Name: Melhoramento de Indução apoptose e autofagia por um sintético C-1 Novel Analogue, de 7 de deoxypancratistatin em adenocarcinoma de mama humano e células de neuroblastoma com tamoxifeno (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 44 s
Description: Aprenda a avaliar a citotoxicidade seletiva do análogo JCTH-4 combinado com tamoxifeno em células de câncer de mama e neuroblastoma humanos. Este método demonstra indução de apoptose e autofagia com mínimo efeito em fibroblastos normais.

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Este trabalho foi apoiado pelos Cavaleiros de Colombo Capítulo 9671 (Windsor, Ontário), e um CIHR Frederick Banting e Best Charles Canadá Bolsa de Pós-Graduação concedido a Dennis Ma. Obrigado a Robert Hodge e Elizabeth Fidalgo da Silva por sua ajuda com a microscopia de lapso de tempo. Obrigado a Katie Facecchia para editar os vídeos de lapso de tempo de microscopia. Gostaríamos também de agradecer Sudipa junho Chatterjee e Phillip Tremblay, pela revisão crítica deste manuscrito. Este trabalho é dedicado em memória de Kevin Couvillon que perdeu a batalha contra o câncer em 2010.

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<li>Batandier, C., Leverve, X., Fontaine, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opening+of+the+mitochondrial+permeability+transition+pore+induces+reactive+oxygen+species+production+at+the+level+of+the+respiratory+chain+complex+I%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Opening of the mitochondrial permeability transition pore induces reactive oxygen species production at the level of the respiratory chain complex I.</a> J Biol Chem. 279, 17197-17204 (2004).</li>
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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Os compostos de PST e semelhantes têm sido demonstrado que têm propriedades anti-cancro 11-15,21. Nós apresentamos previamente PST natural para desestabilizar a mitocôndria seletivamente nas células cancerosas, que assim induz a apoptose pela liberação de fatores de apoptogénica 12,14. É mais provável que JCTH-4 actua através do mesmo mecanismo; JCTH-4 Fig. causada colapso MMP em células MCF7 como visto com coloração TMRM (Fig. 5a), e aumentou geração de ROS na mit...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do material </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> SH-SY5Y linha celular </td><td> ATCC </td><td> CRL-2266 </td></tr><tr><td> Modificação de Dulbecco Eagles Médio F-12 de HAM </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 51448C </td></tr><tr><td> Soro fetal de bovino </td><td> Gibco BRL </td><td> 16000-044 </td></tr><tr><td> MCF7 linha celular </td><td> ATCC </td><td> HTB-22 </td></tr><tr><td> Meio RPMI-1640 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R 0883 </td></tr><tr><td> Aparentemente normal, linha celular humana fetal fibroblastos (NFF) </td><td> Coriell Institute for Medical Research </td><td> AG04431B </td></tr><tr><td> Meio Dulbecco modificado por Eagle, médio de glucose elevada </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30022.01 </td></tr><tr><td> Tamoxifen sal citrato </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T9262 </td&gt; </tr><tr><td> 35 mm de vidro de cultura pratos de fundo </td><td> MatTek </td><td> P35G-014-C </td></tr><tr><td> Leica DMI6000 microscópio invertido B </td><td> Leica Microsystems </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Hoechst 33342 corante </td><td> Molecular Probes </td><td> H3570 </td></tr><tr><td> Leica DM IRB invertidos microscópio de fluorescência </td><td> Leica Microsystems </td><td> N / A </td></tr><tr><td> A anexina V-488 AlexaFluor </td><td> Invitrogen </td><td> A13201 </td></tr><tr><td> Trypan solução azul </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T8154-20ML </td></tr><tr><td> Hemocitómetro </td><td> Fisher Scientific </td><td> 267110 </td></tr><tr><td> WST-1 reagente </td><td> Roche Applied Science </td><td> 11644807001 </td></tr><tr><td> Wallac Victor 3 1420 Multilabel Contador </td><td> PerkinElmer </td><td> 1420-011 </td></tr><tr><td> Tetrametilrodamina metil éster (TMRM) </td><td> Gibco BRL </td><td> T-668 </td></tr><tr><td> Moedor de tecido de vidro </td><td> Fisher Scientific </td><td> K8885300-0002 </td></tr><tr><td> BioRad ensaio de proteína </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> 500-0001Bottom da Forma </td></tr><tr><td> Amplex Vermelho </td><td> Invitrogen </td><td> A12222 </td></tr><tr><td> Peroxidase de rábano (HRP) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P8125 </td></tr><tr><td> Spectramax Gêmeos XPS </td><td> Molecular Devices </td><td> 3126666 </td></tr><tr><td> Anti-LC3 anticorpo criado em coelhos </td><td> Novus Biologicals </td><td> NB100-2220 </td></tr><tr><td> Anticorpo anti-rato conjugado com HRP secundária </td><td> Abcam </td><td> ab6728 </td></tr><tr><td> Anticorpo anti-coelho conjugado com HRP secundária </td><td> Abcam </td><td> ab6802 </td></tr><tr><td> Substrato de peroxidase de quimioluminescência </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> CPS160 </td></tr><tr><td> Monodansylcadaverine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 30432 </td></tr></tbody></table>

melhoramento de indução apoptose e autofagia por um sintético c-1 novel analogue, de 7 de deoxypancratistatin em adenocarcinoma de mama humano e células de neuroblastoma com tamoxifeno

Enhancement of Apoptotic and Autophagic Induction by a Novel Synthetic C-1 Analogue of 7-deoxypancratistatin in Human Breast Adenocarcinoma and Neuroblastoma Cells with Tamoxifen

O câncer de mama é um dos cânceres mais comuns entre as mulheres na América do Norte. Muitos dos atuais tratamentos anti-câncer, incluindo a radiação ionizante, através de induzir a apoptose danos ao DNA. Infelizmente, tais tratamentos são não-selectivos para as células cancerosas e produzir toxicidade semelhante em células normais. Relatamos indução selectiva da apoptose em células cancerosas pela pancratistatin composto natural (PST). Recentemente, um novo análogo de PST, um derivado de C-1 acetoximetil de 7-deoxypancratistatin (JCTH-4), foi produzido por síntese de novo e exibe actividade indutora comparável selectiva apoptose em diversas linhagens de células cancerosas. Recentemente, autofagia tem sido implicado em doenças malignas como tanto pró-sobrevivência e os mecanismos de pró-morte em resposta à quimioterapia. O tamoxifeno (TAM) tem demonstrado, invariavelmente, a indução de pró-sobrevivência autofagia em inúmeros cânceres. Neste estudo, a eficácia da JCTH-4 isoladamente e em combinação com a TAM para induzir a morte celular em significância da mama humanor (MCF7) e neuroblastoma (SH-SY5Y) células foi avaliada. TAM sozinho induzida autofagia, mas a morte de células insignificante enquanto JCTH-4 sozinho causou indução significativa da apoptose com alguma indução de autofagia. Curiosamente, o tratamento combinatória produziu um aumento drástico na indução de apoptose e autofágica. Foram monitoradas a dependentes do tempo alterações morfológicas em células MCF7 submetidos a TAM induzida por autofagia, JCTH-4-induzida apoptose e autofagia e morte celular acelerada com o tratamento combinatório usando microscopia de lapso de tempo. Nós demonstramos que estes compostos para induzir a apoptose / autofagia por direccionamento mitocondrial nestas células cancerosas. É importante ressaltar que estes tratamentos não afetaram a sobrevivência dos não cancerosos fibroblastos humanos. Assim, estes resultados indicam que JCTH-4 em combinação com a TAM poderia ser utilizado como uma forma segura e muito potente terapia anti-cancro contra o cancro da mama e células de neuroblastoma.

Temos sintetizado um análogo romance de pancratistatin com atividade anti-câncer comparável como pancratistatin nativa; curiosamente, o tratamento com tamoxifeno combinatória rendeu uma drástica melhoria na indução de apoptose e autofagia por mitocôndria com efeito mínimo sobre os fibroblastos não cancerosos. Assim, JCTH-4 em combinação com o tamoxifen poderia proporcionar uma terapia anti-cancro segura.

Melhoramento de Indução apoptose e autofagia por um sintético C-1 Novel Analogue, de 7 de deoxypancratistatin em adenocarcinoma de mama humano e células de neuroblastoma com tamoxifeno

O câncer de mama é um dos cânceres mais comuns entre as mulheres na América do Norte. Muitos dos tratamentos anticancerígenos atuais, incluindo a radiação ionizante, induzem...

O objetivo geral deste procedimento é avaliar a toxicidade seletiva e o mecanismo de morte celular induzido pelo J CTH quatro, um análogo sintético do composto natural pancreatostatina, isoladamente e em combinação com tamoxifeno, em células humanas de câncer de mama e neuroblastoma. Isso é realizado primeiramente cultivando células de câncer de mama MC sete, células de neuroblastoma SHSY cinco Y e fibroblastos fetais normais ou NFF. O segundo passo consiste em avaliar a citotoxicidade do J CTH quatro e do tamoxifeno isoladamente ou em combinação.Ao tratar células com essas drogas e monitorar alterações morfológicas dependentes do tempo, características da apoptose e autofagia. Em seguida, o mecanismo de indução de apoptose e autofagia é investigado mediante o monitoramento do potencial da membrana mitocondrial e da produção de espécies reativas de oxigênio em mitocôndrias isoladas dessas células cancerosas. Por fim, a fotografia com intervalo de tempo e vários ensaios bioquímicos são utilizados para demonstrar que o JCT quatro induz apoptose e autofagia em células de câncer de mama humano e neuroblastoma, e esses efeitos são dramaticamente potencializados pela adição de tamoxifeno

enhancement-apoptotic-autophagic-induction-novel-synthetic-c-1

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JoVE Journal

Medicine

Medicina

Tipo B à base de gelatina sistema nanovectors engenharia (GENS) foi desenvolvido para a entrega do gene sistêmica e transfecção no tratamento de câncer pancreático. Por modificação com receptor fator de crescimento epidérmico (EGFR) peptídeos específicos na superfície da nanparticles, eles poderiam alvo no receptor EGFR e liberação do plasmídeo em reduzir ambiente, tais como altas concentrações de glutationa intracelular.

Entrega de genes e Transfection em células pancreáticas humanas Cancer usando Fator de Crescimento Epidérmico Receptor-alvo à base de gelatina Nanovectors Engineered

Autophagy é um processo ubíquo que permite que as células para se degradarem e reciclar proteínas e organelas. Aplicamos microscopia de fluorescência para visualizar avançada e quantificar o pequeno, mas, alterações físicas essenciais associados com a indução de autofagia, incluindo a formação e distribuição de autofagossomas e lisossomas, e sua fusão em autolysosomes.

Análise Quantitativa de Autophagy usando microscopia de fluorescência avançada 3D

A actividade citotóxica do fenantridina PJ-34 em células de cancro sujeitos a mitose foi documentada em tempo real por meio de imagem confocal vivo. PJ-34 erradicou o câncer de mama humano MDA-MB-231 células abrigam extra-centrossomas na mitose. Ao contrário de mitose bi-focal normal, o Extra-centrossomas não foram agrupados nos dois pólos do fuso na presença de PJ-34.

A morte celular associada com mitose anormal observado por imagem confocal em células vivas Câncer

Três cultura tridimensional de células epiteliais mamárias de uma membrana basal reconstituída é um método útil para recapitular a arquitectura in vivo da mama benigna, e para diferenciar o fenótipo maligno do fenótipo da mama benigna. Importante, este sistema pode ser aplicado para estudar os carcinomas invasivos em outros tecidos.

Três Culturas dimensionais: Uma ferramenta para o estudo normal Acináceo Arquitetura vs transformação maligna das células de mama

Um módulo de laboratório viável para alunos de graduação em biologia que explora conceitos celulares e moleculares avançados usando cultura de células animais é descrito. Os alunos crescem, caracterizam e manipulam um modelo de célula de câncer de mama por exposição a agentes quimioterápicos. A viabilidade celular é testada por meio da contagem de células usando um método padrão e novo.

Usando o rato do mamárias Células Tumorais para ensinar Biologia Conceitos Básicos: A Módulo Lab Simples

Aqui, descrevemos um método de microscopia de lapso de tempo de longo prazo para rastrear longitudinalmente células individuais em resposta à terapêutica anticâncer.

Through the Looking Glass: Microscopia Time-lapse e Longitudinal de rastreamento de células individuais para estudar Therapeutics Anti-câncer

Este procedimento demonstrará como sintetizamos e caracterizamos a atividade de células-tronco anti-NFκB e anticancerígenas de um pró-fármaco aspirina-fumarato.

Síntese e Caracterização de um pró-fármaco Aspirina-fumarato que inibe a actividade NFkB e da mama câncer de células estaminais

O objetivo deste protocolo é determinar os níveis autofágicos em câncer de pâncreas e células acinares pancreáticas através da imunofluorescência da LC3 e quantificação do ponto da CL3.

Avaliação dos Níveis de Autofagia em Dois Diferentes Modelos de Células Pancreáticas Utilizando Imunofluorescência LC3

O presente protocolo descreve uma estratégia abrangente para avaliar a ação farmacológica e o mecanismo do salidrosídeo na inibição da proliferação e migração de células MCF-7.

Explorando a Ação Farmacológica e o Mecanismo Molecular do Salidrosídeo na Inibição da Proliferação e Migração de Células MCF-7

O método descrito o isolamento e caracterização de células pulpares humanas estaminais (hDPSCs)...

Isolamento, caracterização e comparativa Diferenciação de células-tronco da polpa dentária Derivado de dentes permanentes usando dois métodos diferentes

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Melhoramento de Indução apoptose e autofagia por um sintético C-1 Novel Analogue, de 7 de deoxypancratistatin em adenocarcinoma de mama humano e células de neuroblastoma com tamoxifeno

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