Name: Um método de genotipagem baseados em PCR para distinguir entre variedades do tipo selvagem e Ornamental de Imperata cylindrica /em (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-20T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 1 s
Description: Aprenda um protocolo de genotipagem molecular por PCR para distinguir variedades de Imperata cylindrica, incluindo capim-cola invasivo e capim-sangue ornamental. Este método rápido e econômico auxilia na identificação precisa de espécies.

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Agradecemos Alan Tasker (USDA-APHIS, Riverdale, MD), Stephen Compton (Clemson), Sherry Aultman (Clemson), Craig Ramsey (USDA-APHIS, Fort Collins, CO), e Betty Marose (UMD) para a assistência na obtenção de amostras . Agradecemos aos alunos Andrew Adrian (UA-Huntsville) e Derek Thacker (UA-Huntsville) por sua assistência em testar este protocolo, e José Herdy por seu trabalho nas filmagens do vídeo. Este trabalho foi financiado pelo National Peixe e Wildlife Foundation.

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Não temos nada a divulgar.

<html> O viveiro EUA e indústrias paisagem prosperar no cultivo e venda de espécies de plantas exóticas e romance. Isso, juntamente com a crescente globalização do comércio, aumenta as chances de que uma espécie de planta invasora entrarão, estabelecer e difundir os EUA em A capacidade de governo federal regular tais plantas depende de informações que muitas vezes não é disponível, incluindo o potencial para se tornar invasiva , taxonomia correta e distinção genética da taxa nativos e naturalizados. Porque o nosso conhecimento de plantas invasoras é muitas vezes limitado, plantas importadas, com características ocultas invasivas têm sido introduzidos voluntariamente para descobrir depois que eles invadem nossos recursos agrícolas e naturais. Este protocolo visa resolver esses problemas associados I. variedades cylindrica, proporcionando o primeiro método simplificado molecular que pode distinguir com precisão entre tipo selvagem cogongrass e reverteu a forma da sua contraparte JBG ornamentais. &gt; jove_content &quot;Para o desenvolvimento deste protocolo, tipo selvagem cogongrass foram coletados a partir de populações naturalizadas na Unidade Florestal Pond Creek, em Santa Rosa County perto de Jay, FL, em junho de 2008. JBG foi obtido a partir de um viveiro comercial (Bluebird Nursery, Inc ..) em junho de 2008, bem como da coleção de um proprietário em Columbia, MO JBG reverte foram obtidos a partir do pátio do Museu Campbell Geológica na Universidade de Clemson, SC, em junho de 2008; da Universidade Park, em Riverdale, MA, em junho de 2009; a partir da frente estaleiro de um proprietário em Columbia, MO em 2009 (identificados por Leland Cseke). Todas as plantas foram mantidas em uma estufa localizado na Universidade do Alabama em Huntsville (Huntsville, AL). A sequência genética de DNA recolhidos a partir destas plantas incluiu o em comparações profundidade de 9 regiões de DNA independentes comumente usados ​​para plantas de código de barras 2. Em todos os casos, as sequências de JBG eram um fósforo de 100% para os do JBG reverter, ajudando assim averificar que JBG, de fato, reverter para um formulário, verde invasivo. Apenas o ITS nuclear e os cloroplastos trnL F-regiões têm diferenças que podem ser utilizados para distinguir entre geneticamente cogongrass e JBG. A região ITS tem um total de 3 SNPs (polimorfismos de nucleotídeo único) entre cogongrass e JBG, enquanto a região trnL F-tem 2 SNPs e 2 indels (inserções e deleções). Estas diferenças genéticas permitiu variedade primers específicos de PCR para ser desenvolvido que pode distinguir entre tipo selvagem cogongrass e JBG reverte. Os resultados mais fiáveis ​​ter vindo de iniciadores derivados da região trnL F-plastidial. Assim, este protocolo é baseada nas diferenças de sequência entre as regiões F-trnL do genoma do cloroplasto de cogongrass, JBG e reverteu JBG (Figura 4). Para ajudar a gerar primers que são mais específicos para as variedades em questão e para evitar falsos positivos de espécies estreitamente relacionadas, all conhecidos trnL F-seqüências de I. variedades cylindrica foram comparados com trnL-F seqüências de espécies de gramíneas relacionados (43 seqüências independentes de 29 espécies, por exemplo, Cymbopogon citratus, Sorghastrum incompletum e Coix lacryma-jobi sinensis Miscanthus, Saccharum officinarum, Sorghum halepense). Embora, examinámos sequências variedade de iniciadores específicos através 29 espécies de relva, a especificidade dos iniciadores específicos variedade não tenha sido exaustivamente examinados para a sua capacidade para amplificar DNA da maioria das outras espécies de gramíneas. Consequentemente, o tecido usado para extração de DNA devem ser cuidadosamente identificados como I. cylindrica antes de iniciar este protocolo. Se a grama não pode ser identificada como a cogongrass ou JBG, então nós sugerimos o seqüenciamento do produto de PCR para se certificar de que as seqüências são uma correspondência exata para cogongrass ou JBG. Actualmente, o método mais preciso para verificar a identidade de um espécime grama dada é a realização de PCR em ambos os trnl-F e das suas regiões, seguido por verificação sequência de produtos de PCR e comparação das sequências para sequências conhecidas de taxa identificado com precisão. O ADN pode ser amplificado utilizando iniciadores de controlo descritos no presente protocolo (para a região trnL-F) ou iniciadores outros disponíveis em outras publicações 13-15. A sequenciação é muito mais trabalho e dispendiosa do que usar o nosso procedimento simplificado. A qualidade dos iniciadores utilizados para a PCR é crítica para o sucesso do procedimento. Fizemos os iniciadores para esse procedimento disponível a partir de Bio oblíqua, Inc. ( <a href="http://www.obliquebio.com/web/" target="_blank">http://www.obliquebio.com/web/</a> , Huntsville, AL). A vantagem de ordenação dos iniciadores a partir de Bio oblíqua é que eles armazenar grandes números de alíquotas de cada iniciador a partir da série idêntica de amostra de produção como os iniciadores foram utilizados para a optimização no nosso laboratório. Consequentemente, não só primers têm a mesma sequência, mas they vêm do lote de produção exatamente o mesmo que foi usado neste protocolo. Usando iniciadores a partir do mesmo lote, pode ajudar a evitar variáveis ​​estranhas no procedimento que pode resultar de diferenças na qualidade dos iniciadores de PCR. Da mesma forma, enquanto outras polimerases Taq deve funcionar bem para PCR, a qualidade da polimerase Taq usado terá um impacto sobre a qualidade dos resultados de PCR. Para permitir uma melhor consistência na PCR reagentes, temos otimizado o protocolo utilizando reagentes de Clontech. A vantagem 2 Polimerase (Clontech, Mountain View, CA, Cat. # 639201 ou 639202) é uma mistura de um sólido, a polimerase Taq de arranque a quente e uma enzima prova de leitura de que ajuda a proporcionar alta especificidade e ampliações mais precisos. Como este protocolo baseia-DNA do cloroplasto, que é herdada da mãe em gramíneas, eventos de hibridação entre genótipos JBG cogongrass e não pode ser capturado com o nosso processo de identificação molecular. Nos casos em que é hypridization suspeCTED, recomendamos o uso de regiões nucleares que são herdadas de ambos os pais. O mais comumente utilizado região não plastid variável a considerar na genotipagem das plantas é a região ITS nuclear ribossomal 13-15,17. Actualmente, estão a avançar em direcção a multiplexação a amplificação do cloroplasto região trnL-F com a da região ITS nuclear no tubo de PCR mesmo. Multiplexação plastid com regiões do DNA nuclear seria potencialmente contornar as limitações do uso sozinho, no entanto, estes métodos requerem otimização e avaliação adicional para determinar a viabilidade caso a caso. O uso de métodos quantitativos PCR em tempo real (qPCR) e novas tecnologias, tais como faróis molecular (sondas fluorescentes primers), também estão sendo avaliados como métodos de genotipagem não-seguras e precisas de plantas. O protocolo apresentado aqui proporciona uma abordagem rápida e fiável para distinguir o JBG reverter da de tipo selvagem cogongrass. Encorajamos a utilizaçãors deste protocolo em contactar-nos para relatar os resultados derivados do uso deste protocolo. Tal informação compartilhada ajudará a fornecer informações sobre a distribuição de JBG reverte. Isso também irá ajudar os reguladores no USDA tomar decisões informadas sobre as ações que podem ser necessárias para contornar a propagação e hibridação potencial das variedades altamente invasivos cogongrass.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> DNeasy Usina Mini Kit </td><td> Qiagen, Valencia, CA </td><td> 69104 ou 69106 </td><td> Qualquer respeitável genômica kit DNA da planta que produz DNA de boa qualidade deve funcionar bem para estes procedimentos. </td></tr><tr><td> trnF (GAA)-F </td><td> Oblique Bio, Inc. </td><td> 3-0578 </td><td> Cartilha controle positivo para a frente </td></tr><tr><td> trnL (5 &#39;do exão)-C </td><td> Oblique Bio, Inc. </td><td> 3-0579 </td><td> Reverter cartilha controle positivo </td></tr><tr><td> trnLF-C-F1 </td><td> Oblique Bio, Inc. </td><td> 3-0864 </td><td> Atacante do tipo selvagem cartilha cogongrass </td></tr><tr><td> trnLF-C-R1 </td><td> Oblique Bio, Inc. </td><td> 3-0865 </td><td> Revertertipo selvagem cartilha cogongrass </td></tr><tr><td> trnLF-R-F2 </td><td> Oblique Bio, Inc. </td><td> 3-0866 </td><td> Encaminhar JBG e JBG reverter cartilha </td></tr><tr><td> trnLF-R-R2 </td><td> Oblique Bio, Inc. </td><td> 3-0867 </td><td> Reverter JBG e JBG reverter cartilha </td></tr><tr><td> Vantagem UltraPure PCR dNTP Mix </td><td> Clontech, Mountain View, CA </td><td> 639125 </td><td></td></tr><tr><td> Polimerase vantagem de 2 </td><td> Clontech, Mountain View, CA </td><td> 639201 ou 639202 </td><td> Uma boa leitura de prova, hot-start Taq polimerase </td></tr></tbody></table>

um método de genotipagem baseados em pcr para distinguir entre variedades do tipo selvagem e ornamental de imperata cylindrica</em

A PCR-based Genotyping Method to Distinguish Between Wild-type and Ornamental Varieties of Imperata cylindrica

De tipo selvagem I. cylindrica (cogongrass) é um dos melhores piores dez plantas invasoras do mundo, impactando negativamente os recursos agrícolas e naturais em 73 países diferentes na África, Ásia, Europa, Nova Zelândia, da Oceania e das Américas 1-2. Cogongrass forma rápida propagação, estandes monodominantes que deslocam uma grande variedade de espécies de plantas nativas e, por sua vez ameaçam os animais nativos que dependem dos deslocados espécies de plantas nativas para forragem e abrigo. Para aumentar o problema, uma variedade ornamental [I. cylindrica var. koenigii (Retzius)] é amplamente comercializado sob os nomes de &#39;Rubra&#39; Imperata cylindrica, Barão Vermelho, e grama sangue japonês (JBG). Esta variedade é supostamente estéril e não-invasivo e é considerado um ornamental desejável para suas folhas de cor vermelha. No entanto, nas condições corretas, JBG pode produzir sementes viáveis ​​(Carol Holko, 2009 comunicação pessoal) e pode reverter para um verde iforma nvasive que muitas vezes é indistinguível da cogongrass à medida que assume as características distintivas da variedade de tipo selvagem invasiva 4 (Figura 1). Isto torna a identificação usando morfologia uma tarefa difícil mesmo para taxonomistas bem treinados plantas. Reversão de JBG a um fenótipo agressivo verde também não é uma ocorrência rara. Usando a comparação de seqüências de codificação e regiões variáveis ​​do DNA nuclear e do cloroplasto tanto, temos confirmado que JBG foi revertido para o invasivo verde dentro dos estados de Maryland, Carolina do Sul e Missouri. JBG foi vendido e plantada no estado em quase todos os os EUA continental, onde não há uma infestação cogongrass ativo. A extensão do problema em reverter não é bem compreendido porque as plantas são revertidos em situação irregular e, muitas vezes destruída. A aplicação deste protocolo molecular fornece um método para identificar JBG reverte e pode ajudar a manter estas variedades de co-ocorrência de umnd possivelmente hibridação. Cogongrass é um outcrosser obrigatório e, quando cruzou com um genótipo diferente, pode produzir vento dispersa sementes viáveis ​​que se espalham sobre grandes distâncias cogongrass 5-7. JBG tem um genótipo ligeiramente diferente do que cogongrass e pode ser capaz de formar híbridos viáveis ​​com cogongrass. Para aumentar o problema, JBG é mais frio e mais tolerantes do que cogongrass 8-10, eo fluxo gênico entre estas duas variedades é susceptível de gerar híbridos que são mais agressivas, tolerantes, e résistente frio do que do tipo selvagem cogongrass. Enquanto tipo selvagem cogongrass atualmente infesta mais de 490 milhões de hectares no mundo todo, os EUA Sudeste que infesta mais de 500.000 hectares e é capaz de ocupar mais de os EUA como se espalha rapidamente para o norte devido ao seu nicho amplo e geográfica 3,7,11 potencial. O potencial de um cruzamento genético é uma preocupação séria para o USDA-APHIS Programa Semana Federal nocivas. Atualmente, o USDA-APHIS proíbe JBG em estados where há infestações maiores cogongrass (por exemplo, Flórida, Alabama, Mississippi). No entanto, impedindo que as duas variedades da combinação pode ser mais difícil como cogongrass e JBG expandir suas distribuições. Além disso, a distribuição do JBG reverter é actualmente conhecida e sem a capacidade de identificar esses variedades por morfologia, alguns infestações cogongrass pode ser o resultado de JBG reverte. Infelizmente, os actuais métodos de identificação molecular de dependem normalmente AFLP (Polimorfismos comprimento de fragmentos amplificados) e sequenciação de ADN, ambos os quais são demorados e dispendiosos. Aqui, nós apresentamos o primeiro rentável e confiável baseada em PCR método de genotipagem molecular para distinguir com precisão entre cogongrass e JBG reverter.

Nós fornecer um protocolo de genotipagem custo-eficácia e rápida molecular que emprega iniciadores variedade-PCR específicos que as diferenças de sequência alvo de ADN dentro da região espaçadora cloroplasto trnL-F para diferenciar entre as variedades de<em&gt; Imperata cylindrica</em&gt; (Cogongrass) que não podem ser distinguidos pela morfologia sozinho. Estas variedades incluem a erva federal listado nocivo, cogongrass e estreitamente relacionada, a variedade difundida ornamental, eu<em&gt;. cylindrica</em&gt; Var.<em&gt; Koenigii</em&gt; (Grama sangue japonês).

Um método de genotipagem baseados em PCR para distinguir entre variedades do tipo selvagem e Ornamental de Imperata cylindrica</em

A *I. cylindrica* (capim-gordura) do tipo selvagem é uma das dez piores plantas invasoras do mundo, impactando negativamente os recursos agrícolas e naturais em ...

O principal objetivo deste procedimento é fornecer um protocolo de genotipagem molecular rápido e econômico, capaz de diferenciar entre variedades de Retta cylindrica, comumente chamada de capim-gon, que não podem ser distinguidas apenas pela morfologia. Isso é realizado primeiramente identificando e isolando tecido de uma variedade de capim-gon de interesse. O próximo passo é extrair o DNA nuclear e plastidial do tecido coletado.Em seguida, é realizada uma reação em cadeia da polimerase no DNA extraído utilizando primers específicos para variedades que visam diferenças de sequência na região LF do PLAs, bem como controles positivo e negativo apropriados. O passo final consiste em realizar eletroforese em gel para cada uma das quatro reações de PCR, a fim de visualizar os produtos amplificados. Em última análise, a variedade de capim-gordura coletada é determinada por meio da análise das bandas de produtos de PCR específicas para variedade obtidas no gel. Plantas invasoras custam aos Estados Unidos cerca de 3,4 bilhões de dólares anualmente, causando danos substanciais aos recursos agrícolas e naturais.A imparato Electrica do tipo selvagem, também conhecida como grama Cogan, é uma das dez piores ervas daninhas invasoras do mundo. A grama Cogan forma extensões de monocultivo que deslocam a vegetação nativa e, por consequência, os animais que dependem dessa vegetação nativa. Atualmente, a grama Cogan infesta 490 milhões de hectares em todo o mundo e cerca de 500.000 hectares nos Estados Unidos. Uma variedade ornamental de ti de tus centrica é amplamente comercializada sob os nomes de tus Centrica, Arbra, red Baren e Japanese blood crass, como também chamaremos de JBG. Essa variedade é supostamente estéril e não invasiva, sendo considerada desejável por suas folhas de cor vermelha.Sob certas condições, a grama-sangue-japonesa pode produzir sementes viáveis e reverter para uma forma totalmente verde que é indistinguível da grama cogan selvagem. Como é possível observar, ambas possuem folhas verdes e são maiores do que a variedade ornamental tradicional, com folhas maiores. Além disso, as plantas revertidas e do tipo selvagem possuem rizomas maiores do que a variedade ornamental, aumentando seu potencial reprodutivo assexuado.A reversão torna a identificação apenas por meio da morfologia uma tarefa difícil. Os métodos moleculares fornecem um meio para distinguir com precisão plantas invasoras e materiais vegetais que não podem ser identificados por meios visuais convencionais.Os métodos moleculares são essenciais para proteger contra a disseminação e introdução de plantas invasoras. A aplicação deste protocolo molecular fornece um meio para distinguir com precisão os reverts da grama-sangue-japonesa da grama Kogan. Este protocolo pode ajudar a prevenir a coexistência com a grama Kogan e a possível formação de híbridos viáveis.A principal vantagem dessa técnica em relação a técnicas existentes, como polimorfismo no comprimento de fragmentos amplificados, ou análise AFLP, e coisas como sequenciamento de DNA, é que ela fornece uma técnica de genotipagem molecular muito eficaz em termos de custo e rápida, capaz de distinguir facilmente a diferença entre o capim kogan selvagem e as variedades de capim-sangue-japonês. A demonstração da técnica será feita por Joseph Hery, um aluno de graduação do nosso laboratório. Primeiro, identifique um espécime de um local onde o capim-gon ou o capim-sangue-japonês estejam crescendo e precisem ser diferenciados um do outro.A grama-sangue-japonesa é facilmente distinguida da grama tipo selvagem Kogan por suas folhas vermelhas brilhantes. No entanto, a reversão da grama-sangue-japonesa é quase indistinguível da grama Kogan, pois ambas possuem folhas verdes mais longas, maior área foliar e rizomas maiores do que a grama-sangue-japonesa ornamental. Este método pode ser utilizado em tecidos foliares frescos, congelados e recentemente secos.Se os tecidos forem armazenados para extração de DNA em uma data posterior, o melhor método é congelar e armazenar o tecido imediatamente a menos 80 graus Celsius. Se o armazenamento a seco for necessário, coloque o tecido em um envelope de papel e guarde o envelope em gel de sílica desidratado ou outros dessecantes ativos à temperatura ambiente. Se o tecido fresco for utilizado, certifique-se de que o DNA seja extraído dentro de três horas após a coleta para evitar degradação.Este procedimento utiliza o mini kit DNEZ para plantas da Kyogen, conforme as instruções do fabricante, com uma pequena modificação. O procedimento foi adaptado para utilizar mais de 100 miligramas de tecido fresco ou congelado ou mais de 20 miligramas de tecido seco. Primeiro, triture mais de 100 miligramas de tecido foliar fresco ou congelado, ou mais de 20 miligramas de tecido foliar seco, até obter um pó fino, utilizando três rodadas de nitrogênio líquido com moagem em almofariz e pistilo resfriados.Pese o pó congelado de tecido fresco ou congelado em alíquotas de 100 miligramas. Se estiver usando tecido foliar seco, pese o pó em alíquotas de 20 miligramas. Após esta etapa, prossiga com a extração de DNA de acordo com as instruções do fabricante, utilizando um espectrofotômetro como o teste no espectrofotômetro NanoDrop, DNA, qualidade e quantidade; bons rendimentos de DNA devem estar entre 50 e 150 nanogramas por microlitro, com as razões 260/280 e 230/280 próximas de 2,0, conforme mostrado aqui.Realize a eletroforese utilizando um gel padrão de 1% AROS. Verifique a presença de bandas relativamente grandes maiores que 10 KB, com pouca ou nenhuma manchação devido à contaminação por RNA; se a concentração de DNA for alta, dilua as amostras para 70 nanogramas por microlitro para as etapas subsequentes. Os iniciadores de PCR utilizados neste protocolo, indicados pelas setas vermelha e verde, baseiam-se nas diferenças de sequência entre a região espaçadora LF do capim-plastered e os genótipos do capim-sangue-japonês.Essas diferenças ocorrem na forma de polimorfismos de nucleotídeo único e inserções e deleções indicadas pelas setas pretas verticais, o que permite o desenvolvimento de iniciadores específicos para cada variedade. Ao posicionar os iniciadores nos locais de sequências únicas, as sequências dos iniciadores estão contidas na parte escrita do protocolo; para cada conjunto de amostras de DNA isolado, monte duas reações de PCR de 50 microlitros em tubos de PCR de parede fina de 0,2 mililitro sobre GELO, utilizando cada conjunto de iniciadores de acordo com o protocolo escrito. Se a concentração de DNA for baixa, pode-se adicionar mais DNA a cada reação, ajustando-se a quantidade de água duplamente destilada livre de nucleases, de modo que o volume total da reação permaneça em 50 microlitros.Não utilize mais de cinco microlitros de DNA ou 10% do volume total por reação, pois impurezas contidas nas amostras de DNA podem inibir as reações de PCR. Para garantir que todos os reagentes de PCR estejam funcionando corretamente, prepare cuidadosamente o controle positivo. Usando os primers do controle positivo, monte o controle negativo com o mesmo conjunto de primers do controle positivo, mas substitua o DNA extraído por água bidestilada. Neste ponto, haverá um total de quatro reações de PCR para cada amostra em teste. Em seguida, realize as amplificações por PCR em um termociclador equipado com tampa aquecida, utilizando os parâmetros de ciclagem de PCR descritos no protocolo escrito. Pode ser necessária a otimização da temperatura de annealing dos primers, dos tempos de extensão e do número de ciclos, dependendo da qualidade do DNA, dos primers, da polimerase ou do tipo de termociclador utilizado.Após a conclusão das reações de PCR, separe os produtos de PCR em um gel a 1% utilizando eletroforese padrão. Execute as amostras a aproximadamente 120 volts até que a frente do corante atinja três quartos do comprimento total do gel. Visualize o gel sob luz ultravioleta e examine as bandas resultantes para verificar se um fragmento de DNA apropriado foi amplificado.Este gel representativo mostra os resultados da eletroforese de produtos de PCR derivados de amostras de DNA de grama Kogan, grama japonesa sangrenta e reverter da grama japonesa sangrenta combinadas com iniciadores específicos para grama Kogan e JBG, bem como o controle positivo turn LF e um controle negativo sem molde. O conjunto de iniciadores do controle positivo turn LF funciona igualmente bem para grama Cogan, grama japonesa sangrenta, revertido da grama japonesa sangrenta e outras gramíneas, e resultará em uma banda de 890 pares de bases. Se todos os reagentes de PCR estiverem livres de contaminantes de DNA, a reação do controle negativo não produzirá um produto de PCR.Se a amostra de DNA for derivada de capim kogan selvagem, uma reação de PCR utilizando o conjunto de primers específico para o capim kogan resultará em uma única banda com cerca de 595 pares de bases, enquanto os primers específicos para JBG não resultarão em nenhuma banda. Da mesma forma, se a amostra de DNA for derivada de JBG ou de uma reação J-B-G-A-P-C-R revertida, o uso do conjunto de primers específico para JBG resultará em uma única banda com aproximadamente 594 pares de bases, enquanto os primers específicos para o capim kogan não produzirão nenhuma banda.Como JBG e JBG revertido possuem a mesma sequência de ácidos nucleicos, terão, portanto, padrões de bandas idênticos. No entanto, as diferenças morfológicas entre JBG e os reverts de JBG são bastante evidentes, de modo que, embora os resultados da PCR sejam os mesmos, as variedades de JBG são fáceis de distinguir no nível da planta. O sequenciamento de DNA dos produtos da PCR pode identificar possíveis alterações nas sequências de DNA de diferentes ecótipos de capim cogan.O desenvolvimento desta técnica fornece o primeiro método molecular simplificado que pode distinguir com precisão entre o tipo selvagem de K e grama e a forma revertida de sua variedade ornamental, grama-sangue-japonesa. Incentivamos os usuários deste protocolo a entrar em contato conosco para relatar os resultados obtidos com o uso deste protocolo. Essas informações compartilhadas ajudarão a fornecer dados sobre a distribuição da grama-sangue-japonesa.Isso também ajudará os reguladores do USDA a tomarem decisões informadas sobre ações que possam ser necessárias para evitar a disseminação e a hibridização potencial das variedades altamente invasivas de capim Cogan.

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Biologia

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