Enucleação Rato Olho para fenotipagem de alta capacidade remota
19 de novembro de 2011
A técnica de dissecção ilustra enucleação do olho do rato para fixação do tecido para realizar fenotipagem em alto rendimento telas.
Este vídeo ilustrará o olho do rato e a nucleação ou a remoção do globo ocular da órbita ocular. O globo ocular é delimitado pela margem inferior da pálpebra. Aqui está o canto medial ou nasal.
Na parte de trás está o canto temporal ou lateral. Acima está a margem superior da pálpebra. Aqui está uma amostra cirúrgica.
A agulha está apontando para a córnea clara. Podemos ver um pouco da lente passando pela íris. A íris está aqui em marrom, cobrindo a lente.
O marco cirúrgico mais importante é essa linha branca, ou o limbo fará uma ferida logo atrás dela. A metade posterior do globo está atrás do limbo e estamos apontando para uma inserção muscular. Você pode ver o músculo encostado no globo aqui, e então o tecido conjuntivo que preenche a órbita e inclui a glândula ariana.
E, finalmente, esta é a longa faixa branca de nervo óptico de uma dissecção romba. Usando uma pinça de curativo curva, personalizada com uma ponta afiada, comece separando as pálpebras. Isso tende a sustentar o olho para fora e para longe.
Use cuidadosamente o fórceps para entrar na órbita e atrás do globo ocular, comprima-o suavemente atrás do globo ocular sem apertá-lo e puxe para frente. Você deveria ter sido capaz de compreender o tecido conjuntivo e não o globo ocular. Se você virar o globo ocular para o lado, poderá ver o tecido orbital junto com o nervo óptico branco.
Esta é uma segunda dissecação apenas para mostrar que, novamente, você entra no canto, empurra a pinça atrás do globo ocular, agarra o tecido conjuntivo e puxa-o para frente sem pressionar o próprio globo ocular. Novamente, você pode ver o tecido conjuntivo na longa faixa de nervo óptico branco. Para fazer uma perfuração, segure o globo ocular por uma inserção muscular e insira uma agulha atrás do limbo ao lado de onde você está segurando o olho para estabilizá-lo.
Isso permitirá que o fixador entre no olho. Se você fizer a punção longe de onde está segurando o olho, o globo ocular ficará muito instável e será difícil fazer essa ferida, desde que você não comprima o olho ou aplique pressão indevida. Você também pode agarrar todo o tecido conjuntivo logo atrás do próprio globo ocular.
Alguns fixadores não requerem uma ferida de punção. Em geral, colocamos o olho em um frasco de cintilação de cinco cc com pelo menos três ccs de fixador para garantir que o olho esteja submerso. Para animais fixos em profusão, é necessária uma dissecção aguda.
Usamos uma pinça calibri curva e uma tesoura wescott curva. Segure a pálpebra inferior com a pinça calibri. Insira a tesoura contra o osso orbital e comece a cortar o tecido conjuntivo.
Usamos a curva longe do globo ocular e evitamos o dimensionamento. Qualquer olho trabalhará ao longo da margem inferior da pálpebra, de um canto ao outro. Em um certo ponto, a maior parte do tecido conjuntivo será removida e você pode deslizar sua tesoura para trás do globo e puxá-la para longe.
Aqui está outro exemplo novamente, inserindo a tesoura na órbita, mas contra o osso orbital em vez do globo ocular e cortando o tecido conjuntivo. Isso começará a liberar o globo ocular, que é como uma bola de basquete em uma cesta. Use a pinça para retrair as pálpebras e faça cortes curtos suaves ao redor do globo ocular.
Aqui, agarramos o tecido conjuntivo ou uma inserção muscular com a Collibra e terminamos de cortar o globo ocular do tecido conjuntivo orbital. Depois que os globos oculares estiverem devidamente fixados, e se precisarem ser transportados, colocamos um pouco de filme para. Nós ao redor do frasco de sação.
A embalagem deve estar de acordo com os regulamentos da sua universidade e do governo. Normalmente colocamos estes em um recipiente com um pouco de algodão Para pegar qualquer fluido, este recipiente tem que ser muito bem fechado. Este contêiner de transporte é então colocado em um saco plástico bolha.
Isso é colocado em um pacote de remessa de laboratório líquido, juntamente com qualquer documentação.
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Visão Geral
Este vídeo ilustra a técnica de enucleação do olho de rato, que é crucial para a fixação de tecido em telagens de fenotipagem de alto rendimento. O procedimento envolve a remoção do globo ocular de seu soquete, destacando marcos anatômicos para maior clareza.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Biologia
Fundamentos
- A enucleação é uma técnica crítica em vários estudos biológicos.
- A compreensão da anatomia ocular auxilia em procedimentos cirúrgicos precisos.
- Este método é essencial para aplicações de triagem de alto rendimento.
- A fixação adequada do tecido é necessária para uma fenotipagem precisa.
Objetivo do Estudo
- Demonstrar a técnica de enucleação para fins educacionais.
- Fornecer um guia visual para pesquisadores que realizam procedimentos semelhantes.
- Aprimorar a compreensão dos marcos anatômicos durante a cirurgia.
Métodos Utilizados
- Demonstração em vídeo do processo de enucleação.
- Identificação de características anatômicas-chave do olho de rato.
- Orientação passo a passo para a realização do procedimento.
- Auxílios visuais para apoiar a aprendizagem e aplicação.
Principais Resultados
- Visualização clara da técnica de enucleação.
- Identificação do canto medial e lateral.
- Demonstração do espécime cirúrgico pós-enucleação.
- Melhoria na compreensão do procedimento para triagens de alto rendimento.
Conclusões
- O vídeo serve como uma ferramenta educacional eficaz para pesquisadores.
- A compreensão do processo de enucleação é vital para uma fixação bem-sucedida do tecido.
- A técnica adequada pode melhorar os resultados em estudos de fenotipagem.
Perguntas Frequentes
Executive Industry Relevance
Remote high-throughput phenotyping of mouse eyes enables distributed genetic resource utilization and accelerates discovery of genotype-phenotype correlations in ophthalmic disease models. Standardized enucleation and tissue transfer protocols reduce geographic and operational barriers, supporting scalable, multi-site preclinical research. This approach enhances portfolio-wide access to rare or geographically dispersed transgenic lines for early-stage target validation and phenotypic screening.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Facilitates systematic collection of ocular tissues from diverse genetic backgrounds for hypothesis-driven studies.
- Enables functional validation of candidate genes implicated in ocular development and disease.
- Supports predictive confidence in linking genetic perturbations to phenotypic outcomes.
Screening & Assay Development
- Provides standardized, fixed tissue samples suitable for downstream molecular and morphological assays.
- Improves reproducibility and comparability across multi-site phenotyping screens.
- Enables scalable preparation of samples for high-throughput screening platforms.
Translational & Preclinical Research
- Aligns mouse phenotyping with translational biomarker discovery for human ophthalmic diseases.
- Supports continuity from genetic discovery to preclinical validation of disease mechanisms.
- Reduces logistical barriers to accessing rare or geographically distributed mouse models.
Pipeline & Workflow Integration
This remote enucleation and tissue transfer protocol integrates into the early discovery and preclinical continuum, bridging genetic model generation with centralized phenotyping and analysis.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing and mechanistic de-risking by providing access to diverse genetic models.
- Screening: Standardizes sample preparation for reproducible, quantitative phenotyping assays.
- Analytics: Supports acquisition of morphological and molecular readouts for comparative analysis.
- Translational Research: Facilitates alignment of mouse phenotypes with human disease biomarkers.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable protocol for distributed tissue acquisition across research networks.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in genotype-phenotype associations and target validation.
- Operational Value: Streamlines logistics, standardizes procedures, and enables multi-site scalability.
- Strategic Value: Enhances go/no-go decision-making by broadening access to phenotypic data from rare models.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of genetic targets and disease models.
Implementation Considerations
- Requires surgical proficiency in mouse eye enucleation and tissue handling.
- Needs access to fixation reagents, validated shipping containers, and compliance with shipping regulations.
- Demands cross-site standardization of collection and documentation protocols.
- Adaptable to both unfixed and perfusion-fixed tissue workflows as supported by the protocol.
- Dependent on institutional and governmental guidelines for biological sample transport.
