Name: Pré-sináptica de dopamina Dynamics em fatias de cérebro estriado com Fast-scan voltametria cíclica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Aprenda a medir a dinâmica pré-sináptica da dopamina em fatias de cérebro estriado usando voltametria cíclica de varredura rápida. Este protocolo permite observar liberação e recaptação de dopamina em tempo real.

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Financiamento fornecido pelo Instituto Nacional de Abuso do Álcool e Alcoolismo (NIAAA; AA-016967 e AA016967-01S1; TAM), Wayne State University arranque fundos, e Wayne State University Program Research Grant. O conteúdo é da exclusiva responsabilidade dos autores e não representam a posição oficial da NIAAA ou o National Institutes of Health.

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<li>Park, J., Kile, B. M., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+voltammetric+monitoring+of+norepinephrine+release+in+the+rat+ventral+bed+nucleus+of+the+stria+terminalis+and+anteroventral+thalamic+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">In vivo voltammetric monitoring of norepinephrine release in the rat ventral bed nucleus of the stria terminalis and anteroventral thalamic nucleus.</a> Eur. J. Neurosci. 30, 2121-2133 (2009).</li>
<li>Hashemi, P., Dankoski, E. C., Petrovic, J., Keithley, R. B., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Voltammetric+detection+of+5-hydroxytryptamine+release+in+the+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Voltammetric detection of 5-hydroxytryptamine release in the rat brain.</a> Anal. Chem. 81, 9462-9471 (2009).</li>
<li>Borue, X., Cooper, S., Hirsh, J., Condron, B., Venton, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+evaluation+of+serotonin+release+and+clearnece+in+drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroscience.+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative evaluation of serotonin release and clearnece in drosophila.</a> J. Neuroscience. Methods. 179, 300-308 (2009).</li>
<li>Vickrey, T. L., Condron, B., Venton, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+endogenous+dopamine+changes+in+drosophila+melanogaster+using+fast-scan+cyclic+voltammetry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Detection of endogenous dopamine changes in drosophila melanogaster using fast-scan cyclic voltammetry.</a> Anal. Chem. 81, 9306-9313 (2009).</li>
<li>Makos, M. A., Han, K. A., Heien, M. L., Ewing, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+in+vivo+electrochemistry+to+study+the+physiological+effects+of+cocaine+and+other+stimulants+on+the+drosophila+melanogaster+dopamine+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22A.C.S.+Chem+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Using in vivo electrochemistry to study the physiological effects of cocaine and other stimulants on the drosophila melanogaster dopamine transporter.</a> A.C.S. Chem Neurosci. 1, 74-83 (2009).</li>
<li>Budygin, E. A., John, C. E., Mateo, Y., Daunais, J. B., Friedman, D. P., Grant, K. A., Jones, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+ethanol+exposure+alters+presynaptic+dopamine+function+in+striatum+of+monkeys%3A+a+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22Synapse%22%5BJournal%5D)">Chronic ethanol exposure alters presynaptic dopamine function in striatum of monkeys: a preliminary study.</a> Synapse. 50, 266-268 (2003).</li>
<li>Jones, S. R., Gainetdinov, R. R., Jaber, M., Giros, B., Wightman, R. M., Caron, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profound+neuronal+plasticity+in+response+to+inactivation+of+the+dopamine+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Profound neuronal plasticity in response to inactivation of the dopamine transporter.</a> PNAS. 95, 4029-4034 (1998).</li>
<li>Kennedy, R. T., Jones, S. R., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+observation+of+dopamine+autoreceptor+effects+in+rat+striatal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Dynamic observation of dopamine autoreceptor effects in rat striatal slices.</a> J. Neurochem. 59, 449-445 (1992).</li>
<li>Rice, M. E., Cragg, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotine+amplifies+reward-related+dopamine+signals+in+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Nicotine amplifies reward-related dopamine signals in striatum.</a> Nat. Neurosci. 7, 583-584 (2004).</li>
<li>Zhang, L., Doyon, W. M., Clark, J. J., Phillips, P. E., Dani, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controls+of+tonic+and+phasic+dopamine+transmission+in+the+dorsal+and+ventral%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Controls of tonic and phasic dopamine transmission in the dorsal and ventral.</a> 76, 396-404 (2009).</li>
<li>Paredes, D., Grnaholm, A. C., Bickford, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+NGF+and+BDNF+on+baseline+glutamate+and+dopamine+release+in+the+hippocampal+formation+of+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain.+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of NGF and BDNF on baseline glutamate and dopamine release in the hippocampal formation of the adult rat.</a> Brain. Res. 11141, 56-64 (2007).</li>
<li>Goggi, J., Puller, I. A., Carney, S. L., Bradford, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signalling+pathways+involved+in+the+short-term+potentiation+of+dopamine+release+by+BDNF%5BTitle%5D)+AND+%22Brain.+Res%22%5BJournal%5D)">Signalling pathways involved in the short-term potentiation of dopamine release by BDNF.</a> Brain. Res. 968, 156-161 (2003).</li>
<li>Cheer, J. F., Wassum, K. M., Heien, M. L., Phillips, P. E., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cannabinoids+enhance+subsecond+doapmine+relese+in+the+nucleus+accumbens+of+awake+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cannabinoids enhance subsecond doapmine relese in the nucleus accumbens of awake rats.</a> J. Neurosci. 24, 4393-4400 (2004).</li>
<li>Phillips, P. E., Stuber, G. D., Heien, M. L., Wightman, R. M., Carelli, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subsecond+dopamine+release+promotes+cocaine+seeking%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Subsecond dopamine release promotes cocaine seeking.</a> Nature. 422, 614-618 (2003).</li>
<li>Robinson, D. L., Heien, M. L., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Frequency+of+dopamine+concentration+transients+increases+in+dorsal+and+ventral+striatum+of+male+rats+duing+introduction+of+conspecifics%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Frequency of dopamine concentration transients increases in dorsal and ventral striatum of male rats duing introduction of conspecifics.</a> J. Neurosci. 22, 10477-10486 (2002).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O protocolo apresentado aqui demonstra como preparar e usar fatias do mouse coronal do cérebro para experimentos FSCV. Embora este método é específico para obtenção e medição dinâmica da dopamina, outros neurotransmissores, como a adenosina, peróxido de hidrogênio, noradrenalina e serotonina têm sido monitoradas in vivo ou in vitro com FSCV 3, 8-11. FSCV pode ser usado para monitorar algumas dessas substâncias neuroquímicas outros por simples modificações da forma de onda aplicada ao eletrod...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Companhia </td><td> Número CAS </td></tr><tr><td width="274"> Reagente </td><td></td><td></td></tr><tr><td width="274"> Cloreto de Potássio </td><td> Pescador </td><td width="142" valign="top"> 7447407 </td></tr><tr><td width="274"> Cloreto de sódio </td><td> Merck Química </td><td width="142" valign="top"> 7647145 </td></tr><tr><td width="274"> Cloreto de magnésio </td><td width="194" valign="top"> Pescador </td><td width="142" valign="top"> 7791186 </td></tr><tr><td width="274"> Cloreto de cálcio </td><td width="194" valign="top"> Pescador </td><td width="142" valign="top"> 10035048 </td></tr><tr><td width="274"> Bicarbonato de sódio </td><td width="194" valign="top"> Merck Química </td><td width="142" valign="top"> 144558 </td></tr><tr><td width="274"> Fosfato de sódio, dibásico </td><td width="194" valign="top"> EMD Chemicals </td><td width="142" valign="top"> 7558794 </td></tr><tr><td width="274"> D-glucose </td><td width="194" valign="top"> Pescador </td><td width="142" valign="top"> 50997 </td></tr><tr><td width="274"> Ácido ascórbico </td><td width="194" valign="top"> Pescador </td><td width="142" valign="top"> 50817 </td></tr><tr><td width="274"> Sacarose </td><td width="194" valign="top"> Pescador </td><td> 57501 </td></tr><tr><td width="274">&nbsp;</td><td width="194" valign="top">&nbsp;</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td width="274"> Materiais </td><td width="194" valign="top"> Vendedor </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td width="274"> Fibra de carbono </td><td> Goodfellow Oakdale, PA </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Capilar de vidro </td><td> AM Sistemas Carlsborg WA. </td><td> 602000 </td></tr><tr><td width="274"> Fio de prata </td><td> A-M Sistemas Carlsborg WA. </td><td> 787000 </td></tr><tr><td width="274"> Eletrodo de tungstênio estimulando </td><td> Um plásticos, Roanoke, VA </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Fio de platina </td><td></td><td></td></tr><tr><td width="274"> Do cabo </td><td> Squires Electronics, Cornelius, OR </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Loctite adesivo instantâneo 404 </td><td> Hankal Corp Rocky Hill CT. </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Gilete </td><td> Mundial de precisão Instruments Inc. FL. </td><td></td></tr><tr><td width="274"> BD Spinal agulha </td><td> Sistemas de BD Medical, Franlin Lake, NJ </td><td> REF 405234 </td></tr><tr><td width="274"> Lâmina cirúrgica </td><td> Feather Safety razor Co. LTD. Japão </td><td></td></tr><tr><td width="274"></td><td></td><td></td></tr><tr><td width="274"> Software </td><td width="194" valign = &quot;top&quot;&gt; Vendedor </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td width="274"> Software TH </td><td> ESA Inc., Chelmsford, MA </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Instrumento </td><td width="194" valign="top"> Vendedor </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td width="274"> Câmara de gravação de submersão </td><td> Personalizado Científico, Denver, CO </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Neorolog isolador de estímulo </td><td> Digitmeter, Hertfordshire, Inglaterra </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Controlador de temperatura automático </td><td> Warner Instrument Corporation </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Microscópio (SZX7) </td><td> Olimpo </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Microscópio </td><td> Pescador </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Vibratome sistema de seccionamento 3000 </td><td> St. Loué, MO. </td><td></td></tr><tr><td width="274"> Bomba de perfusão </td><td> Watson Marlow Limited, Falmouth Cornualha - Inglaterra </td><td> H110708 </td></tr><tr><td width="274"> Micropipeta extrator </td><td> Narishige, Tóquio, Japão </td><td></td></tr><tr><td width="274"> ChemClamp potenciostato </td><td> Corporações Dagan, Minneapolis, MN. </td><td></td></tr></tbody></table>

pré-sináptica de dopamina dynamics em fatias de cérebro estriado com fast-scan voltametria cíclica

Presynaptic Dopamine Dynamics in Striatal Brain Slices with Fast-scan Cyclic Voltammetry

Extensa pesquisa centrou-se no neurotransmissor dopamina devido à sua importância no mecanismo de ação das drogas de abuso (por exemplo, cocaína e anfetaminas), o papel que ela desempenha nas doenças psiquiátricas (por exemplo, esquizofrenia e Déficit de Atenção e Hiperatividade), e seu envolvimento na degenerativas doenças como mal de Parkinson e doença de Huntington. Em condições fisiológicas normais, a dopamina é conhecida por regular a atividade locomotora, cognição, aprendizagem, afetam emocional e secreção de hormônios neuroendócrinos. Uma das maiores densidades de neurônios de dopamina está dentro do corpo estriado, que pode ser dividido em duas distintas regiões neuroanatômicas conhecida como nucleus accumbens eo núcleo caudado-putamen. O objetivo é ilustrar um protocolo geral para a fatia de voltametria cíclica fast-scan (FSCV) dentro do striatum mouse. FSCV é um bem definidas técnica eletroquímica proporcionando a oportunidade de medir a liberação de dopamina e absorção em tempo real em dregiões do cérebro iscrete. Microeletrodos de fibra de carbono (diâmetro de ~ 7 mm) são usados ​​em FSCV para detectar oxidação da dopamina. A vantagem analítica de utilizar FSCV para detectar a dopamina é a sua resolução melhorada temporal de 100 milissegundos e resolução espacial de menos de dez microns, fornecendo informações complementares no microdiálise in vivo.

Usando fast-scan voltametria cíclica para medir eletricamente evocado dinâmica pré-sinápticos em fatias de cérebro estriado.

Pré-sináptica de dopamina Dynamics em fatias de cérebro estriado com Fast-scan voltametria cíclica

Pesquisas extensas têm se concentrado no neurotransmissor dopamina devido à sua importância no mecanismo de ação de drogas de abuso (por exemplo, cocaína e ...

O objetivo geral deste procedimento é ilustrar um protocolo geral para a telemetria cíclica rápida por varredura de fatias. Isso é realizado primeiramente preparando o tecido cerebral para corte coronal. Em seguida, eletrodos são posicionados na região cerebral discreta de interesse.O próximo passo é aplicar uma tensão na forma de uma onda triangular por meio do eletrodo para detectar dopamina. Por fim, um agente farmacológico de interesse é aplicado ao fragmento de cérebro e seu efeito sobre a dinâmica pré-sináptica da dopamina é observado. Em última análise, este protocolo mostra alterações na dinâmica pré-sináptica da dopamina, como a liberação estimulada de dopamina e as taxas de captação de dopamina por meio da voltametria cíclica de varredura rápida Telemetry.Embora este método possa fornecer informações sobre a dinâmica dopaminérgica pré-sináptica, ele também pode ser aplicado a outros sistemas, incluindo animais e neurotransmissores, tais como ratos e moscas-das-frutas, e serotonina e noradrenalina, respectivamente. Quem demonstrará o procedimento serão Francis Mena, MEA Khalid e Erin oo, os estudantes de pós-graduação do meu laboratório. Para iniciar este procedimento, de acordo com o manuscrito anexo, prepare três tipos de soluções de fluido céfalo-raquidiano artificial: solução de sacarose A-CSF-A-CSF para gravações voltamétricas e uma solução ACSF modificada para calibração do eletrodo. Em seguida, transfira 10 mililitros da solução de sacarose ACSF para um béquer pequeno e coloque-o em um balde de gelo. Depois, coloque o adesivo instantâneo Loctite em um balde de gelo.Em seguida, prepare uma lâmina de barbear e as ferramentas necessárias para a dissecação, como pinça, espátula e tesoura, limpando-as com um lenço umedecido com álcool. Em seguida, sacrifique um camundongo por decapitação e remova rapidamente seu cérebro. Coloque o cérebro em um béquer contendo sacarose fria a 4 °C por aproximadamente 10 minutos.Enquanto isso, prepare o VIBRAM para o corte. Coloque um pouco de gelo triturado na cuba do espécime. Em seguida, posicione a câmara do espécime no Vibram e fixe-a firmemente.Adicione mais gelo ao redor da câmara de espécime para preencher as lacunas e certifique-se de que nenhum gelo entre na câmara. Em seguida, coloque uma lâmina de barbear limpa no suporte da lâmina. Depois, encha a câmara de espécime com sacarose fria a 4 °C em LCR.Posteriormente, despeje um pouco da solução de sacarose A CSF fria sobre um pedaço de papel-toalha colocado em uma placa de Petri virada para baixo. Transfira o cérebro de camundongo recém-dissecado para o papel com uma pinça. Em seguida, remova o cerebelo cortando ao longo do eixo medial lateral com uma lâmina de barbear.Isso cria uma base plana que pode ser fixada ao estágio vibram. Em seguida, adicione uma gota do adesivo Loctite sobre o estágio da amostra. Fixe imediatamente a extremidade plana do cérebro preparado ao estágio, mantendo-o o mais vertical possível.Em seguida, coloque a platina na câmara de espécimes e aperte o parafuso. Certifique-se de que o cérebro esteja completamente imerso na solução de sacarose A CSF na câmara. Depois disso, ajuste a platina com o controle para que a lâmina de barbear fique alinhada com o topo do cérebro.Os parâmetros ideais para o vibrátomo são obtidos ajustando a frequência e a velocidade para o nível baixo. Em seguida, ajuste a espessura dos cortes para 400 micrômetros. Os primeiros cortes geralmente não contêm o estriado.Repita o corte até obter as fatias contendo o estriado. Uma vez alcançada a região AAL do estriado, use um pincel para levantar a fatia e colocá-la em um béquer com solução salina equilibrada com oxigênio à temperatura ambiente.Tipicamente, pode-se obter três a quatro fatias contendo o complexo estriatal no qual estão incluídos o putâmen caudado e o núcleo accumbens. Deixe as fatias aclimatarem-se em um ACSF borbulhado com 95%O₂ 5%CO₂ à temperatura ambiente por pelo menos uma hora antes de prosseguir com o experimento. Para iniciar este procedimento, conecte a tubulação à câmara de gravação por imersão.Em seguida, perfunda o A CSF oxigenado à temperatura ambiente à taxa de um mililitro por minuto. Ajuste o controlador de temperatura para 32 graus Celsius após o A CSF ter preenchido o suporte personalizado para lâminas. Remova quaisquer bolhas de ar sob a malha utilizando uma seringa com agulha.Crie pressão negativa no tubo de saída com uma seringa para iniciar o fluxo e controlar o transbordamento do tampão. Coloque uma toalha de papel Kim na borda do suporte de fatias para atuar como um pavio. Em seguida, transfira uma fatia para o suporte de fatias na câmara de registro, que é continuamente perfundida com A CSF oxigenado à temperatura ambiente.Mergulhe o eletrodo de referência de cloreto de prata na câmara de fatias e conecte-o ao estágio de cabeçote com um clipe de jacaré. Fixe o microeletrodo de fibra de carbono ao micromanipulador e conecte-o ao estágio de cabeçote com um clipe de jacaré. Em seguida, posicione o eletrodo estimulador de tungstênio e o microeletrodo de fibra de carbono sobre a superfície da fatia cerebral sal.O eletrodo estimulante será usado para aplicar um único pulso ou múltiplos pulsos de estimulação elétrica ao fragmento, a fim de provocar a liberação de neurotransmissores e medir a dopamina evocada eletricamente por meio da voltametria cíclica de varredura rápida ou FSCV, aplicando uma tensão em forma de onda triangular ao eletrodo. Mantenha o potencial do microeletrodo de fibra de carbono em menos 0,4 volts. Aumente-o até um limite positivo de 1,2 volts.Em seguida, retorne-o para menos 0,4 volts com uma taxa de varredura de 400 volts por segundo. Estimule a fatia a cada cinco minutos e realize a medição volumétrica do FLX da dopamina resultante durante 15 segundos cada vez, após pelo menos três. Gravações estáveis de liberação de dopamina estimulada eletricamente definidas como menos de 10% de diferença entre as alturas dos picos.Altere para a perfusão da fatia com um LCR contendo o agente farmacológico de interesse a uma taxa de fluxo de um mililitro por minuto durante 30 minutos para obter o efeito máximo semelhante ao registro basal. Realize a liberação elétrica de dopamina a cada cinco minutos durante a perfusão farmacológica. A Figura A é um exemplo da medição da liberação de dopamina evocada eletricamente utilizando FSCV, após estimulação por pulso único no corpo estriado.A figura B mostra um gráfico tridimensional de pseudocores que combina as informações dos rastros de corrente versus tempo e da voltametria cíclica de Graham. De forma semelhante, as figuras A e C mostram a liberação de dopamina induzida por um único pulso de estimulação elétrica no núcleo e na concha do núcleo accumbens, respectivamente, e os gráficos tridimensionais de pseudocores para o núcleo e a concha do núcleo accumbens são indicados nas figuras B e D, respectivamente. São apresentados aqui traços representativos após o corte ter sido tratado com um agente farmacológico por 30 minutos, seguido por estímulos de pulso único para induzir a liberação de dopamina no putâmen caudado.Os agentes utilizados nos experimentos são quinol, metanfetamina e fator neurotrófico derivado do cérebro. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como preparar fatias coronais do cérebro de camundongo para obter e medir a dinâmica dopaminérgica pré-sináptica utilizando telemetria rápida e provavelmente.

presynaptic-dopamine-dynamics-striatal-brain-slices-with-fast-scan

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Um novo meio de medir a neurotransmissão opticamente usando análogos de dopamina fluorescente.

Liberação de dopamina no Individual Terminais Pré-Sinápticas visualizado com FFNs

A técnica amperométrica mede a libertação de dopamina a partir de uma única célula, detectando a corrente de oxidante produzido pela oxidação da dopamina espontânea. Braçadeira de tensão simultânea e metodologia amperometria revelar a relação mecanicista entre a "atividade" geral do transportador de dopamina eo papel regulador da atividade no transporte reverso da dopamina.

Medição única célula de liberação de dopamina com simultânea de tensão-clamp e amperometria

Este vídeo demonstra o implante de eletrodos e cânulas em um rato anestesiado para medir a liberação de dopamina no núcleo accumbens usando um potenciostato e a infusão de drogas para modular a atividade dopaminérgica na área tegmental ventral.

Monitorando a liberação de dopamina em um modelo de rato com manipulação do receptor de neurônio dopaminérgico VTA

Flutuações rápidas na dopamina extracelular (DA) medeiam tanto o processamento de recompensas quanto o comportamento motivado em mamíferos. Este manuscrito descreve o uso combinado de voltametria cíclica de varredura rápida (FSCV) e administração intraoral de saborizantes para determinar como os saborizantes alteram a liberação rápida de dopamina em ratos acordados e em movimento livre.

Exame de Rapid dopamina Dynamics com Fast digitalização Voltametria Cíclica Durante Intra-oral Administração saborizante em ratos acordados

A voltametria cíclica de varredura rápida pode monitorar neurotransmissão de dopamina in vivo no contexto de drogas, doenças e outras manipulações experimentais. Este trabalho descreve a implementação do QNsim1.0, um software para modelar respostas de dopamina estimuladas eletricamente de acordo com o modelo neurobiológico quantitativo para quantificar estimativas de liberação de dopamina e dinâmica de recaptação.

Modelagem de Dados de Voltammetria Cíclica de Dados Rápidos de Dados de Neurotransmissão de Dopamina Estimulados Eletricamente Usando QNsim1.0

O objetivo deste protocolo é manipular diretamente os receptores da área tegmental ventral para estudar sua contribuição para a liberação de dopamina subsegundo.

Infusão e Estimulação Combinada com Voltammetry Cíclica de Varredura Rápida (CIS-FSCV) para avaliar a regulação do receptor da área tegmental ventral da dopamina fástica

Este relatório demonstra uma técnica para isolamento mecânico de cada um dos neurônios viáveis ​​retenção anexado boutons pré-sináptica. Neurônios Vibrodissociated têm as vantagens de rápida produção, controle farmacológico excelente e melhor espaço grampo sem a influência das células vizinhas. Este método pode ser usado para imagens de elementos sináptica e patch-clamp gravação.

Vibrodissociation de neurônios de fatias do cérebro de roedores para estudar a transmissão sináptica e Imagem Terminais pré-sináptica

A forma robusta para estudar avalanches neuronal, ou seja, escala-invariante rajadas espaço-temporal atividade, indicativo da dinâmica do estado crítico no córtex. Avalanches surgem espontaneamente no desenvolvimento de camadas superficiais do córtex cultura que permite medições a longo prazo da atividade com arrays planar integrada multi-eletrodo (MEA), sob condições estritamente controladas.

Multieletrodos Recordings Array of Avalanches Neuronal em culturas organotípicas

A interface eletrodo-tecido de eletrodos de registro neurais podem ser caracterizados com espectroscopia de impedância elétrica (EIS) e voltametria cíclica (CV). Aplicação de capacidade de gravação de tensão de polarização alterações das propriedades eletroquímicas da interface eletrodo-tecido e pode melhorar. Tensão de polarização, EIS, CV, e gravações neurais são complementares.

Tensão de polarização, voltametria cíclica, espectroscopia de impedância elétrica e para Interfaces Neurais

As gravações de pares são gravações simultâneas de grampo de patch de células inteiras de dois neurônios sinapticamente conectados, permitindo a caracterização eletrofisiológica e farmacológica precisa das sinapses entre neurônios individuais. Aqui descrevemos a metodologia detalhada e os requisitos para estabelecer esta técnica em culturas de fatias organotípicas do hipocampo em qualquer laboratório equipado para eletrofisiologia.

Emparelhados Recordings células inteiras em organotï¿½icas fatias do hipocampo

Aprenda a medir a dinâmica pré-sináptica da dopamina em fatias de cérebro estriado usando voltametria cíclica de varredura rápida. Este protocolo permite observar liberação e recaptação de dopamina em tempo real.

Pré-sináptica de dopamina Dynamics em fatias de cérebro estriado com Fast-scan voltametria cíclica

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