por 5 min a 400 x g. Então, voltar a suspender as pelotas em 50 mL tampão FACS (PBS + 1% FCS azida de sódio + 0,1%). Adicionar 5 mL de cada anticorpos para as amostras (os anticorpos monoclonais estão listados na Tabela 1). </li><li> Incubar no gelo no escuro por 20 min. </li><li> Adicionar 2 ml de tampão FACS para cada amostra, e depois de vórtice. Amostras de centrífuga por 5 min a 400 x g a 4 ° C. Decantar cuidadosamente o sobrenadante. </li><li> Ressuspender as células em 300 mL de buffer FACS e vortex. Analisar amostras em um citômetro de fluxo (Fig. 2). </li></ol> 4. IFN-γ ensaio de produção de 10 <ol><li> Um dia antes do ensaio, preparar células estimulador através da cultura 05/03 x10 5 células Daudi / ml em meio RPMI 1640, mais 10% SFB (RPMI-10) durante a noite com Zometa (5 mM) (doravante designado Z-Daudi). </li><li> Coletar Z-Daudi e ressuspender em RPMI-10 em 2x10 6 células / ml. Adicionar 100 ul de Z-Daudi (2x10 5) a cada poço de uma placa de fundo redondo de 96 poços. </li><li> Prepare γδ células T em 2x10 6 células / ml em RPMI-10 contendo Brefeldin A a 20 mg / ml. Transferência de 100 l da suspensão de células T γδ (2x10 5) a cada poço contendo Z-Daudi células ou para controlar poços (100 ul de RPMI-10 apenas, ou RPMI-10 com 20 ng / ml de forbol 12-miristato 13-acetato[PMA] mais 2 mg / ml de ionomicina). </li><li> Mix pipetando cima e para baixo várias vezes. Incubar durante 4 horas a 37 ° C, 5% CO 2 incubadora. </li><li> Centrifugar a placa por 5 min a 400 x g a 4 ° C e ressuspender o pellets em 200 mL de frio PBS. </li><li> Transferir as amostras para tubos FACS. Adicionar 4 ml de frio PBS e centrifugar os tubos por 5 min a 400 x g a 4 ° C. </li><li> Volte a suspender as pelotas em 50 ul de tampão FACS com FITC-conjugado anti-TCRVγ9 (5 mL) e PE/Cy5-conjugated anti-CD3 mAb (2,5 mL). Incube ao abrigo da luz por 15 min em temperatura ambiente. </li><li> Adicionar 100 ul de IntraPrep reagente 1 e incubar por 15 min em temperatura ambiente. Adicionar 4 ml de PBS a cada tubo e centrifugar por 5 min a 400 x g à temperatura ambiente. </li><li> Retire o sobrenadante por aspiração e adicione 100 ml de IntraPrep dois reagentes. Incubar por 5 min à temperatura ambiente sem agitação. </li><li> Adicionar 5 mL da PE-conjugado anti-IFN-γ mAb ao tubo de ensaio. Incube ao abrigo da luz por 15 min em temperatura ambiente. </li><li> Adicionar 4 ml de PBS a cada tubo e centrifugar por 5 min a 400 x g à temperatura ambiente. Retire o sobrenadante por aspiração e ressuspender o pellet celular em 0,5 ml de tampão FACS. </li><li> Analisar as células por citometria de fluxo. Portão de CD3 + + TCRVγ9 células e examinar a expressão de IFN-γ (Fig. 4). </li></ol> 5. Resultados representativos: É importante para determinar a porcentagem de células T γδ em PBMC no início da cultura. Como mostrado na figura. 2 A, a porcentagem de células CD3 + + TCRVγ9 células T γδ em PBMC foi de 1,6% no dia 0. As populações dominantes eram CD27 + CD45RA + CD27 + ingênuo ou CD45RA - fenótipos de memória central. Quando as células T γδ foram eficientemente estimulados, eles formaram clusters no dia 05/03 (Fig. 3 A e B). Quando a formação do cluster foi adiada, o crescimento de outros tipos de células, tais como CD4 + ou CD8 + células T αβ ou células NK poderia dominar o crescimento de células T γδ (Fig. 3 C e D). Após 14 dias de cultura, a freqüência de células T γδ aumentou para mais de 93,8% das células cultivadas em culturas de células γδ sucesso T (Fig. 2 E). A cultura de células T γδ NKG2D upregulated CD69 e expressão (Fig. 2 G e H). Eles exibido CD27 - CD45RA - fenótipo de memória efetoras (Fig. 2 F). As funções das células T γδ foram avaliados em relação à produção de citocinas e citotoxicidade. IFN-γ o intracelular coloração demonstraram que as células T γδ IFN-γ produzido em resposta a PMA / ionomicina tratamento ou Z-Daudi células que IPP acumulado após o tratamento zoledronato (Fig. 4). Estes resultados indicam que zoledronato pode eficientemente estimular e expandir funcional das células T γδ. <table border="1"><tbody><tr><td> tubo </td><td> FITC </td><td> PE </td><td> ECD </td><td> PE/Cy5 </td></tr><tr><td> 1 </td><td> CD3 </td><td> CD19 </td><td> CD45 </td><td> CD14 </td></tr><tr><td> 2 </td><td> CD3 </td><td> TCRαβ </td><td> CD4 </td><td> CD8 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> CD3 </td><td></td><td></td><td> CD56 </td></tr><tr><td> 4 </td><td> TCR Vγ9 </td><td> TCRαβ </td><td> CD45 </td><td> CD3 </td></tr><tr><td> 5 </td><td> TCR Vγ9 </td><td> NKG2D </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 6 </td><td> TCR Vγ9 </td><td> CD69 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 7 </td><td> TCR Vγ9 </td><td> camundongo IgG1 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 8 </td><td> TCR Vγ9 </td><td></td><td> CD45RA </td><td> CD27 </td></tr><tr><td> 9 </td><td> TCR Vγ9 </td><td></td><td> camundongo IgG1 </td><td> camundongo IgG1 </td></tr></tbody></table> Tabela 1. Anticorpos monoclonais utilizados no multicolor de coloração de células T γδ. Um exemplo da análise fenotípica de células T γδ realizados em nosso laboratório é mostrada na figura. 2. <img src="/files/ftp_upload/3182/3182fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Separação de PBMC. Sangue (7,5-8,0 ml) é desenhada em um BD Vacutainer CPT Tubo preparação celular com heparina sódica e directamente centrifugada por 20 min a 1800 x g. Após a centrifugação, as camadas, resultando como visto de cima para bottom: a Plasma) - b) PBMC e plaquetas - solução Densidade c) - d) gel de poliéster - e) Granulócitos - f) Os glóbulos vermelhos. <img src="/files/ftp_upload/3182/3182fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Fenótipo de superfície típica de células T γδ. PBMC foram estimuladas com zoledronato e IL-2 por 14 dias. Células foram marcadas com FITC-rotuladas anti-TCR Vγ9 e PE/Cy5-labeled anti-CD3 para monitorar a expansão de células T γδ (A e E). As células T γδ foram identificados por sua expressão de TCRVγ9, e sua expressão de CD27 e CD45RA (B e F), NKG2D (C e G), ou CD69 (D e H) foi examinada. <img src="/files/ftp_upload/3182/3182fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Representante culturas de células T γδ. PBMC foram estimuladas com IL-2 (1.000 UI / ml) e zoledronato (5 mM). Campos representativos são mostrados (IX71 microscópio invertido [Olympus] x 200). Aglomerados e agregados de células T γδ podem ser observados no dia 3 (A) e dia 5 (B), quando as células T γδ expansão com sucesso. Em contraste, não aglomerados ou agregados foram observados quando o crescimento das células T γδ não era adequado (C e D). <img src="/files/ftp_upload/3182/3182fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. IFN γ-produção. As células T γδ foram incubadas com RPMI-10 apenas (A) ou PMA / ionomicina (B) ou Z-Daudi (C) por 4 horas. Em primeiro lugar, a expressão de superfície de TCRVγ9 estava manchada e IFN-γ, em seguida, a produção foi examinado por intracelular IFN-γ coloração. <img src="/files/ftp_upload/3182/3182fig5.jpg" alt="Figura 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 5"> Figura 5. Cinética da cultura de células T γδ. (A) o número absoluto de células em cultura, (B) porcentagem de células T γδ, e (C) número absoluto de células T γδ nos pontos de tempo indicado.

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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O método aqui apresentado permite a expansão eficiente de células T γδ do PBMC. células γδ T ativadas e se expandiu por zoledronato e IL-2 completa desenvolver funções efetoras, refletido pela produção de citocinas e citotoxicidade. Tem sido relatado que o pirofosfato bromohydrin sintéticos phosphoantigens (BrHPP) e 2-metil-3-butenyl-1-pirofosfato (2M3B1PP) também expandir as células T γδ, no entanto, eles não estão disponíveis comercialmente. Em contraste, zoledronato já está licenciado para aplicações clínicas como Zo...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentários (opcional) </th></tr><tr><td> ZOMETA </td><td> Novartis Pharma K. K </td><td></td><td> zoledronato </td></tr><tr><td> Proleukin </td><td> Novartis Pharmaceuticals </td><td></td><td> IL-2 recombinante humana </td></tr><tr><td> BD Vacutainer CPT Tubo preparação celular com heparina sódica </td><td> BD </td><td> 362753 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 21870-076 </td><td></td></tr><tr><td> ALyS203 médio </td><td> Cell Science &amp; Technology Institute </td><td> 0301-7 </td><td></td></tr><tr><td> Optmizer </td><td> Invitrogen </td><td> 0080022SA </td><td></td></tr><tr><td> A brefeldin </td><td> Sigma </td><td> B5936-200UL </td><td></td></tr><tr><td> forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) </td><td> Sigma </td><td> P1585-1MG </td><td></td></tr><tr><td> ionomicina </td><td> Sigma </td><td> 13909-1ml </td><td></td></tr><tr><td> IntraPrep </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07803 </td><td></td></tr><tr><td> anti-CD3 humano-FITC ou PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07746 FITC A07749 PE/Cy5 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humano CD4-ECD </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> 6604727 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humano CD8-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> 6607011 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humano CD14-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07765 </td><td></td></tr><tr><td> anti-CD19 humano-PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07769 </td><td></td></tr><tr><td> anti-CD45 humano-ECD </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07784 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humano CD56-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07789 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humano TCRαβ-PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A39499 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humano TCR Vγ9-FITC </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> IM1463 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humano CD27-PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> 6607107 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humano CD45RA-ECD </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> IM2711 </td><td></td></tr><tr><td> anti-CD69 humano-PE </td><td> BD </td><td> 555531 </td><td></td></tr><tr><td> anti-humano NKG2D-PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A08934 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-humal IFNγ-PE </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> IM2717U </td><td></td></tr><tr><td> Isotipo IgG1-PE controle </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07796 </td><td></td></tr><tr><td> Isotipo IgG1 controle-ECD ou PE/Cy5 </td><td> BECKMAN COULTER </td><td> A07797 A07798 </td><td></td></tr></tbody></table>

expansão do sangue periférico humano γδ células t usando zoledronato

Expansion of Human Peripheral Blood  &gamma;&delta; T Cells using Zoledronate

Células T γδ podem reconhecer e responder a uma grande variedade de estresse induzido por antígenos, desenvolvendo assim uma atividade ampla inata anti-tumorais e anti-infecciosos. 1 A maioria das células T γδ no sangue periférico tem o Vγ9Vδ2 receptor de células T. Estas células reconhecem o antígeno em um principal de histocompatibilidade forma complexa independente e desenvolver forte citolítica e Th1-like funções efetoras. 1 Portanto, as células T γδ são células efetoras candidato atraente para a imunoterapia do câncer. Vγ9Vδ2 células T responder a phosphoantigens tais como (E)-4-hidroxi-3-metil-but-2-enilo pirofosfato (HMBPP), que é sintetizada em bactérias através de biossíntese de isoprenóides; 2 e isopentenil pirofosfato (IPP), que é produzido em células eucarióticas através da via mevalonato. 3 Na condição fisiológica, a geração de IPP na célula nontransformed não é suficiente para a ativação de células T γδ. Desregulação da via mevalonato em células tumorais leva ao acúmulo de IPP e γδ T ativação das células. 3 Porque aminobisphosphonates (tais como o pamidronato ou zoledronato) inibem sintase farnesil pirofosfato (FPP), a enzima agir a jusante do IPP na via mevalonato, níveis intracelulares de IPP e sensitibity para γδ reconhecimento células T pode ser terapeuticamente aumentou aminobisphosphonates. IPP acumulação é menos eficiente nas células nontransfomred de células tumorais com uma concentração farmacologicamente relevantes da aminobisphosphonates, que nos permitem imunoterapia para o câncer, ativando as células T γδ com aminobisphosphonates. 4 Curiosamente, IPP acumula em monócitos quando PBMC são tratados com aminobisphosphonates, por causa do eficiente absorção de drogas por essas células. 5 monócitos que se acumulam IPP se tornar células apresentadoras de antígenos e estimular Vγ9Vδ2 células T no sangue periférico. 6 Com base nesses mecanismos, nós desenvolvemos uma técnica de expansão em grande escala de culturas de células T γδ usando zoledronato e interleucina -2 (IL-2). 7 Outros métodos para a expansão de células T γδ utilizar o pirofosfato bromohydrin sintéticos phosphoantigens (BrHPP) 8 ou 2-metil-3-butenyl-1-pirofosfato (2M3B1PP). 9 Todos estes métodos permitem que ex vivo de expansão, resultando em um grande número de células T γδ para uso em imunoterapia adotiva. No entanto, apenas zoledronato é um reagente FDA-approved disponíveis comercialmente. Zoledronato-expandida de células T γδ mostrar CD27 - CD45RA - fenótipo de memória efetoras e sua função pode ser avaliada por IFN-γ ensaio de produção 7.

Um método para expandir células T γδ a partir de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) é descrito. PBMC células derivadas de T γδ são estimuladas e expandida usando zoledronato e interleucina-2 (IL-2). Expansão em grande escala de células T γδ podem ser aplicadas a imunoterapia celular autóloga de câncer.

Expansão do sangue periférico humano γδ células T usando zoledronato

As células T $\gamma\delta$ humanas podem reconhecer e responder a uma ampla variedade de antígenos induzidos por estresse, desenvolvendo, assim, uma resposta antitumoral inata abrangente e...

Este vídeo demonstra a expansão em larga escala de células T gama delta do sangue periférico humano utilizando zoledronato. Primeiro, o sangue total é submetido à centrifugação em gradiente de densidade para isolar as células mononucleares do sangue periférico ou PBMCs. As PBMCs são estimuladas com zoledronato para induzir a transformação de monócitos em células apresentadoras de antígenos, e também com IL-2 para estimular as células T gama delta.As células são incubadas por até 14 dias para proliferar linfócitos T gama delta. A análise do cultivo por citometria de fluxo demonstra que a maioria das células colhidas exibe fenótipo CD3 positivo Vγ9 positivo. A principal vantagem desta técnica em relação ao método existente é que o agente já está licenciado para aplicações clínicas com Zometa.Portanto, um reagente confiável está facilmente disponível para o preparo clínico de células T gama delta, demonstrando que o procedimento será cultura celular makoto condo e amichi izumi. Técnicos do meu laboratório iniciam este procedimento isolando células mononucleares do sangue periférico a partir de sangue total coletado em um tubo BD vacutainer CPT para preparação de células contendo antic

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Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Expansão ex vivo de células tumorais T-reativa por Meios de 1/Ionomycin Bryostatin eo Common Gamma Cadeia Formulação Citocinas

Aqui nós descrevemos um método eficiente para expandir e purificar um grande número de células NK e avaliar a sua função.

Expansão, Purificação e Avaliação Funcional de Células NK do sangue periférico

Este protocolo descreve o desenvolvimento de uma em vitro humana pré-clínicos modelo de osteoclastogenesis de monócitos do sangue periférico cultivados com linhas de células de câncer de mama para simular a interação de osteoclasto-célula de câncer. O modelo pode ser usado para promover nossa compreensão da formação de metástase óssea e melhorar as opções terapêuticas.

Desenvolvimento de um modelo humano pré-clínicos de Osteoclastogenesis de monócitos do sangue periférico co cultivados com linhas de células de câncer de mama

Aqui, nós apresentamos um protocolo para induzir e marcar a doença em um modelo xenogénica da doença do transplantar-contra-anfitrião (xenogvhd). o xenoGVHD fornece um modelo in vivo para estudar a imunossupressão de células T humanas. Adicionalmente, nós descrevemos como detectar pilhas de T humanas nos tecidos com PCR digital como uma ferramenta para quantificar o immunosuppression.

Indução e pontuação da doença do enxerto versus hospedeiro em modelo murino Xenogeneico e quantificação de células T humanas em tecidos de camundongo utilizando PCR digital

Nós descrevemos uma pilha mononucleares do sangue periférico humano (PBMC)-modelo humanizado baseado do rato do xenograft para a pesquisa translacional do immuno-Oncology. Este protocolo poderia servir como diretriz geral para O estabelecimento e caracterização de modelos similares para a avaliação da terapia de I-O.

Uma célula mononuclear do sangue periférico humano (PBMC) engrafted o modelo humanizado do xenograft para a pesquisa translational do immuno-Oncology (I-O)

A doença enxerto versus hospedeiro é uma grande complicação após o transplante de medula óssea alogênico. As células dendríticas desempenham um papel crítico na patogênese da doença enxerto-versus-hospedeiro. O artigo atual descreve uma nova plataforma de transplante de medula óssea para investigar o papel das células dendríticas no desenvolvimento da doença enxerto versus hospedeiro e o efeito enxerto-versus-leucemia.

Plataforma de transplante de medula óssea para investigar o papel das células dendríticas na doença enxerto-versus-hospedeiro

Apresentado é um protocolo para a expansão do produto de células T Gama-Delta (γδ). Os linfócitos são isolados por elutriação e enriquecidos com ácido zoledrônico e interleucina-2. As células T alfa-beta estão esgotadas usando um dispositivo de separação magnética de grau clínico. As células γδ são co-cultivadas com células derivadas de antígenos artificiais e expandidas.

Expansão e enriquecimento de células T Gama-Delta (γδ) do produto humano aferido

Os osteoclastos são células-chave de reabsorção óssea no corpo. Este protocolo descreve um método confiável para a diferenciação in vitro de osteoclastos de monócitos de sangue periférico humano. Este método pode ser utilizado como uma importante ferramenta para o entendimento da biologia dos osteoclastos na homeostase e nas doenças.

Diferenciação de Osteoclastos Funcionais de Monócitos CD14+ do Sangue Periférico Humano

Aqui, estabelecemos osteo-organoides in vivo desencadeados por andaimes de gelatina carregados com proteína 2 morfogenética óssea para colher células-tronco / progenitoras hematopoiéticas terapêuticas para a reconstrução de um sistema hematopoiético e imunológico danificado. No geral, essa abordagem pode fornecer uma fonte celular promissora para terapias celulares.

Abordagem osteoorganoide in vivo para coleta de células-tronco/progenitoras hematopoiéticas terapêuticas

Nós descrevemos um método para a geração de células T de memória, regulamentar e ingénuos a partir de um único dador de sangue humano. Tregs polarizada pode ser então comparada com outros subconjuntos de uma variedade de aplicações genéticas e funcionais com homogeneidade genética, incluindo um ensaio de supressão também detalhados aqui.

Geração de Células T reguladoras induzidas a partir de células T humanas primárias Naïve e Memória

Aprenda a expandir células T γδ de sangue periférico humano usando zoledronato e IL-2 para imunoterapia autóloga em câncer. Este método clínico permite obter células funcionais em grande escala.

Expansão do sangue periférico humano γδ células T usando zoledronato

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