Análises morfométricas de secções da retina
February 19th, 2012
Este vídeo demonstra três tipos de análise morfométrica da retina, que incluem a medição da espessura da camada nuclear interna, a quantificação do número de células ganglionares da retina (RGCs) e medindo os tamanhos dos RGCs. A técnica pode oferecer uma plataforma simples, mas científica para análises morfométricas.
Olá, sou Regina, do laboratório de Doenças Neurodegenerativas do Departamento de Anatomia da Universidade de Hong Kong. Hoje vou mostrar como fazer a análise de progressão da sessão de retina. Vamos começar Antes de fazer qualquer análise, uma recessão de amostra de retina e quatro MyFitness e passar pela coloração h e e.
Depois disso, a sessão de retina é dividida em quatro regiões. São elas a região periférica superior, a região central superior, a região central inferior e a região periférica inferior. Depois de definir as regiões, uma imagem de cada região é adquirida com ampliação de 10 vezes 40 sob o microscópio de feixe brilhante de decoração.
Agora estamos prontos para analisar as informações do morfo retiniano. Esta sessão demonstrará como medir a espessura da retina da camada nuclear interna. Abra o software chamado investigador completo.
Escolha os 40 tipos e, nas duas barras principais, selecione a imagem aberta. No arquivo de guia, escolha uma imagem de uma região retiniana desejada que você gostaria de analisar. Escolha o tipo de linha de contorno no menu suspenso das duas barras principais.
Certifique-se de que o movimento automático esteja ativado. Você pode ampliar a imagem clicando no botão de aumentar o zoom. Você pode usar o botão de redução de zoom para reduzir o lado da exibição da imagem.
Tanto o traçado quanto a amostra podem ser movidos em quatro direções diferentes, quebrando os botões de movimento de causa. Clique com o botão direito do mouse na janela de rastreamento e selecione rastreamento de crack simples. Desenhe a linha cont ao longo da borda interna da camada interna.
Se um erro for cometido, quebre-o na janela de rastreamento e pressione o botão und un undo para apagar o último ponto de desenho. Continue o traçado até o último ponto da linha. Quando o desenho estiver concluído, quebre-o na janela de rastreamento e escolha um contorno aberto e inicie a imagem clicando em ampliar.
Botão esquerdo Clique na janela de rastreamento. Para ampliar a imagem, selecione um marcador na barra do marcador dois em Marcus. No ponto de junção.
Depois de adicionar todos os marcadores, selecione o ícone do marcador na posição da barra do marcador dois e no cursor. No centro de um dos marcadores, selecione ângulos de medição rápida na guia dois, clique com o botão direito do mouse na janela de rastreamento e selecione a opção contínua. Meça o ângulo clicando primeiro no centro de um marcador, que é adjacente ao marcador selecionado.
Para um segmento de fim de linha, mova o máximo para o centro da preocupação. Marcador e rachadura. Novamente, estenda a linha do elástico até a borda externa da camada de ínia em ajuste o ângulo até 90 graus.
Alcance a rachadura esquerda no desejo. Posicione uma caixa de diálogo mostrando que a medição do ângulo aparecerá logo após o clique. Pressione a tecla Enter enquanto mantém o mouse ainda à esquerda.
Clique na janela de rastreamento para que a linha seja desenhada de uma extremidade para a nova extremidade selecionada. Quebre-o na janela de rastreamento e escolha um controle aberto. Temos que fazer quatro medições dos dedos da camada nuclear interna em cada região, onde quatro linhas serão desenhadas.
Perpendicularmente da noite da base de controle até a borda externa da camada nuclear da Índia E lance a imagem para que você possa ver a fronteira claramente. Se a ponta da linha não estiver na parte externa da camada nuclear interna, podemos vinculá-las ou encurtar a linha no modo de edição. Selecione o modo de edição e escolha a linha.
Clique muito na janela de rastreamento e escolha no ponto de pesquisa no controle elétrico, adicione um ponto na borda externa enquanto a edição do ponto deve estar na mesma linha. Suprimir o ponto original. Alinhar com um novo elevador pode então ser obtido.
Reduza o lado da imagem clicando no botão de diminuir o zoom. De selecione o modo de edição e desenhe o último segmento de linha. Depois de desenhar as linhas de ordem, selecione o modo de edição.
Clique com o botão direito do mouse na janela de rastreamento e aterrissamos os quatro segmentos de linha de acordo. Agora podemos obter as quatro medições pressionando o botão de medição CONT. Selecione essas quatro medidas e cole-as para um especialista clicando em copiar.
Para clicar em bola, selecione salvar como no arquivo de guia. Os dados de rastreamento podem ser salvos como um arquivo de dados. Nesta parte, quantificaremos o número de imagens selecionadas de células gagan de cauda vermelha abertas.
No arquivo de guia, escolha uma imagem de uma região retiniana desejada que você gostaria de analisar. Em primeiro lugar, temos que identificar quais são estilo de vida e quais são células de morte. Essas células em uma forma grosseiramente executada com núcleo sutil e claramente observado não considerado como células de gangue da retina da vida.
Essas células pequenas e condensadas são consideradas como essa célula. Escolha o tipo de linha de contorno no menu suspenso das duas barras principais. Desenhe nossa linha ao longo da borda da camada de fibra esquerda e o traçado com a opção e o contorno aberto.
Adicione cada extremidade, adicione um marcador na ponta da linha e o outro na posição próxima à equipe. Você seleciona o ícone do marcador na barra do marcador dois. Posicione o cursor no centro dos marcadores.
Na ponta, selecione ângulos de medição rápida na guia. Dois cliques com o botão direito do mouse na janela de rastreamento e você seleciona uma opção contínua e apenas as linhas de elástico e mede um ângulo de 19 graus. Pressione a tecla Enter logo após uma caixa de dólar ser capturada.
Mas lembre-se de que o mouse ainda tem ao mesmo tempo. Quebre a janela de rastreamento para que uma nova linha possa ser particularmente estendida a partir da ponta. Interrompa a janela de rastreamento e escolha um controle aberto.
Desenhe outra nova linha exatamente da mesma maneira que outra extremidade. Criamos dois limites dentro dos quais o número de células ratin gagan é contado. Selecione um tipo de marcador e anexe um a cada cinco células.
Escolha um limite como uma linha de exclusão, que a célula toca não é atual. Selecione outro tipo de marcador para as células mortas. O número de cada tipo de espaço de marcador será exibido ao lado do ícone do marcador. Conformemente.
Na barra do marcador dois, selecione o modo de edição e pegue a linha de base do contorno. Quebre-o na janela de rastreamento e retermine a linha. O nome da linha de base de contorno pode ser obtido pressionando o botão de medição de contorno.
O número de células pode então ser expresso por milímetro do nome. Então, vamos salvar como no arquivo da guia. Os dados de rastreamento e marcador podem ser salvos como um arquivo de dados.
Esta parte demonstrará como medir o lado celular de uma imagem de seleção de células de agrupamento da retina aberta. No arquivo de guia, escolha uma imagem de uma região retiniana desejada que você gostaria de analisar. Escolha uma célula de gangue de respiração viva de acordo com os critérios descritos na parte anterior.
Então, na célula de vida, escolha o tipo de linha de contorno do ponto de anotar para baixo das duas barras principais. Desenhe uma linha de contorno ao longo da circunferência da célula mais ou menos no final direito, chute a janela de rastreamento e selecione o final fechar o contorno. A área da célula será exibida sob o item de área na caixa de diálogo de medição de controle.
Este vídeo demonstrou três métodos simples que podem analisar objetivamente a retina. Espero que este vídeo seja de.
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Visão Geral
Este vídeo demonstra três tipos de análises morfométricas da retina, incluindo a medição da espessura da camada nuclear interna, quantificação do número de células ganglionares da retina (CGRs) e medição dos tamanhos das CGRs. A técnica fornece uma plataforma científica para essas análises.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Morfometria da Retina
- Quantificação de Células
Fundamentos
- A saúde da retina é crucial para a visão.
- As análises morfométricas ajudam a entender doenças da retina.
- As células ganglionares da retina são vitais para a transmissão de informações visuais.
- A medição das CGRs pode fornecer insights sobre condições neurodegenerativas.
Propósito do Estudo
- Demonstrar técnicas morfométricas para análise da retina.
- Quantificar células ganglionares da retina e seus tamanhos.
- Medir a espessura da camada nuclear interna.
Métodos Utilizados
- Preparação de amostras retinianas.
- Coloração com hematoxilina e eosina (H&E).
- Divisão da retina em regiões definidas para análise.
- Aquisição de imagens em várias ampliações.
Principais Resultados
- Medição bem-sucedida da espessura da camada nuclear interna.
- Quantificação das células ganglionares da retina.
- Avaliação dos tamanhos das CGRs em diferentes regiões retinianas.
- Demonstração de uma abordagem sistemática para morfometria da retina.
Conclusões
- As técnicas apresentadas são eficazes para análise da retina.
- Esses métodos podem ajudar a entender patologias retinianas.
- Estudos futuros podem se basear nesse framework para pesquisas adicionais.
Perguntas Frequentes
Executive Industry Relevance
Objective morphometric analysis of retinal sections enables precise quantification of neuronal loss and structural changes, supporting target validation in neurodegenerative disease models. By reducing measurement variability and increasing sensitivity to minimal changes, this approach enhances predictive confidence in evaluating therapeutic efficacy. It provides a translatable platform for assessing retinal pathologies across drug discovery stages.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses by quantifying retinal ganglion cell density and soma size alterations in disease models.
- Operational Value: Supports biological de-risking through reproducible measurement of inner nuclear layer thickness and cell layer morphometrics.
- Predictive Value: Facilitates portfolio triage by delivering absolute, copyable morphometric data for cross-study comparison.
Screening & Assay Development
- Assay Readiness: Prepares validated biological systems for downstream workflows via standardized region-based image acquisition and tracing protocols.
- Quantitative Output: Generates absolute length and size measurements directly exportable to analytical files, improving data consistency.
- Scalability: Enables reliable compound evaluation through reduced observer variability and increased sensitivity in detecting minimal retinal changes.
Translational & Preclinical Research
- Disease Relevance: Aligns with translational biomarker strategies by linking RGC loss and layer thickness changes to therapeutic outcomes in glaucoma and excitotoxicity models.
- Preclinical Continuity: Supports risk-adjusted advancement decisions through objective, repeatable morphometric endpoints across retinal regions.
- Mechanistic De-risking: Focuses on predictive valuation by isolating structural changes independent of functional assays.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the discovery continuum from early target validation through lead identification to preclinical evaluation, providing structural readouts that complement functional assessments in retinal disease models.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing and pathway clarification by quantifying cell number, size, and layer thickness in defined retinal regions.
- Screening: Delivers assay readiness and reproducibility through standardized H&E-stained section analysis and software-guided tracing.
- Analytics: Provides quantitative dependent variable measurements (cell count, soma size, layer thickness) enabling statistical comparison across treatment groups.
- Translational Research: Connects to preclinical continuity via disease-relevant structural endpoints in NMDA-induced excitotoxicity, ischemia-reperfusion, and glaucoma models.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable capability for retinal morphometry across multiple disease models and therapeutic interventions.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Predictive confidence in target validation through reduction of mechanistic ambiguity in retinal neurodegeneration.
- Operational Value: Standardization, reproducibility, and scalability of morphometric measurements across operators and sites.
- Strategic Value: Better go/no-go decisions, capital efficiency, and reduced late-stage biological risk via early structural biomarker detection.
- Portfolio Impact: Risk-adjusted prioritization and advancement decisions based on quantifiable retinal structural changes.
Implementation Considerations
- Required expertise in histology, microscopy, and morphometric software operation (Stereo Investigator).
- Instrumentation needs include brightfield microscope, computerized tracing system, and image analysis software.
- Cross-team standardization requires protocol adherence for region definition, tracing technique, and measurement replication.
- Adaptation considerations across model systems involve adjusting magnification, region sampling, and cell identification criteria.
- Practical limitations include dependency on tissue section quality and staining consistency for accurate border delineation.
