Name: Desenvolvimento de um Unilateralmente-lesionadas modelo de rato 6-OHDA da Doença de Parkinson (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: Aprenda a criar um modelo de Parkinson em camundongos usando lesão unilateral com 6-OHDA no feixe prosencefálico medial. Este protocolo demonstra baixa mortalidade e depleção significativa de dopamina.

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Este trabalho foi financiado pelo Departamento de Assuntos Exteriores e Comércio Internacional (Governo do Canadá), Universidade de Toronto Connaught Fund, a Fundação Canadense para Inovação, NSERC, a Fundação Krembil e Confiança do Cure Parkinson.

<ol><li>Costall, B., Naylor, R. J., Pycock, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-specific+supersensitivity+of+striatal+dopamine+receptors+after+6-hydroxydopamine+lesion+of+the+nigrostriatal+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Non-specific supersensitivity of striatal dopamine receptors after 6-hydroxydopamine lesion of the nigrostriatal pathway.</a> Eur. J. Pharmacol. 35, 276-283 (1976).</li>
<li>Maneuf, Y. P., Mitchell, I. J., Crossman, A. R., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+role+of+enkephalin+cotransmission+in+the+GABAergic+striatal+efferents+to+the+globus+pallidus%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">On the role of enkephalin cotransmission in the GABAergic striatal efferents to the globus pallidus.</a> Exp. Neurol. 125, 65-71 (1994).</li>
<li>Robertson, G. S., Robertson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+L-dopa-induced+rotational+behavior+is+dependent+on+both+striatal+and+nigral+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Evidence that L-dopa-induced rotational behavior is dependent on both striatal and nigral mechanisms.</a> J. Neurosci. 9, 3326-3331 (1989).</li>
<li>Ungerstedt, U., Arbuthnott, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+recording+of+rotational+behavior+in+rats+after+6-hydroxy-dopamine+lesions+of+the+nigrostriatal+dopamine+system%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative recording of rotational behavior in rats after 6-hydroxy-dopamine lesions of the nigrostriatal dopamine system.</a> Brain Res. 24, 485-493 (1970).</li>
<li>Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+approaches+to+the+symptomatic+treatment+of+parkinsonian+syndromes%3A+alternatives+and+adjuncts+to+dopamine-replacement%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Novel approaches to the symptomatic treatment of parkinsonian syndromes: alternatives and adjuncts to dopamine-replacement.</a> Curr. Opin. Neurol. 10, 340-345 (1997).</li>
<li>Besson, M. J., Graybiel, A. M., Nastuk, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%5B3H%5DSCH+23390+binding+to+D1+dopamine+receptors+in+the+basal+ganglia+of+the+cat+and+primate%3A+delineation+of+striosomal+compartments+and+pallidal+and+nigral+subdivisions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">[3H]SCH 23390 binding to D1 dopamine receptors in the basal ganglia of the cat and primate: delineation of striosomal compartments and pallidal and nigral subdivisions.</a> Neuroscience. 26, 101-119 (1988).</li>
<li>Gerfen, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D1+and+D2+dopamine+receptor-regulated+gene+expression+of+striatonigral+and+striatopallidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">D1 and D2 dopamine receptor-regulated gene expression of striatonigral and striatopallidal neurons.</a> Science. 250, 1429-1432 (1990).</li>
<li>Schiffmann, S. N., Jacobs, O., Vanderhaeghen, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Striatal+restricted+adenosine+A2+receptor+%28RDC8%29+is+expressed+by+enkephalin+but+not+by+substance+P+neurons%3A+an+in+situ+hybridization+histochemistry+study%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Striatal restricted adenosine A2 receptor (RDC8) is expressed by enkephalin but not by substance P neurons: an in situ hybridization histochemistry study.</a> J. Neurochem. 57, 1062-1067 (1991).</li>
<li>Hutchison, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+neuronal+activity+in+segments+of+globus+pallidus+in+Parkinson%27s+disease+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Differential neuronal activity in segments of globus pallidus in Parkinson's disease patients.</a> Neuroreport. 5, 1533-1537 (1994).</li>
<li>Pan, H. S., Penney, J. B., Young, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gamma-aminobutyric+acid+and+benzodiazepine+receptor+changes+induced+by+unilateral+6-hydroxydopamine+lesions+of+the+medial+forebrain+bundle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Gamma-aminobutyric acid and benzodiazepine receptor changes induced by unilateral 6-hydroxydopamine lesions of the medial forebrain bundle.</a> J. Neurochem. 45, 1396-1404 (1985).</li>
<li>Pan, H. S., Walters, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unilateral+lesion+of+the+nigrostriatal+pathway+decreases+the+firing+rate+and+alters+the+firing+pattern+of+globus+pallidus+neurons+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Unilateral lesion of the nigrostriatal pathway decreases the firing rate and alters the firing pattern of globus pallidus neurons in the rat.</a> Synapse. 2, 650-656 (1988).</li>
<li>Gong, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gene+expression+atlas+of+the+central+nervous+system+based+on+bacterial+artificial+chromosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A gene expression atlas of the central nervous system based on bacterial artificial chromosomes.</a> Nature. 425, 917-925 (2003).</li>
<li>Kreitzer, A. C., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endocannabinoid-mediated+rescue+of+striatal+LTD+and+motor+deficits+in+Parkinson%27s+disease+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Endocannabinoid-mediated rescue of striatal LTD and motor deficits in Parkinson's disease models.</a> Nature. 445, 643-647 (2007).</li>
<li>Shen, W., Flajolet, M., Greengard, P., Surmeier, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dichotomous+dopaminergic+control+of+striatal+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Dichotomous dopaminergic control of striatal synaptic plasticity.</a> Science. 321, 848-851 (2008).</li>
<li>Lundblad, M., Picconi, B., Lindgren, H., Cenci, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+of+L-DOPA-induced+dyskinesia+in+6-hydroxydopamine+lesioned+mice%3A+relation+to+motor+and+cellular+parameters+of+nigrostriatal+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">A model of L-DOPA-induced dyskinesia in 6-hydroxydopamine lesioned mice: relation to motor and cellular parameters of nigrostriatal function.</a> Neurobiol. Dis. 16, 110-123 (2004).</li>
<li>Grealish, S., Mattsson, B., Draxler, P., Bjorklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+behavioural+and+neurodegenerative+changes+induced+by+intranigral+6-hydroxydopamine+lesions+in+a+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Characterisation of behavioural and neurodegenerative changes induced by intranigral 6-hydroxydopamine lesions in a mouse model of Parkinson's disease.</a> Eur. J. Neurosci. 31, 2266-2278 (2010).</li>
<li>Dauer, W., Przedborski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+mechanisms+and+models%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: mechanisms and models.</a> Neuron. 39, 889-909 (2003).</li>
<li>Francardo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+the+lesion+procedure+on+the+profiles+of+motor+impairment+and+molecular+responsiveness+to+L-DOPA+in+the+6-hydroxydopamine+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Impact of the lesion procedure on the profiles of motor impairment and molecular responsiveness to L-DOPA in the 6-hydroxydopamine mouse model of Parkinson's disease.</a> Neurobiol. Dis. 42, 327-340 (2011).</li>
<li>Jakowec, M. W., Petzinger, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((1-methyl-4-phenyl-1%2C2%2C3%2C6-tetrahydropyridine-lesioned+model+of+parkinson%27s+disease%2C+with+emphasis+on+mice+and+nonhuman+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Med%22%5BJournal%5D)">1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine-lesioned model of parkinson's disease, with emphasis on mice and nonhuman primates.</a> Comp. Med. 54, 497-513 (2004).</li>
<li>Visanji, N. P., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MPTP-Induced+Models+of+Parkinson%27s+Disease+in+Mice+and+Non-Human+Primates%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">MPTP-Induced Models of Parkinson's Disease in Mice and Non-Human Primates.</a> Curr. Protoc. Pharmacol. Chapter 5, 42-42 (2005).</li>
<li>Sedelis, M., Schwarting, R. K., Huston, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+of+the+MPTP+mouse+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping of the MPTP mouse model of Parkinson's disease.</a> Behav. Brain Res. 125, 109-125 (2001).</li>
<li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke%2C+cortical+ablation%2C+parkinsonism+and+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li>
<li>Paul, M. L., Currie, R. W., Robertson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Priming+of+a+D1+dopamine+receptor+behavioural+response+is+dissociated+from+striatal+immediate-early+gene+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Priming of a D1 dopamine receptor behavioural response is dissociated from striatal immediate-early gene activity.</a> Neuroscience. 66, 347-359 (1995).</li>
<li>Breese, G. R., Traylor, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+6-hydroxydopamine+on+brain+norepinephrine+and+dopamine+evidence+for+selective+degeneration+of+catecholamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Effect of 6-hydroxydopamine on brain norepinephrine and dopamine evidence for selective degeneration of catecholamine neurons.</a> J. Pharmacol Exp. Ther. 174, 413-420 (1970).</li>
<li>Breese, G. R., Chase, T. N., Kopin, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolism+of+tyramine-3H+and+octopamine-3H+by+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Metabolism of tyramine-3H and octopamine-3H by rat brain.</a> Biochem. Pharmacol. 18, 863-869 (1969).</li>
<li>Frankin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFrankin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , (2008).</li>
<li>Cornell-Bell, A. H., Finkbeiner, S. M., Cooper, M. S., Smith, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+induces+calcium+waves+in+cultured+astrocytes%3A+long-range+glial+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Glutamate induces calcium waves in cultured astrocytes: long-range glial signaling.</a> Science. 247, 470-473 (1990).</li>
<li>Iancu, R., Mohapel, P., Brundin, P., Paul, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+characterization+of+a+unilateral+6-OHDA-lesion+model+of+Parkinson%27s+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Behavioral characterization of a unilateral 6-OHDA-lesion model of Parkinson's disease in mice.</a> Behav. Brain Res. 162, 1-10 (2005).</li>
<li>Tan, Y., Williams, E. A., Lancia, A. J., Zahm, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+altered+expression+of+tyrosine+hydroxylase+and+calbindin-D+28kD+immunoreactivities+and+viability+of+neurons+in+the+ventral+tegmental+area+of+Tsai+following+injections+of+6-hydroxydopamine+in+the+medial+forebrain+bundle+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">On the altered expression of tyrosine hydroxylase and calbindin-D 28kD immunoreactivities and viability of neurons in the ventral tegmental area of Tsai following injections of 6-hydroxydopamine in the medial forebrain bundle in the rat.</a> Brain Res. 869, 56-68 (2000).</li>
<li>Thiele, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+model+of+L-DOPA-induced+dyskinesia+in+two+different+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Generation of a model of L-DOPA-induced dyskinesia in two different mouse strains.</a> J. Neurosci. Methods. 197, 193-208 (2011).</li>
<li>Henry, B., Crossman, A. R., Brotchie, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+rodent+model+in+which+to+investigate+the+molecular+and+cellular+mechanisms+underlying+the+pathophysiology+of+L-dopa-induced+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Characterization of a rodent model in which to investigate the molecular and cellular mechanisms underlying the pathophysiology of L-dopa-induced dyskinesia.</a> Adv. Neurol. 78, 53-61 (1998).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Este protocolo descreve um método para a geração de um modelo de rato estável unilateral 6-OHDA lesionada da doença de Parkinson, que é extremamente reprodutíveis, com uma elevada taxa lesão sucesso, e uma baixa taxa de mortalidade. O sucesso de 6-OHDA cirurgia lesão pode ser facilmente estimada pela medição do comportamento rotacional espontânea com&gt; rotações ipsiversive 70% indicativos de&gt; depleção de dopamina 95% no striatum lesionada 27. Quantificação dos níveis de dopamina do estriado é a medida ma...

<table border="1" &gt;<tbody&gt;<tr &gt;<td<strong&gt; Nome do reagente</strong</td&gt;<td<strong&gt; Empresa</strong</td&gt;<td<strong&gt; Número de catálogo</strong</td&gt;<td<strong&gt; Comments (opcional)</strong</td&gt;</tr&gt;<tr &gt;<td&gt; Desipramina HCl</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canadá</td&gt;<td&gt; D125</td&gt;<td&gt; 25mg/kg</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Pargilina HCl</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canadá</td&gt;<td&gt; P8013</td&gt;<td&gt; 5mg/kg</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 6-OHDA HBr</td&gt;<td&gt; Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canadá</td&gt;<td&gt; H116</td&gt;<td&gt; 3mg / mouse</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Estereotáxica Moldura</td&gt;<td&gt; Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA</td&gt;<td&gt; Model 900</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Mouse orelha xícaras</td&gt;<td&gt; Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA</td&gt;<td&gt; Model 921 Fones de ouvido Zygoma</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Mouse incisivo bar</td&gt;<td&gt; Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA</td&gt;<td&gt; Modelo 923B</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Mouse anestesia máscara</td&gt;<td&gt; Kopf Instruments, Tujunga, CA, EUA</td&gt;<td&gt; Modelo 923B</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Kit de escorvamento (seringa contendo 250ml)</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, Nevada, EUA</td&gt;<td&gt; PRMKIT 81120</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; RN compressão montagem kit (1 mm)</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, Nevada, EUA</td&gt;<td&gt; 55750-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Tubulação de PEEK RN compressão montagem kit<
 (1/16<sup&gt; Th</sup&gt; Polegadas)</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, Nevada, EUA</td&gt;<td&gt; 55751-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Dual pequeno hub RN Acoplador</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, Nevada, EUA</td&gt;<td&gt; 55752-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Luer para pequeno hub adaptador RN</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, Nevada, EUA</td&gt;<td&gt; 55753-01</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; 1ml seringa 25S modelo 7001KH</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, Nevada, EUA</td&gt;<td&gt; 80100</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; * 33G agulha removível (RN) pacote de 6. . 1 polegada sob encomenda com 45 &lt;bisel °</td&gt;<td&gt; Hamilton Company, Reno, Nevada, EUA</td&gt;<td&gt; 7803-05</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Tesouras</td&gt;<td&gt; Belas Ferramentas ciência, Vancouver, BC, Canadá.</td&gt;<td&gt; 14084-08</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Bisturi</td&gt;<td&gt; Belas Ferramentas Ciência, Vancouver, BC, Canadá</td&gt;<td&gt; 10003-12</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Lâminas de bisturi</td&gt;<td&gt; Belas Ferramentas Ciência, Vancouver, BC, Canadá</td&gt;<td&gt; 10035-20</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Pinça</td&gt;<td&gt; Belas Ferramentas Ciência, Vancouver, BC, Canadá</td&gt;<td&gt; 11608-15</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Hemostats</td&gt;<td&gt; Belas Ferramentas ciência, Vancouver, BC, Canadá.</td&gt;<td&gt; 13004-14</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; O isoflurano</td&gt;<td&gt; Abade</td&gt;<td&gt; 02241315</td&gt;<td&gt; 2-3%</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Suters (Vicryl 4,0)</td&gt;<td&gt; Syneture</td&gt;<td&gt; SS-683</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Esterilizador</td&gt;<td&gt; Belas Ferramentas Ciência, Vancouver, BC, Canadá</td&gt;<td&gt; 18000-45</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Bomba de Infusão</td&gt;<td&gt; Harvard Apparatus</td&gt;<td&gt; PhD 22/2000</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Agulhas (27G)</td&gt;<td&gt; Becton Dickinson</td&gt;<td&gt; 305109</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Agulhas (25G)</td&gt;<td&gt; Becton Dickinson</td&gt;<td&gt; 305127</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Seringas (1 ml)</td&gt;<td&gt; BD de seringa</td&gt;<td&gt; 309692</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Anestesia carrinho</td&gt;<td&gt; LEI médica</td&gt;<td&gt; M2000</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Baytril</td&gt;<td&gt; CDMV, Saint-Hyacinthe, QC</td&gt;<td&gt; 102207</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Lidocaína</td&gt;<td&gt; CDMV, Saint-Hyacinthe, QC</td&gt;<td&gt; 3914</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Solução Betadine</td&gt;<td&gt; CDMV, Saint-Hyacinthe, QC</td&gt;<td&gt; 19955</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

desenvolvimento de um unilateralmente-lesionadas modelo de rato 6-ohda da doença de parkinson

Development of a Unilaterally-lesioned 6-OHDA Mouse Model of Parkinson's Disease

O unilateralmente lesados ​​6 hyroxydopamine-(6-OHDA)-lesionado modelo do rato da doença de Parkinson (DP) provou ser inestimável para avançar na compreensão dos mecanismos subjacentes a sintomas parkinsonianos, uma vez que ele recapitula as mudanças no circuito gânglios da base e farmacologia observada em pacientes parkinsonianos 1-4. No entanto, as alterações celulares e moleculares precisos que ocorrem em cortico-estriatais sinapses das vias de saída dentro do estriado, que é a região de entrada principal dos gânglios da base permanecem ainda desconhecidos, e este é acreditado para ser local onde as anormalidades patológicas subjacentes sintomas parkinsonianos surgir 3 , 5. Na DP, compreendendo os mecanismos subjacentes alterações na degeneração dos gânglios basais circuito seguinte da via nigro-estriatal tem sido grandemente avançado pelo desenvolvimento do cromossoma artificial bacteriano (BAC) ratinhos sobre-expressam proteínas fluorescentes verdes conduzidos por promoverrs específico para as duas vias de saída do estriado (via direta: EGFP-D1; via indireta: eGFP-D2 e eGFP-A2a) 8, permitindo-lhes a ser estudado isoladamente. Por exemplo, estudos recentes sugeriram que há mudanças patológicas em plasticidade sináptica em ratinhos parkinsonianos 9,10. No entanto, estes estudos utilizaram ratos juvenis e modelos agudos de parkinsonismo. Não é claro se as alterações descritas em ratos adultos com estáveis ​​6-OHDA lesões também ocorrem nestes modelos. Outros grupos têm tentado gerar um estável unilateralmente, lesionado 6-OHDA modelo do rato adulto de DP por lesão do feixe medial do prosencéfalo (MFB), infelizmente, a taxa de mortalidade neste estudo foi extremamente elevada, com apenas 14% de sobreviver à cirurgia para o dia 21 dias ou mais 11. Estudos mais recentes têm gerado intra-nigral lesões tanto com taxa de mortalidade mais baixo&gt; perda de 80% dos neurônios dopaminérgicos, no entanto expressão de L-DOPA discinesia induzida 11,12,13,14 foi variávelnestes estudos. Outro modelo de mouse bem estabelecida de PD é o mouse MPTP lesada 15. Embora este modelo tem se mostrado útil na avaliação de potenciais agentes neuroprotetores 16, é menos adequado para a compreensão dos mecanismos subjacentes sintomas da DP, já que este modelo muitas vezes não consegue induzir déficits motores, e mostra uma grande variabilidade na extensão da lesão 17, 18 . Aqui temos desenvolvido um modelo de rato estável unilateral 6-OHDA lesionada de PD por administração directa de 6-OHDA na MFB, que faz com que consistentemente&gt; perda de 95% da dopamina do estriado (como medido por HPLC), bem como a produção do comportamental desequilíbrios observado no modelo de rato bem caracterizado unilateral 6-OHDA lesionada de PD. Este modelo de camundongo recém-desenvolvida da PD será uma ferramenta valiosa para a compreensão dos mecanismos subjacentes à geração dos sintomas parkinsonianos.

Um protocolo para a realização unilaterais 6-OHDA lesões do feixe prosencéfalo medial em ratinhos é descrito. Este método tem uma baixa taxa de mortalidade (13,3%) com 89% dos animais sobreviventes mostrando&gt; perda de 95% da dopamina do estriado e 90,63 ± -4,02% viés ipsiversive rotacional para o lado da lesão.

Desenvolvimento de um Unilateralmente-lesionadas modelo de rato 6-OHDA da Doença de Parkinson

O modelo de ratos com lesão unilateral por 6-hidroxidopamina (6-OHDA) para a doença de Parkinson (DP) provou ser inestimável para o avanço de nosso...

O objetivo geral deste procedimento é gerar um modelo murino de parkinsonismo. Isso é realizado primeiramente preparando as drogas para a cirurgia. O próximo passo é montar o aparelho cirúrgico, em seguida é realizada a cirurgia de lesão unilateral com seis hidroxi dopamina, seguida dos cuidados pós-operatórios adequados.Os animais lesionados com seis hidroxidopamina podem ser usados para experimentos comportamentais. Em última análise, os resultados mostram uma redução de dopamina superior a 95% no feixe medial de quatro fibras cerebrais unilateralmente. Os dois aspectos mais importantes deste procedimento aos quais os indivíduos devem prestar atenção são, em primeiro lugar, os cuidados pós-operatórios adequados para garantir a sobrevivência dos animais.Em segundo lugar, cuidado com a preparação do equipamento para infusão de seis hidroxidopamina para garantir que a administração da neurotoxina seja completa. Para iniciar este procedimento, esterilize os instrumentos cirúrgicos em uma autoclave. Em seguida, limpe todas as superfícies e equipamentos com álcool isopropílico.Em seguida, prepare a recuperação pós-cirúrgica montando uma gaiola de recuperação para camundongo com toalhas

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Doença de Parkinson é causada pela perda da inervação dopaminérgica para o estriado, que pode ser induzida experimentalmente por 6-OH-dopamina. Descrevemos como executar uma lesão estereotáxica e monitorar induzida por apomorfina comportamento rotacional em camundongos. Este modelo é útil e confiável para testes de novas terapias para a doença de Parkinson.

Modelo murino para a doença de Parkinson: a partir de 6-OH lesão dopamina para teste comportamental

Este vídeo demonstra um procedimento para criar um modelo de rato da doença de Parkinson injetando a neurotoxina 6-hidroxidopamina (6-OHDA) no cérebro. A infusão de neurotoxina no feixe do prosencéfalo medial (MFB) visa especificamente os neurônios dopaminérgicos responsáveis pelo controle motor, levando à sua destruição e replicando os sintomas da doença de Parkinson.

Gerando o modelo de rato 6-hidroxidopamina da doença de Parkinson

Nos distúrbios da doença de Parkinson e de movimento, em geral, os ensaios comportamentais sensíveis e fiáveis ​​são essenciais para testar novas terapêuticas potenciais. Aqui, descrevemos uma bateria gerenciável de testes sensório-motores para os ratos que são sensíveis a diferentes graus de lesão no sistema nigroestriatal e útil para estudos pré-clínicos.

Avaliação da função sensório-motora em rato modelos de doença de Parkinson

Descrevemos o estabelecimento de um modelo murino para a doença de Parkinson usando MPTP e avaliações comportamentais usando o cilindro e testes de campo aberto para medir a função motora. Então usamos l-dopa como um exemplo para mostrar como aplicar este modelo no estudo de drogas de PD.

Avaliações comportamentais de locomoção espontânea em um modelo murino induzida por MPTP a doença de Parkinson

O protocolo apresenta a reprogramação de células mononucleares do sangue periférico para induzir células-tronco neurais por infecção pelo vírus de Sendai, diferenciação de iNSCs em neurônios dopaminérgicos, transplante de precursores da DA na unilateralmente lesionada Modelos do rato da doença de Parkinson, e avaliação da segurança e da eficácia de precursores DA DA do iNSC-derivados para o tratamento do paládio.

Geração de células-tronco neurais induzidas de células mononucleares periféricas e diferenciação para precursores de neurónios dopaminérgicos para estudos de transplante

Aqui descrevemos o sistema RatWalker, construído redesenhando o aparelho MouseWalker para acomodar o aumento do tamanho e peso dos ratos. Este sistema usa reflexão interna total frustrada (FTIR), captura de vídeo de alta velocidade e software de análise de acesso aberto para rastrear e quantificar os parâmetros da marcha.

Aplicando o Sistema RatWalker para Análise de Marcha em um Modelo de Rato Genético da Doença de Parkinson

O modelo 6-hidroxidopamina (6-OHDA) tem sido usado há décadas para avançar no entendimento da Doença de Parkinson. Neste protocolo, demonstramos como realizar lesões nigrostriais unilaterais no rato injetando 6-OHDA no feixe de cérebro medial, avaliando déficits motores e prevendo lesões usando o teste de piscimento.

O Modelo de Rato de 6-hidroxidopamina da Doença de Parkinson

Modelos de roedores de discinesias induzidas por L-dopa são ferramentas inestimáveis para identificar intervenções terapêuticas para atenuar o desenvolvimento ou aliviar as manifestações que surgem devido à administração repetida de L-DOPA. Este protocolo demonstra como induzir e analisar movimentos discinéticos no modelo unilateral de ratos lesionados com 6-OHDA da doença de Parkinson.

Avaliação de discinesias induzidas por L-dopa no modelo unilateralmente de ratos lesionados com 6-OHDA da doença de Parkinson

Este artigo descreve métodos para induzir e avaliar dyskinesias induzidas por levodopa em um modelo de rato da doença de Parkinson. O protocolo oferece informações detalhadas sobre a intensidade e frequência de uma série de comportamentos discinéticos, tanto disstônicos quanto hipercinéticos, fornecendo uma ferramenta confiável para testar tratamentos voltados a essa necessidade médica não atendida.

Indução e Avaliação de Dyskinesias induzidas por Levodopa em um modelo de rato da doença de Parkinson

Este trabalho analisa a dose vetorial e o tempo de exposição necessários para induzir neuroinflamação, neurodegeneração e comprometimento motor neste modelo pré-clínico da doença de Parkinson. Esses vetores que codificam a α-sinucleína humana são entregues na substantia nigra para recapitular a patologia da sinucleína associada à doença de Parkinson.

Analisando o modelo de rato da doença de Parkinson induzida por vetores virais associados à Adeno codificando α-sinucleína humana

Aprenda a criar um modelo de Parkinson em camundongos usando lesão unilateral com 6-OHDA no feixe prosencefálico medial. Este protocolo demonstra baixa mortalidade e depleção significativa de dopamina.

Desenvolvimento de um Unilateralmente-lesionadas modelo de rato 6-OHDA da Doença de Parkinson

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