Name: Análises morfométricas de secções da retina (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 33 s
Description: Aprenda análises morfométricas da retina para neurociência, medindo a espessura da camada nuclear interna e quantificando células ganglionares retinianas. Este método sistemático auxilia pesquisadores a compreender patologias oculares.

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O trabalho de pesquisa olho neste laboratório é apoiado pela Fundação Americana de Saúde Adjunto, Azaléia (1972) Fundo de Doações, e do Fundo HKU Projeto Pequeno (20097176185).

1. Ferramentas Microscópio, Nikon Investigador Stereo, MBF Bioscience - MicroBrightField, Inc. 2. Preparação <ol><li> Antes de trabalhar em qualquer análise morfométrica, cada amostra de retina é seccionado em 4 mícrons de espessura e sofre a coloração H &amp; E. </li><li> A secção de retina é dividida em 4 regiões - região periférica superior, a região central superior, a parte inferior região periférica, e quanto menor região central. </li><li> Depois de definir as regiões, uma imagem de cada região é adquirida em ampliações 10x40 sob o microscópio feixe luminoso da Nikon. </li><li> Agora, estamos prontos para analisar a morfometria da retina. </li></ol> 3. Medição da espessura INL <ol><li> Quatro medições de espessura INL em cada região foram medidos. Quatro linhas serão desenhadas perpendicularmente a partir da base de contorno para a borda externa do INL. </li><li>Abra o software chamado Stereo Investigator e escolher a lente 40x da barra de ferramentas principal. </li><li> Selecione "Abrir Imagem" na guia "Arquivo". Escolha a imagem de uma região desejada da retina que você gostaria de analisar. </li><li> Escolha o tipo de linha de contorno da caixa de lista suspensa da barra de ferramentas principal e pressione o botão "Auto Move" botão. </li><li> Botão direito do mouse na janela de rastreamento, e selecione "Simple Clique Tracing". </li><li> Desenhe a linha de contorno ao longo da fronteira interna do INL. </li><li> Quando o desenho é feito, com o botão direito na janela de rastreamento e escolha "Contour Open End". </li><li> Seleccionar um marcador na barra de ferramentas marcador e adicionar marcadores nos pontos de junção. </li><li> Depois de adicionar todos os marcadores, desmarcar o ícone de marcador na barra de ferramentas do marcador. </li><li> Posicionar um cursor no centro de um dos marcadores. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 1"><ol start="11"><li> Selecione "QuickMedir o ângulo "na guia" Ferramentas ". </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 2"><ol start="12"><li> Botão direito do mouse na janela de rastreamento e desmarcar a opção "Contínuo". </li><li> Medir um ângulo clicando primeiro no centro de um marcador, que é adjacente ao marcador seleccionado para uma extremidade do segmento de linha. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 3"><ol start="14"><li> Em seguida, mova o mouse para o centro do marcador em questão e clique novamente. </li><li> Estender a linha de elástico para a borda externa do INL. </li><li> Ajustar o ângulo até 90 ° é atingido. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 4"><ol start="17"><li> Clique deixado na posição desejada. Uma caixa de diálogo mostrando uma medição do ângulo irá aparecer logo após o clique. </li><li> Pressione o botãoTecla "Enter", mantendo o rato ainda. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig5.jpg" alt="Figura 5" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 5"><ol start="19"><li> Clique esquerdo da janela de rastreio de modo que uma linha é traçada a partir de uma extremidade à extremidade novo seleccionada. </li><li> Botão direito do mouse na janela de rastreamento e escolha "Contour Open End". </li></ol><img src="/files/ftp_upload/3377/3377fig6.jpg" alt="Figura 6" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 6"><ol start="21"><li> Desenhar as linhas outros em diferentes posições no exactamente da mesma maneira como descrito anteriormente. </li><li> Depois de desenhar todas as linhas, selecione o modo de edição e renomear os 4 segmentos de linha em conformidade. </li><li> Quatro medidas podem ser obtidas pressionando "Medição Contour" botão. </li><li> Selecione essas medidas 4 e colá-los para uma planilha, clicando em "Copiar para a Área de Transferência". </li><li> Selecione "Salvar como" na aba "Arquivo". Os dados de rastreamento pode ser salva como um arquivo de dados. </li></ol><ol><li> Selecione "Abrir Imagem" na guia "Arquivo". Escolha a imagem de uma região desejada da retina que você gostaria de analisar. </li><li> Escolha o tipo de linha de contorno da caixa de lista suspensa da barra de ferramentas principal. </li><li> Desenhar uma linha de contorno ao longo da fronteira da camada de fibras nervosas (NFL). </li><li> Termine o rastreamento com o "Contour Open End" opção. </li><li> Em cada extremidade, adicionar um marcador na ponta da linha e outro na posição perto da ponta. </li><li> Desmarque o ícone marcador na barra de ferramentas do marcador. </li><li> Posicionar um cursor no centro dos marcadores na ponta. </li><li> Selecione "Angle medida rápida" na guia "Ferramentas". </li><li> Botão direito do mouse na janela de rastreamento e desmarcar a opção "Contínuo". </li><li> Ajustar as linhas da faixa de borracha e medir um ângulo de 90 °. </li><li> Pressione a tecla "Enter" depois de uma caixa de diálogo é apareceu. </li><li> Esquerda clique em tele rastreio janela de modo que uma nova linha pode ser estendida perpendicularmente a partir da ponta. </li><li> Desenhe outra linha nova no exatamente da mesma maneira no outro fim. </li><li> Dois limites são criados dentro do qual o número de RGCs é contado. </li><li> Escolha uma fronteira como uma linha de exclusão que os toques de células não é contado. </li><li> Selecione um tipo de marcador e anexar um para cada célula viva. </li><li> Selecione outro tipo de marcador para as células mortas. </li><li> O número de cada tipo de marcadores colocados será exibido com o ícone marcador em conformidade na barra de ferramentas marcador. </li><li> Selecione o modo de edição e pegar a linha de base de contorno. Botão direito do mouse na janela de rastreamento e renomear a linha. </li><li> O comprimento da linha de base contorno pode ser obtido por compressão de "medição de contorno" botão. </li><li> O número de células podem então ser expresso por mm de comprimento. </li><li> Selecione "Salvar como" na aba "Arquivo". Orastreamento e os dados de marcadores podem ser salvos como um arquivo de dados. </li></ol> 5. Medindo o tamanho da célula de uma célula RGC <ol><li> Selecione "Abrir Imagem" na guia "Arquivo". Escolha a imagem de uma região desejada da retina que você gostaria de analisar. </li><li> Zoom em uma célula viva e escolha o tipo de linha de contorno da caixa de lista suspensa da barra de ferramentas principal. </li><li> Desenhar uma linha de contorno ao longo da circunferência da célula. </li><li> Por volta do fim, com o botão direito na janela de rastreamento e selecione "End contorno próximo". </li><li> A área da célula será exibido no item de Área na caixa de diálogo Contorno Medição. </li></ol>

<ol><li>Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Methyl-D-Aspartate+%28NMDA%29%C3%A2%E2%82%AC%E2%80%9CInduced+Apoptosis+in+Rat+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)â€“Induced Apoptosis in Rat Retina.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).</li>
<li>Lam, T. T., Abler, A. S., Tso, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+and+caspases+after+ischemia-reperfusion+injury+in+rat+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Apoptosis and caspases after ischemia-reperfusion injury in rat retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 40, 967-975 (1999).</li>
<li>Luo, X. G., Chiu, K., Lau, H. S., Lee, V. W. H., Yung, K. K. L., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Selective+Vulnerability+of+Retinal+Ganglion+Cells+in+Rat+Chronic+Ocular+Hypertension+Model+at+Early+Phase%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The Selective Vulnerability of Retinal Ganglion Cells in Rat Chronic Ocular Hypertension Model at Early Phase.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 29 (8), 1143-1151 (2009).</li>
<li>Han, Y. S., Chung, I. Y., Park, J. M., Yu, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effect+of+citicoline+on+retinal+cell+damage+induced+by+kainic+acid+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Korean+J.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effect of citicoline on retinal cell damage induced by kainic acid in rats.</a> Korean J. Ophthalmol. 19, 219-226 (2005).</li>
<li>Hernandez, M., Urcola, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+ganglion+cell+neuroprotection+in+a+rat+model+of+glaucoma+following+brimonidine%2C+latanoprost+or+combined+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal ganglion cell neuroprotection in a rat model of glaucoma following brimonidine, latanoprost or combined treatments.</a> Exp. Eye Res. 86, 798-806 (2008).</li>
<li>Chan, H. C., Chang, R. C. C., Ip, A. K. C., Chiu, K., Yuen, W. H., Zee, S. Y., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effects+of+Lycium+barbarum+Lynn+on+protecting+retinal+ganglion+cells+in+an+ocular+hypertension+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effects of Lycium barbarum Lynn on protecting retinal ganglion cells in an ocular hypertension model of glaucoma.</a> Experimental Neurology. 203, 269-273 (2007).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

1. Como obter uma medição de espessura mais precisa? Você pode ampliar a imagem clicando em "Zoom in" e à esquerda, clique na janela de rastreamento. A fronteira INL pode ser visto claramente. Se a ponta da linha não está na borda externa do INL, podemos ajustar a linha sob o modo de edição. Após escolher a linha em causa, com o botão direito na janela de rastreamento e escolha "Ponto de Inserção na Contour Selecionado". Um ponto pode ser adicionado na fronteira exterior, enquanto o ponto adici...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/3377">Morphometric Analyses of Retinal Sections</a>. There was an error with an author's name.

Erratum: Morphometric Analyses of Retinal Sections

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Tipo </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> Investigador Stereo </td><td> MBF Software Análise Bioscience </td><td> Campo MicroBright </td><td></td></tr><tr><td> Microscópio </td><td> Olympus BX51 </td><td> Olympus Corporation </td><td> BX51 </td></tr></tbody></table>

análises morfométricas de secções da retina

Morphometric Analyses of Retinal Sections

Análises morfométricas de secções da retina têm sido utilizados na análise doenças da retina. Para exemplos, as células neuronais foram significativamente perdido na camada de células ganglionares da retina (RGCL) em modelos de ratos com N-metil-D-aspartato (NMDA)-induzida excitotoxicidade 1, lesão de isquemia-reperfusão da retina e glaucoma 2 3. Redução do INL e interior camada plexiforme (IPL) espessuras foram invertidos com o tratamento com citicolina em olhos de ratos submetidos a excitotoxicidade do glutamato mediada pelo ácido caínico 4. Alteração da densidade de RGC e tamanhos do soma foram observadas com tratamentos medicamentosos diferentes em olhos com pressão intra-ocular elevada 3,5,6. Portanto, ter métodos objetivos de analisar as morphometries na retina podem ser de grande importância na avaliação de patologias da retina e da eficácia de estratégias terapêuticas. A estrutura da retina é multi-camadas e vários tipos diferentes de neurônios exir na retina. Os parâmetros morfométricos do retina tais como o número de células, o tamanho da célula e da espessura das camadas de diferentes são mais complexas do que o sistema de cultura celular. Logo no início, estes parâmetros podem ser detectadas usando software de imagem de outro comercial. Os valores são normalmente de valor relativo, e mudando para o valor exacto pode necessitar de cálculo mais preciso. Além disso, o traçado do tamanho da célula e morfologia pode não ser preciso e suficientemente sensível para a análise estatística, especialmente no modelo de glaucoma crónico. As medições utilizados neste protocolo fornecido um modo mais preciso e rápido. E o comprimento absoluto da linha e tamanho da célula pode ser directa e fácil de ser copiado para outros arquivos. Por exemplo, descrevemos a história da margem de núcleos mais interior e exterior, no INL e formou uma linha, em seguida, usando o software para desenhar um ângulo de 90 graus para medir a espessura. Embora sem a ajuda do software, a linha oblíqua e talvez a mudança de espessura da retina podenão ser repetitivo entre observadores individuais. Além disso, o número e densidade de RGCs também pode ser quantificada. Este protocolo com sucesso diminui a variabilidade na quantificação características da retina, aumenta a sensibilidade na detecção de alterações mínimas. Este vídeo vai demonstrar três tipos de análises morfométricas das secções da retina. Eles incluem a medição da espessura INL, quantificar o número de RGCs e medição dos tamanhos de RGCs em valor absoluto. Estas três análises são realizadas com Stereo Investigator (MBF Bioscience - MicroBrightField, Inc.). A técnica pode oferecer uma plataforma simples, mas científica para análises morfométricas.

Este vídeo demonstra três tipos de análise morfométrica da retina, que incluem a medição da espessura da camada nuclear interna, a quantificação do número de células ganglionares da retina (RGCs) e medindo os tamanhos dos RGCs. A técnica pode oferecer uma plataforma simples, mas científica para análises morfométricas.

Análises morfométricas de secções da retina

Análises morfométricas de cortes retinianos têm sido utilizadas no exame de doenças retinianas. Por exemplo, houve uma perda significativa de células neuronais no...

Olá, sou Regina do laboratório de Doença Neurodegenerativa do Departamento de Anatomia da Universidade de Hong Kong. Hoje vou mostrar como realizar a análise de progressão da sessão retiniana. Vamos começar. Antes de realizar qualquer análise, uma regressão da amostra retiniana e quatro MyFitness devem passar pela coloração com hematoxilina e eosina.Depois disso, a sessão retiniana é dividida em quatro regiões. São elas a região periférica superior, a região central superior, a região central inferior e a região periférica inferior. Após definir as regiões, uma imagem de cada região é adquirida com aumento de 10 vezes 40 sob o microscópio de feixe claro do decor.Agora estamos prontos para analisar as informações morfológicas da retina. Esta sessão demonstrará como medir a espessura da camada nuclear interna. Abra o software chamado thorough investigator.Escolha os 40 tipos, depois selecione abrir imagem na barra principal dupla. Na guia arquivo, escolha uma imagem de uma região retiniana que deseja analisar. Escolha o tipo de linha de contorno no menu suspenso da barra principal dupla.Certifique-se de que o movimento automático esteja ativado. Você pode ampliar a imagem clicando no

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