Liberação de neurotransmissores de imagem usando repórteres de engenharia fluorescente de neurotransmissores baseados em células

Pegue um camundongo com uma janela craniana contendo uma fina camada de crânio para permitir a visualização do cérebro.

O movimento da cabeça é restrito usando uma barra de cabeça anexada.

O córtex é pré-injetado com repórteres de engenharia fluorescente de neurotransmissores baseados em células, ou CNiFERs, que são células repórteres que permitem a detecção em tempo real da liberação de neurotransmissores.

Os CNiFERs expressam um receptor de neurotransmissor acoplado à proteína G e um detector de cálcio citoplasmático, que consiste em um domínio de ligação ao cálcio fundido a fluoróforos doadores e aceptores.

Usando um microscópio de dois fótons, excite o detector para causar emissão de fluorescência do doador e permita a visualização do CNiFER.

A atividade neuronal que atinge o córtex causa a liberação de neurotransmissores.

Esses neurotransmissores se ligam aos receptores CNiFER e ativam vias de sinalização que induzem a liberação de cálcio do retículo endoplasmático.

O aumento do cálcio citoplasmático se liga ao detector, causando uma mudança conformacional que aproxima os fluoróforos.

O doador transfere energia para o aceptor para estimular a emissão de fluorescência do aceptor, indic