Name: Um Protocolo para Detecção e eliminação em fase gasosa radicais livres do fumo do cigarro Mainstream (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-02T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Aprenda a detectar e eliminar radicais livres do fumo de cigarro usando espectroscopia ESR com spin-trapping. Este método computacional avalia a capacidade de eliminação de antioxidantes vegetais como licopeno e extrato de semente de uva.

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Este trabalho foi financiado pelo Instituto Nacional de Saúde, conceder No. NIH / NCRR P41-RR 016292 (para ACERT).

1. Materiais Todos os solventes utilizados neste trabalho foram de grau reagente. A armadilha de spin, incluindo N-terc-butil-α-phenylnitrone (PBN) eo rótulo de spin padrão 2,2,6,6-tetrametil-1-piperinyoxyl (TEMPO) foram obtidos da Sigma e foram usados ​​como fornecido. Os antioxidantes de plantas foram obtidas comercialmente a partir de Swanson, Inc. nos EUA. 2. Preparação de fumaça de cigarro e análise de radicais livres <ol><li> Introduzir antioxidantes no filtro, o Pycnogenol antioxidantes e extrato de semente de uva foram pela primeira vez dissolvido em etanol a 95%, enquanto o licopeno foi dissolvido em acetona. Os volumes de solvente foram diferentes, dependendo da solubilidade antioxidante. </li><li> A quantidade de antioxidantes de 0,4 mg / filtro foi usado. Eles foram, então, revestido com 10 mg de carvão ativado. Para este efeito, carvão ativado foi agitada por ~ 12 hrs com a solução antioxidante em condições anaeróbicas, filtrado e seco sob vácuo. </li> Antioxidantes foram então introduzidas no filtro de acetato de convencional (CA filtro). Para este propósito, o filtro foi cortado em dois pedaços. O revestimento vegetal antioxidantes foram inseridos entre dois pedaços do filtro e embrulhado com um pedaço de fita adesiva para formar um filtro - antioxidante-filtro sanduíche (Fig. 1A). Este filtro combinado foi posteriormente anexado ao varas de cigarros contendo tabaco. O controle de filtro foi feita da mesma forma como o filtro de antioxidantes, exceto nenhum antioxidante foi adicionado. <li> Antes da simulação de fumar, os cigarros pesquisa foram desembalados e mantidos em um ambiente de umidade constante (20 ° C, 60% de umidade relativa) usando uma solução de NaBr saturada para um mínimo de 2 dias. </li><li> Simulação de fumar para análise de rotina foi realizada à temperatura ambiente usando um dispositivo de fumo de um único porto que, como mostrado na Figura 1, consiste de um aspirador de água ou bomba de vácuo GAST DOA-BN-P104 / Air Compressor (Benton Harbor, Michigan) conectado para o spin-trappingmontagem através de um entroncamento com uma extremidade aberta. Puffs foram realizados, ligando a extremidade aberta que permaneceu aberta entre baforadas. O fluxo de gás foi verificada pelo medidor de vazão e fixada em 2,2 ~ SCFH = 17,5 mL / s através do ajuste de uma válvula colocada entre a bomba eo vent. </li><li> Os cigarros eram fumados de pesquisa sob a condição de volume de sopro de 35 ml para uma duração de 2 segundos repetida a cada 60 segundos, semelhante ao 1. Simulação de fumar para a estimativa quantitativa de fase gasosa de radicais livres foi realizada em conjunto com o sistema de armadilha de spin como mostrado na figura. 1. </li><li> Dez puffs intensa (35 mL / puff) foram tomadas para cada cigarro. Fase gasosa de radicais livres foram coletadas pela passagem do MCS através de um filtro Cambridge pad e depois introduzido na solução de spin trapping (0,05 M PBN em benzeno, 2,0 mL). </li><li> Após a última tragada, a solução armadilhas bolhas foi reajustado ao seu volume inicial (2,0 mL) com o benzeno mesmo. Uma alíquota foi transferida para uma 25 ~0 milímetros de comprimento, 3 milímetros tubo de vidro ID selado numa das extremidades. </li><li> A solução foi desoxigenada armadilhas usando um procedimento de congelamento-descongelamento-bomba. Foi congelados com azoto líquido, e um vácuo foi aplicado. Em seguida, ele foi descongelado sob atmosfera de argônio, permitindo que as bolhas de gás presas a escapar, e congelado novamente. Após este ciclo foi repetido três vezes, o tubo foi chama-selado a vácuo e usados ​​em outras medições ESR. Esta etapa é necessária porque o oxigênio, que é bem solúvel em benzeno, amplia linhas ESR de radicais orgânicos. Desoxigenação dramaticamente melhora a relação sinal-ruído. </li><li> X-Band ESR espectros foram registrados em um espectrômetro Bruker EMX em uma freqüência de 9,34 GHz em condições normais. As configurações espectrômetro utilizado na maioria dos experimentos foram: centro do campo 3312.5G, largura de digitalização 80G, modulação de amplitude 0.5G, constante de tempo 82 microsegundos, tempo de digitalização 40 segundos. </li><li> Os adutos armadilha de spin são relativamente estáveis ​​nas condições de experimento, que em alguns casos required 25 acumulações, que normalmente levava ~ 20 min. No entanto, após 12 horas a intensidade dos sinais de ESR em solução de benzeno diminuiu por um fator de ~ 5. </li><li> Para quantificar a concentração do aduto armadilhas, seu espectro ESR inicial de primeira derivada foi integrado. O espectro de absorção resultante mostra um fundo singlet amplo, provavelmente devido a fuligem / tar produtos contidos na fumaça. Após a subtração deste contexto, o trio separados do aduto armadilhas foi integrado mais uma vez (Fig. 2). </li></ol> 3. Resultados representante A maioria dos radicais livres na queima de cigarros produzidos fumaça (fase gasosa) são instantâneos e instável. A fim de observar esses radicais uma técnica armadilha de spin é empregado. Ele captura de fase gasosa de radicais livres, transformando-os em um aduto de spin que é mais estável e pode ser detectado por ESR (Fig.1). No presente estudo, a solução de spin-armadilha de 0,05M PBN foi usado para coletar o gás de fumaça fase de radicais livres, que são uma mistura de oxigênio e carbono-centrado radicais que são difíceis de separar 15. No nosso caso, no entanto, as constantes divisão observada hiperfinos um N = 13.7G e um H = 1.95G são muito semelhantes aos valores correspondentes para a captura de adutos alcoxil radicais livres (Rm) 2, sugerindo que eles são o produto principal. Nós mostramos que sinais fracos ESR e baixa reprodutibilidade observada em nossas medições iniciais (Fig. 2) foram devido à umidade do fluxo de fumaça. Para resolver esse problema, nós adicionamos uma armadilha de nitrogênio líquido (LN2) entre o filtro de Cambridge ea solução armadilha spin. A LN 2 armadilha de água removida do fluxo de MCS por congelamento rápido e capturá-lo na parede interna do tubo de vidro. Esta muito melhorada sinais ESR e permitiu resultados altamente reprodutível (Fig. 3). A quantidade de presos radicais livres foi determinada utilizando umamostra de referência. Para amostras de controle sem antioxidantes, a concentração de benzeno no aduto típico estimada por comparação de seu espectro dupla integral com um espectro de casal integrante de concentração conhecida de O TEMPO foi de 1,24 mM (Fig.2). Uma vez que a quantidade de ar passou por cada cigarro durante a fumar foi de ~ 350 ml, o que dá uma estimativa para a concentração de radicais livres na fase gasosa da MCS de ~ 7.1X10 -9 M, e um número total de radicais presos da fase gasosa de um cigarro inteiro de ~ 1.5x10 15. Uma estimativa para a quantidade total de radicais livres na fumaça de um cigarro inteiro, incluindo o gás ea fase particulada, foi de ~ 10 16 radicais livres 9. Diferentes níveis do efeito de limpeza de plantas antioxidantes em fase gasosa de radicais livres na fumaça do cigarro fluxo principais foram observados. Suas taxas de limpeza foram apresentados na fig. 4. Licopeno e extrato de semente de uva apresentaram as maiores taxas, enquanto baixaer taxa foi observada para picnogenol (Fig.4). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Um diagrama de uma melhor concepção de fumar de simulação para a recolha de fase gasosa de radicais livres na fumaça do cigarro mainstream (MCS), utilizando armadilha de spin. MCS foi desenhada por um aspirador de água através CA filtro, então Cambridge filtro (filtro amarelo) e passou por uma armadilha de nitrogênio líquido para remover H 2 O. Os produtos fase gasosa finalmente fui para girar armadilha e borbulhar na solução armadilha spin. Antioxidante de plantas foi colocado entre dois pedaços de acetato de filtros convencionais (alargada em círculo A) ligado ao cigarro para varrer os radicais livres no MCS. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. A estimativa quantitativa para a concentração aduto-spin trapping em benzeno requer subtrair um sinal de fundo largo da integração primeiral espectro. Os parâmetros hiperfinos divisão para o aduto-spin trapping é um H = 1,95 G, um N = 13.7G. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Passando por LN2 armadilha melhora substancialmente a qualidade dos sinais ESR obtidos por spin trapping de MCS. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3406/3406fig4.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Efeito de antioxidantes naturais sobre a concentração de radicais livres no MCS. As intensidades de sinal são: controle - 100%, pycnogenol - 55%, extrato de semente de uva - 12%, o licopeno - 10%.

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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

A estimativa confiável do efeito de diferentes radicais livres catadores no fumo do tabaco requer uma técnica reprodutível para a detecção quantitativa de radicais livres. Anteriormente 1, demonstrou-se que pequenos volumes de soluções de maior concentração de spin armadilha em solventes não-polares são mais eficazes na captura de radicais livres do fumo do tabaco. A fumaça do cigarro contém sempre vapor de água provenientes da combustão de compostos orgânicos e da umidade residual do tabaco, que pode acabar no solvente trapping. Esta mistura de água na solução armadilha de spin PBN diminui substancialmente o tempo de vida do adutos armadilhas de spin ea intensidade de seus sinais ESR. Removendo a umidade por simples MCS passando através de um tubo em forma de U resfriado com nitrogênio líquido melhoraram consideravelmente a qualidade de espectros de ESR em nossos experimentos, apesar de alguma fração de fase gasosa radicais pode ser também presa na superfície congelada. Usando tsua técnica, comparamos a eficiência relativa de diferentes radical-limpeza compostos naturais introduzidos filtros de cigarro. Descobrimos que o licopeno e extrato de semente de uva imediatamente após a incorporação em filtros de cigarro são capazes de limpar até 90% de radicais livres a partir do MSC fase gasosa. Alta capacidade de limpeza, tais fileiras essas baratas disponíveis compostos naturais entre os mais eficientes reportados livre protetores radical como a hemoglobina e shikonine 8,14. No entanto, em nossos filtros de cigarro carregado com experimentos estudados antioxidantes naturais perdeu uma parte considerável de sua capacidade de limpeza depois de uma semana de armazenamento em temperatura ambiente. Resolver este problema pode estimular a futura aplicação de licopeno e extrato de semente de uva em filtros de cigarro comercial.

um protocolo para detecção e eliminação em fase gasosa radicais livres do fumo do cigarro mainstream

A Protocol for Detecting and Scavenging Gas-phase Free Radicals in Mainstream Cigarette Smoke

O tabagismo está associado a cânceres humanos. Tem sido relatado que a maioria das mortes por câncer de pulmão são causados ​​pelo tabagismo 5,6,7,12. Embora alcatrões tabaco e produtos afins na fase de partículas da fumaça do cigarro são as principais causas de doenças cancerígenas e mutagénicas relacionados, a fumaça do cigarro contém quantidades significativas de radicais livres que são também considerados como um importante grupo de substâncias cancerígenas 9,10. Os radicais livres atacam componentes da célula por danificar a estrutura da proteína, lipídios e sequências de DNA e aumentar os riscos de desenvolver vários tipos de cânceres. Radicais inalados produzem adutos que contribuem para muitos dos efeitos negativos sobre a saúde do fumo do tabaco no pulmão 3. Estudos têm sido realizados para reduzir os radicais livres da fumaça do cigarro para diminuir os riscos dos danos provocadas pelo tabagismo. Tem sido relatado que a hemoglobina e heme contendo compostos poderiam parcialmente scavenge óxido nítrico, reativaoxidantes e cancerígenos nitrosocompounds voláteis de 4 de fumaça de cigarro. A &#39;bio-filtro &quot;consistia de carbono hemoglobina e ativado foi utilizado para eliminar os radicais livres e para remover até 90% dos radicais livres da fumaça do cigarro 14. No entanto, devido ao custo ineficácia, não foi comercializada com sucesso. Outro estudo mostrou a eficiência de limpeza de boa shikonin, um componente da fitoterapia chinesa 8. No presente estudo, relatamos um protocolo comum para a introdução de extratos de antioxidantes naturais para o filtro de cigarro para limpeza de radicais livres em fase gasosa na fumaça do cigarro e medição do efeito scavenge em radicais livres em fase gasosa na fumaça do cigarro mainstream (MCS), utilizando-spin trapping ressonância paramagnética eletrônica (ESR) Espectroscopia 1,2,14. Nós mostramos capacidade de limpeza de alta de licopeno e extrato de semente de uva, que poderia apontar para sua futura aplicação em filtros de cigarro. Uma vantagem importante destes profissionaiscatadores pectiva é que eles podem ser adquiridos em grande quantidade a partir de subprodutos da indústria de tomate ou de vinho, respectivamente, 11,13

Spin-trapping espectroscopia ESR foi usado para estudar o efeito de antioxidantes vegetais licopeno, pycnogenol e extrato de semente de uva na limpeza de fase gasosa de radicais livres na fumaça do cigarro.

Um Protocolo para Detecção e eliminação em fase gasosa radicais livres do fumo do cigarro Mainstream

O tabagismo está associado a cânceres humanos. Foi relatado que a maioria das mortes por câncer de pulmão é causada pelo tabagismo 5,6,7,12. ...

O objetivo geral deste procedimento é medir a quantidade de radicais livres na fumaça principal do tabaco e avaliar a capacidade de eliminação de diversos antioxidantes. Isso é realizado primeiramente preparando filtros contendo diferentes compostos eliminadores, bem como controles sem filtro eliminador. O preparo é seguido por simulação de fumaça com a fumação de cigarros de pesquisa, fazendo a fumaça passar por uma solução de captura de spins.A ressonância de spin eletrônico, abreviada como ESR, é então utilizada para registrar espectros de radicais aprisionados, bem como de amostras de referência. Os espectros de ESR obtidos posteriormente são submetidos a uma análise de rotina, com o objetivo de separar o sinal dos radicais aprisionados na fase gasosa do fundo e quantificar a concentração de radicais utilizando uma amostra de referência. Por fim, os resultados mostram informações quantitativas sobre o teor de radicais livres na fumaça principal do cigarro e estimativas da capacidade de eliminação de antioxidantes naturais por meio da espectroscopia de ESR com aprisionamento de spin.A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes de análise da fumaça do tabaco, como a cromatografia gasosa, é que a RPE é especificamente sensível aos radicais livres. As implicações desta técnica podem ajudar na redução dos efeitos nocivos da fumaça do tabaco, pois os radicais livres constituem um grupo importante de carcinogênicos. Este método pode proporcionar uma melhor compreensão do estudo dos radicais livres na fumaça do tabaco, e também pode ser aplicado a outros sistemas, como a emissão de fumaça industrial e fumaça de crack. O Centro Nacional de Pesquisa Biomédica para a tecnologia de ressonância de spin eletrônico, também conhecido como cert, é um desdobramento de nossa vasta experiência no desenvolvimento da tecnologia moderna de RPE.Para pesquisadores envolvidos na ressonância de spin eletrônico, oferecemos uma ampla variedade de serviços para eles e para a comunidade biomédica. Colocamos nossas instalações regularmente à disposição para introduzir antioxidantes no filtro do cigarro. Primeiro, dissolva os antioxidantes, pycnogenol e extrato de uva em etanol 95% e dissolva licopeno em acetona.Ajuste os volumes do solvente conforme a solubilidade dos antioxidantes. Em seguida, combine os antioxidantes dissolvidos com carbono ativado sob agitação em condições anaeróbicas por aproximadamente 12 horas. As condições anaeróbicas são obtidas borbulhando Argonne através da mistura durante a agitação.Após a incubação, filtre a solução e seque sob vácuo. Em seguida, introduza os antioxidantes e o carbono em um filtro de acetato convencional cortando primeiro o filtro em duas partes. Insira os antioxidantes vegetais revestidos entre duas partes do filtro para formar um sanduíche de filtro com antioxidantes, e reinsira-o no cilindro de papel do cigarro.Prepare o filtro controle da mesma forma que o filtro com antioxidante, exceto por não adicionar o antioxidante antes da montagem experimental. Os cigarros de pesquisa devem ser desembalados e mantidos em um ambiente de umidade constante, utilizando uma solução saturada de brometo de sódio, por um período mínimo de dois dias. Retire as hastes de cigarro contendo tabaco e conecte-as ao filtro combinado.Realize a simulação de fumo para análise rotineira à temperatura ambiente utilizando um dispositivo de fumo de porta única, que consiste em um aspirador de água ou bomba de vácuo/compressor de ar conectado ao conjunto de captura por spin através de uma junção em T com uma extremidade aberta. Use um medidor de fluxo para verificar o fluxo de gás e ajuste-o em aproximadamente 2,2 pés cúbicos padrão por hora, regulando uma válvula posicionada entre a bomba e a ventilação. Fume os cigarros de pesquisa com um volume intenso de baforada de 35 mililitros durante um período de dois segundos, repetindo a cada 60 segundos.A extremidade aberta do dispositivo de fumo deve ser tampada para realizar as tragadas e mantida aberta entre as tragadas. Enquanto a extremidade estiver destampada, há pouca corrente de ar através do cigarro, o que corresponde às condições entre as tragadas. Realize 10 tragadas intensas para cada cigarro, coletando radicais livres na fase gasosa ao passar a fumaça principal do cigarro por uma almofada de filtro Cambridge e, em seguida, introduzindo-a na solução de aprisionamento de spins.A armadilha de nitrogênio líquido remove o vapor d'água da fumaça principal, mas não afeta substancialmente os radicais na fase gasosa. Após a última tragada, transfira uma alíquota da solução de armadilhamento borbulhada para um tubo de amostra de vidro com aproximadamente 25 cm de comprimento e diâmetro interno de três milímetros. Como o oxigênio alarga os espectros de RPE e diminui a sensibilidade do método, desoxigene a solução utilizando o método de congelamento, bombeamento e descongelamento, mergulhando primeiro o tubo em nitrogênio líquido, depois evacuando a solução com uma bomba a óleo e, em seguida, descongelando a solução sob argônio.Repita este método de congelamento, bombeamento e descongelamento várias vezes. Em seguida, feche o tubo sob vácuo. O tubo está agora pronto.Para medições adicionais de RPE, registre espectros de RPE em banda X em um espectrômetro Bruker EMX a uma frequência de 9,34 gigahertz. Em condições padrão, consulte o protocolo escrito para obter as configurações típicas do espectrômetro utilizadas. Para esses experimentos, realize 25 acumulações de RPE, o que normalmente leva aproximadamente 20 minutos.Embora os aditivos aprisionadores de spins sejam relativamente estáveis nas condições experimentais após 12 horas, a intensidade dos sinais de RPE em solução de benzeno diminuiu por um fator de cinco. Para quantificar a concentração do aditivo aprisionador, integre o espectro inicial de primeira derivada de RPE. O espectro de absorção resultante mostra um fundo largo de sinal único, provavelmente devido a produtos de fuligem e alcatrão contidos na fumaça.Após a subtração desse fundo, integre o triplo separado do aditivo de aprisionamento. Mais uma vez, para obter a concentração do radical livre. Os valores das integrais duplas para a solução de aprisionamento de spin são comparados com os de uma solução de um radical nitroxila tempo com concentração conhecida, proveniente do experimento demonstrado aqui, bem como com cálculos adicionais encontrados no protocolo escrito.Obteve-se uma concentração de radicais livres na fase gasosa da fumaça principal do cigarro de aproximadamente 7,1 vezes 10 elevado a menos nove molar. A partir disso, determinou-se que o número total de radicais aprisionados a partir da fase gasosa de um cigarro inteiro é de cerca de 1,5 vezes 10 à 15ª potência. Durante este experimento, medições iniciais levaram a sinais fracos de RPE e baixa reprodutibilidade devido à umidade no fluxo de fumaça.Para resolver este problema, uma armadilha de nitrogênio líquido foi adicionada ao dispositivo de simulação de fumaça entre o filtro de Cambridge e a solução do spin trap. A armadilha de nitrogênio líquido removeu a água do fluxo de fumaça principal do cigarro por congelamento rápido e captura na parede interna do tubo de vidro. Isso melhorou significativamente os sinais de RPE e permitiu resultados altamente reprodutíveis.Foram observados diferentes níveis do efeito sequestrante de antioxidantes vegetais sobre radicais livres na fase gasosa da fumaça principal do cigarro, e suas taxas de sequestro são apresentadas. O licopeno e o extrato de semente de uva apresentaram as taxas mais altas, enquanto uma taxa mais baixa foi observada para o pycnogenol. Uma vez dominada, essa técnica pode ser realizada em menos de uma hora, se executada corretamente.Após tentar o procedimento, é importante fazer a fumaça passar por uma armadilha de nitrogênio líquido. Isso melhora a qualidade dos espectros de RS e a reprodutibilidade após o desenvolvimento. A técnica auxiliou pesquisadores na área da saúde e do meio ambiente a explorar e identificar a presença de radicais livres perigosos para a saúde em diversos compostos voláteis.Após assistir ao vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como quantificar radicais livres na fumaça principal do tabaco, com o objetivo de reduzir os efeitos nocivos do fumo.

a-protocol-for-detecting-scavenging-gas-phase-free-radicals

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Células epiteliais pulmonares podem ser isolados do trato respiratório de camundongos e cultivadas em ar-líquido interface como um modelo de epitélio respiratório diferenciado. Um protocolo é descrito para o isolamento, cultura e expondo essas células à fumaça de cigarro mainstream, a fim de estudar as respostas moleculares para esta toxina ambiental.

Isolamento de rato células epiteliais respiratórias e exposição à fumaça de cigarro Experimental da Air interface líquido

Radical baseado em química biomimética tem sido aplicado para a construção de bibliotecas, necessários para o desenvolvimento de biomarcadores.

Radicais Livres em Biologia Química: de comportamento químico para o Desenvolvimento de biomarcadores

O objetivo deste protocolo é expor modelos organotípicos de tecido brônquico e nasal 3D humanos à fumaça de cigarro convencional (CS) na interface ar-líquido. O impacto do CS nos tecidos é então investigado usando um ensaio de atividade do citocromo P450, uma medição de batimento de cílios e uma abordagem de biologia de sistemas.

Avaliação do Impacto da exposição repetida de Organotípicas 3D brônquica e cultura nasal Tissue Models para Whole fumo do cigarro

Usando ensaios ex vivo otimizados de células mononucleares do sangue periférico humano (PBMC), mostramos que uma preparação de produto de tabaco combustível suprime acentuadamente as citocinas secretadas intracelularmente mediadas por receptores e a capacidade citolítica de PBMCs efetores. Esses ensaios rápidos podem ser úteis na avaliação do produto e na compreensão dos potenciais efeitos a longo prazo da exposição ao tabaco.

Métodos para avaliar a citotoxicidade e Imunossupressão de combustível tabaco Preparações Produto

O objetivo do estudo foi avaliar o impacto biológico de 15 constituintes da fumaça de cigarro usando uma combinação de um analisador de células em tempo real baseado em impedância e uma plataforma baseada em triagem de alto conteúdo (HCS) para avaliação toxicológica in vitro. Este estudo fornece informações sobre doses efetivas, toxicidade e modos de ação dos compostos testados.

Análise alto teor de triagem para avaliar os efeitos toxicológicos de Constituintes nocivas e potencialmente prejudiciais (HPHC)

Este protocolo descreve um método para expor roedores ao vapor de cigarro eletrônico (vapor E) e fumaça de cigarro. As câmaras de exposição são construídas modificando câmaras de anestesia com um sistema de bombeamento automatizado que fornece vapor E ou fumaça de cigarro a roedores. Este sistema pode ser facilmente modificado para acomodar muitos endpoints experimentais.

Comparando os efeitos do fumo eletrônico do cigarro e do cigarro em uma novela<em&gt; In Vivo</em&gt; Sistema de Exposição

Aqui, descrevemos um aparelho de laboratório programáveis que pode ser usado para criar extratos de aerossol de cigarro eletrônico e fumaça de cigarro convencional. Este método fornece uma ferramenta útil para fazer comparações diretas entre cigarros convencionais e cigarros eletrônicos e é um ponto de entrada acessível para pesquisa de cigarro eletrônico.

Um microcontrolador operado dispositivo para a geração de extratos líquidos de aerossol de cigarro eletrônico e fumo cigarro convencional

Os usuários de cigarro eletrônico (e-cig) estão a aumentar em todo o mundo. Pouco, no entanto, é conhecido sobre os efeitos de saúde induzidos por aerossóis inalados e-cig. Este artigo descreve uma técnica de geração de aerossol e-cig apropriada para exposições de animais e estudos toxicológicos posteriores. Esses protocolos são necessários para estabelecer sistemas de exposição experimentalmente reproduzíveis e padronizada e-cig.

Geração de aerossol de cigarro eletrônico por um dispositivo de máquina-Vaping de terceira geração: aplicativo para estudos toxicológicos

Nós descrevemos aqui métodos para a quantificação sensível e exata das lesões 8-oxo-7,8-dihydro-2 '-deoxyguanosine (8-oxodGuo), 1,n6-etheno-2 '-deoxyadenosine (1,n6-dAdo) e 1,n2- etheno-2'-deoxyguanosine (1,N2-DGUO) no ADN. Os métodos foram aplicados na avaliação dos efeitos da matéria particulada fina ambiente (PM2,5) nos tecidos (pulmão, fígado e rim) de camundongos a/J expostos.

Quantificação de três lesões de DNA por espectrometria de massas e avaliação de seus níveis em tecidos de camundongos expostos a material particulado fino ambiente

Este protocolo demonstra o estudo dos efeitos fisiofisiológicos da fumaça do cigarro (SC) com um sistema de exposição de inalação total (WBI) construído internamente. Este sistema pode expor animais a CS sob condições repetíveis controladas para pesquisa de efeitos mediados pela CS em enfisema pulmonar e hematopoiese.

Exposição à fumaça de cigarro em camundongos usando um sistema de inalação de corpo inteiro

Aprenda a detectar e eliminar radicais livres do fumo de cigarro usando espectroscopia ESR com spin-trapping. Este método computacional avalia a capacidade de eliminação de antioxidantes vegetais como licopeno e extrato de semente de uva.

Um Protocolo para Detecção e eliminação em fase gasosa radicais livres do fumo do cigarro Mainstream

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