Injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina em um modelo de camundongo

Comece com um camundongo anestesiado e aplique um agente dilatador da pupila.

Sob um microscópio, abra a pálpebra e projete ligeiramente o olho para expor o local da injeção.

Aplique uma gota de solução viscoelástica oftálmica e, em seguida, coloque uma lamínula para visualizar a retina.

Usando uma agulha fina, crie um orifício atrás da junção córnea-esclera, evitando danos aos vasos sanguíneos e ao cristalino.

Através deste orifício pré-perfurado, insira uma seringa romba tangencialmente no espaço sub-retiniano próximo ao epitélio pigmentar da retina ou EPR, que suporta os neurônios da retina.

Injete o vetor lentiviral que transporta genes-alvo no espaço sub-retiniano.

Observe a formação de uma bolha sub-retiniana devido ao acúmulo de líquido, confirmando a entrega bem-sucedida do vetor.

Feche suavemente a pálpebra para cobrir o local da injeção e permitir que o mouse se recupere.

O lentivírus entra no EPR por endocitose, libera seu material genético e o converte no DNA correspondente, que se integra ao genoma do hospedeiro, permitindo a expressão gênica.

Primeiro, prepare uma seringa de microlitro com uma agulha romba de calibre 33. Esterilize-o usando gás óxido de etileno. Em seguida, p