Análises morfométricas de secções da retina
19 de fevereiro de 2012
Este vídeo demonstra três tipos de análise morfométrica da retina, que incluem a medição da espessura da camada nuclear interna, a quantificação do número de células ganglionares da retina (RGCs) e medindo os tamanhos dos RGCs. A técnica pode oferecer uma plataforma simples, mas científica para análises morfométricas.
Olá, sou Regina do laboratório de Doença Neurodegenerativa do Departamento de Anatomia da Universidade de Hong Kong. Hoje vou mostrar como realizar a análise de progressão da sessão retiniana. Vamos começar. Antes de realizar qualquer análise, uma regressão da amostra retiniana e quatro MyFitness devem passar pela coloração com hematoxilina e eosina.
Depois disso, a sessão retiniana é dividida em quatro regiões. São elas a região periférica superior, a região central superior, a região central inferior e a região periférica inferior. Após definir as regiões, uma imagem de cada região é adquirida com aumento de 10 vezes 40 sob o microscópio de feixe claro do decor.
Agora estamos prontos para analisar as informações morfológicas da retina. Esta sessão demonstrará como medir a espessura da camada nuclear interna. Abra o software chamado thorough investigator.
Escolha os 40 tipos, depois selecione abrir imagem na barra principal dupla. Na guia arquivo, escolha uma imagem de uma região retiniana que deseja analisar. Escolha o tipo de linha de contorno no menu suspenso da barra principal dupla.
Certifique-se de que o movimento automático esteja ativado. Você pode ampliar a imagem clicando no botão de zoom in. Você pode usar o botão de zoom out para reduzir o tamanho da exibição da imagem.
Tanto o rastreamento quanto o espécime podem ser movidos ao longo de quatro direções diferentes ao acionar os botões de movimento da causa. Clique com o botão direito na janela de rastreamento e selecione o rastreamento simples de trincas. Desenhe a linha de contorno ao longo da borda interna da camada interna.
Se for cometido um erro, interrompa no painel de rastreamento e pressione o botão desfazer para apagar o último ponto desenhado. Continue o rastreamento até o último ponto da linha. Quando o desenho estiver concluído, interrompa no painel de rastreamento, escolha um contorno aberto e inicie a imagem clicando em ampliar.
Clique com o botão esquerdo na janela de rastreamento. Para ampliar a imagem, selecione um marcador na barra de marcadores dois em Marcus. No ponto de junção.
Após adicionar todos os marcadores, selecione o ícone do marcador na posição da barra do marcador dois e o cursor. No centro de um dos marcadores, selecione a opção de medir ângulos rapidamente na guia dois, clicando com o botão direito na janela de rastreamento e, em seguida, selecione a opção contínua. Meça o ângulo clicando primeiro no centro de um marcador adjacente ao marcador selecionado.
Para uma extremidade do segmento de linha, mova-se o mais próximo possível ao centro da área de interesse. Marcador e fissura. Novamente, estenda a linha de elástico até a borda externa da camada inia e ajuste o ângulo até 90 graus.
Acesse a fissura esquerda no ponto desejado. Posicione um diálogo que mostre a medição do ângulo, o qual aparecerá logo após o clique. Pressione a tecla Enter mantendo o mouse ainda à esquerda.
Clique na janela de rastreamento para que a linha seja desenhada de uma extremidade até a nova extremidade selecionada. Interrompa na janela de rastreamento e escolha um controle aberto. Precisamos realizar quatro medições dos dedos da camada nuclear interna em cada região, onde quatro linhas serão desenhadas.
Perpendicularmente da base de controle noturna até a borda externa da camada nuclear da Índia e lance a imagem para que você possa ver a borda claramente. Se a ponta da linha não estiver na parte externa da camada nuclear interna, podemos conectá-las ou encurtar a linha no modo de edição. Selecione o modo de edição e escolha a linha.
Clique na janela de rastreamento e escolha um ponto de busca no controle elétrico, adicione um ponto na borda externa enquanto a edição do ponto deve ser ao longo da mesma linha. Exclua o ponto original. Um novo alinhamento pode então ser obtido.
Reduza o tamanho da imagem clicando no botão de zoom para fora. Desative o modo de edição e desenhe o último segmento de linha. Após desenhar as linhas de ordenação, selecione o modo de edição.
Clique com o botão direito na janela de rastreamento e posicionamos os quatro segmentos de linha conforme necessário. Agora podemos obter as quatro medições pressionando o botão de medição CONT. Selecione essas quatro medições e cole-as em um especialista clicando em copiar.
Para clicar na bola, selecione "Salvar como" na guia arquivo. Os dados de rastreamento podem ser salvos como um arquivo de dados. Nesta parte, vamos quantificar o número de células de cauda vermelha do gagan; selecione a imagem para abrir.
Sob a guia arquivo, escolha uma imagem de uma região retiniana desejada que você gostaria de analisar. Primeiramente, precisamos identificar quais são as células vivas e quais são as células mortas. Aquelas células com formato aproximadamente regular, com contornos sutis e núcleo claramente observado, são consideradas como células ganglionares retinianas vivas.
Aquelas células pequenas e condensadas são consideradas como aquela célula. Escolha o tipo de linha de contorno no menu suspenso da barra principal. Desenhe a linha ao longo da borda da camada de fibras esquerda e o rastreamento com a opção e contorno aberto.
Adicione em cada extremidade, coloque um marcador na ponta da linha e o outro na posição próxima à equipe. Selecione o ícone de marcador na barra de marcador dois. Posicione o cursor no centro dos marcadores.
Na ponta, selecione medição rápida de ângulos na guia. Clique com o botão direito duas vezes na janela de rastreamento e selecione a opção contínua, apenas as linhas elásticas, e meça um ângulo de 19 graus. Pressione a tecla Enter logo após uma caixa de dólar ser selecionada.
Mas lembre-se de que o rato ainda está ao mesmo tempo à esquerda. Interrompa a janela de rastreamento para que uma nova linha possa ser especialmente estendida a partir da ponta. Interrompa na janela de rastreamento e escolha um controle aberto.
Traceje outra linha nova exatamente da mesma maneira que na outra extremidade. Criamos duas delimitações dentro das quais o número de células ratin gagan é contado. Selecione um tipo de marcador e fixe um em cada cinco células.
Escolha um limite como linha de exclusão, na qual a célula que toca não é contada. Selecione outro tipo de marcador para as células mortas. O número de cada tipo de espaço marcador será exibido ao lado do ícone do marcador, conforme apropriado.
No marcador de duas barras, selecione o modo de edição e selecione a linha de base do contorno. Interrompa-a na janela de rastreamento e refaça o final da linha. O nome da linha de base do contorno pode ser obtido pressionando o botão de medição de contorno.
O número de células pode então ser expresso por milímetro do nome. Então vamos salvar como na guia arquivo. Os dados de rastreamento e do marcador podem ser salvos como um arquivo de dados.
Esta parte demonstrará como medir o lado celular de uma imagem aberta de célula ganglionar retiniana. Na guia arquivo, escolha uma imagem de uma região retiniana desejada que você gostaria de analisar. Escolha uma célula ganglionar viva de acordo com os critérios descritos na parte anterior.
Na célula viva, escolha o tipo de linha de contorno a partir do ponto de anotação das duas barras principais. Desenhe uma linha de contorno ao longo da circunferência da célula aproximadamente no final, clique com o botão direito na janela de rastreamento e selecione finalizar contorno fechado. A área da célula será exibida no item área na caixa de diálogo de medição de controle.
Este vídeo demonstrou três métodos simples que podem analisar objetivamente a retina. Esperamos que este vídeo seja útil.
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Visão Geral
Este vídeo demonstra três tipos de análises morfométricas da retina, incluindo a medição da espessura da camada nuclear interna, a quantificação do número de células ganglionares da retina (RGCs) e a medição dos tamanhos das RGCs. A técnica fornece uma plataforma científica para essas análises.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Morfoemetria Retiniana
- Quantificação Celular
Contexto
- A saúde da retina é essencial para a visão.
- As análises morfométricas ajudam a compreender doenças retinianas.
- As células ganglionares da retina são fundamentais para a transmissão de informações visuais.
- A medição das CCRs pode fornecer informações sobre condições neurodegenerativas.
Objetivo do Estudo
- Demonstrar técnicas morfométricas para análise da retina.
- Quantificar as células ganglionares da retina e seus tamanhos.
- Medir a espessura da camada nuclear interna.
Métodos Utilizados
- Preparação de amostras de retina.
- Coloração com hematoxilina e eosina (H&E).
- Divisão da retina em regiões definidas para análise.
- Aquisição de imagens em diversas ampliações.
Resultados Principais
- Medição bem-sucedida da espessura da camada nuclear interna.
- Quantificação de células ganglionares da retina.
- Avaliação dos tamanhos das CGR em diferentes regiões da retina.
- Demonstração de uma abordagem sistemática para a morfometria retiniana.
Conclusões
- As técnicas apresentadas são eficazes para a análise da retina.
- Esses métodos podem auxiliar na compreensão das patologias retinianas.
- Estudos futuros podem se basear neste arcabouço para pesquisas adicionais.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
A análise morfométrica objetiva de cortes retinianos permite a quantificação precisa da perda neuronal e das alterações estruturais, apoiando a validação de alvos em modelos de doenças neurodegenerativas. Ao reduzir a variabilidade das medições e aumentar a sensibilidade a mudanças mínimas, esta abordagem melhora a confiança preditiva na avaliação da eficácia terapêutica. Oferece uma plataforma transponível para avaliar patologias retinianas em todas as fases da descoberta de fármacos.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Valor Científico: Permite a investigação de hipóteses terapêuticas mediante a quantificação de alterações na densidade de células ganglionares da retina e no tamanho do corpo celular em modelos de doença.
- Valor Operacional: Apoia a desmistificação biológica por meio da medição reprodutível da espessura da camada nuclear interna e da morfometria das camadas celulares.
- Valor Preditivo: Facilita a triagem de portfólios ao fornecer dados morfométricos absolutos e passíveis de reprodução para comparação entre estudos.
Desenvolvimento de Triagem e Ensaio
- Prontidão do Ensaio: Prepara sistemas biológicos validados para fluxos de trabalho downstream por meio de protocolos padronizados de aquisição de imagens baseados em regiões e rastreamento.
- Saída Quantitativa: Gera medidas absolutas de comprimento e tamanho diretamente exportáveis para arquivos analíticos, melhorando a consistência dos dados.
- Escalabilidade: Permite avaliação confiável de compostos por meio da redução da variabilidade do observador e aumento da sensibilidade na detecção de mínimas alterações retinianas.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Relevância para a Doença: Alinha-se a estratégias translacionais de biomarcadores ao associar a perda de células ganglionares da retina (RGC) e alterações na espessura das camadas aos resultados terapêuticos em modelos de glaucoma e excitotoxicidade.
- Continuidade Pré-clínica: Apoia decisões de avanço ajustadas ao risco por meio de desfechos morfométricos objetivos e repetíveis em diferentes regiões da retina.
- Redução de Riscos Mecanísticos: Concentra-se na avaliação preditiva ao isolar alterações estruturais independentemente de ensaios funcionais.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este método integra-se ao continuum de descoberta, desde a validação inicial do alvo até a identificação de compostos líderes e a avaliação pré-clínica, fornecendo leituras estruturais que complementam as avaliações funcionais em modelos de doenças retinianas.
- Biologia da Descoberta: Apoia a verificação de hipóteses e a elucidação de vias ao quantificar número de células, tamanho e espessura da camada em regiões retinianas definidas.
- Triagem: Garante prontidão e reprodutibilidade do ensaio por meio de análise padronizada de cortes corados com H&E e rastreamento orientado por software.
- Análises: Fornece medidas quantitativas de variáveis dependentes (contagem celular, tamanho do corpo celular, espessura da camada), permitindo comparação estatística entre grupos tratados.
- Pesquisa Translacional: Conecta-se à continuidade pré-clínica por meio de desfechos estruturais relevantes para a doença em modelos de excitotoxicidade induzida por NMDA, isquemia-reperfusão e glaucoma.
- Reutilização Empresarial: Estabelece uma capacidade reutilizável de morfometria retiniana em múltiplos modelos de doenças e intervenções terapêuticas.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Confiança preditiva na validação de alvos por meio da redução da ambiguidade mecanicista na neurodegeneração retiniana.
- Valor Operacional: Padronização, reprodutibilidade e escalabilidade das medidas morfométricas entre operadores e locais.
- Valor Estratégico: Decisões de avanço ou interrupção de projetos mais precisas, eficiência no uso de capital e redução de riscos biológicos em fases tardias por meio da detecção precoce de biomarcadores estruturais.
- Impacto na Carteira: Priorização e decisões de avanço ajustadas ao risco com base em alterações estruturais retinianas quantificáveis.
Considerações sobre a Implementação
- Expertise necessária em histologia, microscopia e operação de software de morfometria (Stereo Investigator).
- Os equipamentos necessários incluem microscópio de campo claro, sistema de rastreamento computadorizado e software de análise de imagens.
- A padronização entre equipes exige adesão ao protocolo quanto à definição de regiões, técnica de rastreamento e replicação das medições.
- As considerações para adaptação entre diferentes sistemas modelo envolvem o ajuste da magnificação, da amostragem da região e dos critérios de identificação celular.
- As limitações práticas incluem a dependência da qualidade dos cortes teciduais e da consistência da coloração para uma delimitação precisa das bordas.
