Imagem da dinâmica do cálcio subcelular em neurônios de Caenorhabditis elegans
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:17 min. • June 17th, 2025
Pegue duas cepas transgênicas separadas de Caenorhabditis elegans em lâminas com almofadas de ágar. As almofadas contêm uma solução de rolamento com um agente paralisante que minimiza o movimento.
O cordão nervoso ventral dos vermes, ou VNC, contém interneurônios excitatórios que expressam indicadores de cálcio citoplasmático em uma cepa e indicadores de cálcio mitocondrial na outra.
Coloque uma lamínula para rolar os vermes, orientando o VNC para visualização, e posicione-os sob um microscópio de fluorescência.
Use a luz visível para localizar os vermes e, em seguida, mude para o modo de fluorescência.
Nos neurônios em repouso, o baixo cálcio intracelular mantém os indicadores desligados, resultando em fluorescência fraca.
A atividade neuronal espontânea abre canais de cálcio dependentes de voltagem, permitindo o influxo de cálcio.
Na cepa com indicadores citoplasmáticos, o cálcio se liga aos indicadores, aumentando a fluorescência citoplasmática.
O excesso de cálcio citoplasmático entra nas mitocôndrias através dos canais. Na cepa com indicadores mitocondriais, a ligação ao cálcio aumenta a fluorescência mitocondrial.
Visualize os neurônios em ambas as cepas para monitorar a dinâmica do
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