Name: Isolamento e Expansão da Human Glioblastoma Multiforme Células Tumorais Utilizando o Ensaio Neurosphere (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Aprenda o isolamento e expansão de células-tronco de glioblastoma multiforme humano usando o ensaio neuroesfera. Este método permite estudar biologia tumoral e identificar alvos terapêuticos potenciais.

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Este trabalho foi financiado por doações do Centro de Pesquisa Florida tumor cerebral; Preston A. Wells Jr. Centro de Terapia tumor cerebral.

1. Coleta de Tecido GBM primário <ol><li> A glioblastoma mutliforme tumor (GBM) é obtido a partir de um paciente diagnosticado com o câncer e submetidos a cirurgia. </li><li> Providências devem ser feitas com a equipe de neurocirurgia. O neurocirurgião vai colocar o tumor ressecado GBM em um tubo de tamanho apropriado que contém células-tronco neurais (NSC) meio basal suplementado com antibióticos 10-15% (Peniciline / estreptomicina). Meio frio deve ser fornecida à sala de cirurgia por laboratório. Alternativamente, frio HEPES-buffered meio mínimo essencial (HEM) ou tampão fosfato salino (PBS) com alta concentração de antibióticos também pode ser usado para esta finalidade. </li><li> O tecido do tumor ressecado é entregue ao laboratório em gelo e colocado sob o capô. </li></ol> 2. Dissociação do tumor primário em uma única célula Suspensão <ol><li> Excesso do meio original / PBS é removido do tubo falcon ea amostra é lavado 2-3 vezes com 5-10ml de PBS / NSC meio basal para remover o sangue e detritos. A PBS / Medium é removido eo tecido do tumor GBM é colocado em uma placa de Petri. </li><li> O tecido é cortado em pedaços pequenos e picada com uma lâmina de bisturi n º 10 em pedaços pequenos para aumentar a área de superfície para o processo de tripsinização. Picadura pode demorar alguns minutos 1-3, dependendo do tamanho do tumor. </li><li> O tecido é picada tripsinizados em 3-5ml de pré-aquecido 0,05% tripsina-EDTA por 10-15 minutos em banho-maria a 37 ° C. Uma pipeta eletrônico é usado para transferir as peças de tumor pequeno e tripsina em um tubo Falcon 15ml. </li><li> Um volume igual de inibidor de tripsina de soja é adicionada para parar a reacção enzimática de tripsina após o período de incubação. </li><li> Inativação da tripsina é assegurada por pipetagem de suspensão para cima e para baixo várias vezes. Então, a suspensão é peletizada para baixo por centrifugação a 800rpm (110g) para 5min. </li><li> O sobrenadante é descartado e os pedaços de tecido são suspensas em 1 ml de estéril NSC bamédio sal. Os aglomerados são dissociados por pipetagem suavemente para cima e para baixo (3-7 vezes) até que uma suspensão de células lisas única leitosa é obtida. O número de etapas de pipetagem depende diretamente do tamanho das partículas no tecido picada. Longa e vigorosa dissociação mecânica deve ser evitado, pois pode resultar em morte celular e uma redução na formação de esfera. </li><li> Para remover un-dissociada pedaços e fragmentos, 10-15 ml de meio basal é adicionado ao tubo e da suspensão de células é filtrada através de um filtro celular 40 mícrons em um tubo de 50ml. </li><li> A suspensão é filtrada centrifugado a 800rpm (110g) para 5min. O sobrenadante é descartado depois. </li><li> Pelletted células são então ressuspenso em 1-2ml de meio de NSC completa para contagem das células. </li></ol> 3. Contagem de Células e Galvanização <ol><li> 10 mL da suspensão de células é adicionado a 90 mL de 0,04% Trypan azul em um tubo eppendorf de 1ml. Nota: outras células diluição adequadações também podem ser usados. </li><li> Pipeta cima e para baixo para misturar a suspensão. 10 L das células / mistura de azul de tripano é transferido para hemocitômetro para contagem de densidade celular. </li><li> Células são banhados em meio NSC completa (uma mistura de NSC meio basal e complementar NSC proliferação em uma proporção de 9:1), suplementado com 20ng/mL EGF, bFGF e 10ng/ml 1μl/ml de heparina 0,2% (2μg/ml) em vasos de cultura apropriado tecido. 5, 20 e 40 ml de meio é usado para frascos T25, T80 e T175, respectivamente. Antibióticos podem ser adicionadas ao meio em uma concentração de 1:100 para diminuir chances de contaminação. </li><li> O balão é colocado em uma incubadora regulada a 37 ° C e 5% CO 2. </li></ol> 4. Passaging e expansão do GBM esferas derivados: <ol><li> Quando o neurospheres chegou a um tamanho médio de 150-200 m de diâmetro, a cultura está pronta para subcultura. O conteúdo de cada balão é retirado e colocado em um tamanho adequado tiss estérilue tubo de cultura, e centrifugados a 800 rpm (110 g) por 5 min à temperatura ambiente. </li><li> O sobrenadante é removido eo pellet é ressuspenso em 1 ml de 0,05% tripsina-EDTA. </li><li> Para conseguir um ótimo tripsinização, a suspensão celular é incubada a 37 ° C em banho-maria por 2-3 min. Para interromper a atividade de tripsina um volume igual de inibidor de tripsina de soja é adicionada à suspensão de células e suspensão de células é suavemente pipetado cima e para baixo. </li><li> A suspensão celular é centrifugado a 800 rpm (110g) por 5 min. Em seguida, o sobrenadante é removido e as células são ressuspendidas em 1 ml de meio de NSC. </li><li> A contagem de células é realizada conforme descrito anteriormente. </li><li> As células são banhados em uma concentração de 5x10 4 células / ml em meio NSC completo suplementado com fatores de crescimento e semeadas em vasos de tamanho apropriado de cultura de tecidos como descrito na parte anterior. </li><li> Neurospheres secundário são formados no dia 10/07 quando incubados a 37 ° C em um úmidoified incubadora com 5% de CO 2. </li></ol> 5. Resultados representativos: Após o plaqueamento das células individuais colhidos GBM tecido tumoral, tumor de células-tronco como proliferar e gerar pequenos aglomerados de células composto por poucas células em 3-4 dias (veja o vídeo e Figura 1). Como estes grupos crescem, eles adquirem uma forma mais esférica de modo que, 7-8 dias, esferas fase adequada brilhante com um diâmetro médio de 150-200 formulário microns (Veja o vídeo e Figura 2). Na maior ampliação, esferas saudável geralmente demonstram microspikes em sua periferia. Tendo como grande esfera clusters em 1-2 dias após o início da cultura é devido à existência de não-dissociada aglomerados na binging da cultura e não deve ser confundido como esferas de fato. A quantidade de detritos na cultura esfera tumor primário varia de acordo com a fonte inicial de tecido e se é ou não inclui qualquer tecido cerebral circundante. Técnicas de preparação adequada do tecidoincluindo dissociação enzimática e mecânica, e posterior filtração da amostra com uma quantidade suficiente de médio pode resultar em menos detritos na cultura. <img src="/files/ftp_upload/3633/3633fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Esfera da cultura primária GBM quatro dias após o plaqueamento. Tumor-tronco como células proliferam e geram pequenos aglomerados de células em 3-4 dias. Ampliação original; 20x. <img src="/files/ftp_upload/3633/3633fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Passage uma cultura esfera GBM 8 dias após o plaqueamento. Ampliação original; 20x.

<ol><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li>
<li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22+Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods Mol Biol. 750, 61-77 (2011).</li>
<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393-e2393 (2010).</li>
<li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457-e2457 (2011).</li>
<li>Eramo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+expansion+of+the+tumorigenic+lung+cancer+stem+cell+population%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Identification and expansion of the tumorigenic lung cancer stem cell population.</a> Cell Death Differ. 15, 504-514 (2008).</li>
<li>Patrawala, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+purified+CD44%2B+prostate+cancer+cells+from+xenograft+human+tumors+are+enriched+in+tumorigenic+and+metastatic+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Highly purified CD44+ prostate cancer cells from xenograft human tumors are enriched in tumorigenic and metastatic progenitor cells.</a> Oncogene. 25, 1696-1708 (2006).</li>
<li>Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intrinsic+resistance+of+tumorigenic+breast+cancer+cells+to+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl.+Cancer.+Inst%22%5BJournal%5D)">Intrinsic resistance of tumorigenic breast cancer cells to chemotherapy.</a> J Natl. Cancer. Inst. 100, 672-679 (2008).</li>
<li>Galli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+tumorigenic%2C+stem-like+neural+precursors+from+human+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of tumorigenic, stem-like neural precursors from human glioblastoma.</a> Cancer Res. 64, 7011-7021 (2004).</li>
<li>Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+label-retaining+tumour-initiating+cells+in+human+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Evidence for label-retaining tumour-initiating cells in human glioblastoma.</a> Brain. 134, 1331-1343 (2011).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Para isolar-tronco neurais e células progenitoras de adultos normais e cérebros fetal 1, 2, 3, 4 e também tumor-tronco como células dos tecidos do câncer, como pulmão 5, 6 de próstata, mama e cérebro 7 8, 9, o ensaio foi neurosphere freqüentemente usado como o método de escolha. Com este ensaio simples e reprodutível, pode-se gerar um número indefinido de células do tecido do tumor ressecado que mostram características similares como células-tronco somáticas; multipotency ex vivo, a capacidade de criar novos tumores após o implante, e auto-renovação. Essas células poderiam ser usadas para estudar a biologia celular básica, incluindo câncer de célula a célula-interações, e, a diferenciação de migração, invasão e morte celular. Além disso, isolado tumor-tronco como células fornecem uma ferramenta valiosa para estudar como os tumores de forma, o progresso ea recaída e também para desvendar os mecanismos celulares subjacentes decorrentes que, eventualmente, poderiam fornecer insights para terapêuticaopções.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Tipo </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC Basal Medium (Humana) </td><td> Médio </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 05750 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult NSC Suplementos Proliferação (Humana) </td><td> Suplemento médio </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 05753 </td><td></td></tr><tr><td> 0,05% de tripsina-EDTA </td><td> Reagente </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td> Reagente </td><td> Gibco </td><td> 41500-018 </td><td> Componente HEM </td></tr><tr><td> * HEPES </td><td> Reagente </td><td> Sigma </td><td> H4034 </td><td> Componente HEM </td></tr><tr><td> * A água destilada </td><td> Reagente </td><td&gt; Gibco </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> ** DNase I </td><td> Reagente </td><td> Roche </td><td> 104159 </td><td></td></tr><tr><td> ** Inibidor de tripsina de soja </td><td> Reagente </td><td> Sigma </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> Reagente </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> No. 10 lâmina de bisturi </td><td> Ferramenta cirúrgica </td><td> BD </td><td> 371610 </td><td></td></tr><tr><td> Petri Dish </td><td> Cultura software </td><td> BD Falcon </td><td> 353003 </td><td></td></tr><tr><td> Pequeno fórceps </td><td> Instrumentos cirúrgicos </td><td> Multa Ferramentas Ciência </td><td> 11050-10 </td><td></td></tr><tr><td> Coador celular </td><td> Peneira </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> T25 frasco </td><td> Cultura software </td><td> Nalge Nunc internacionais </td><td> 136196 </td><td></td></tr><tr><td> T80 frasco </td><td> Cultura software </td><td> Nalge Nunc internacionais </td><td> 178905 </td><td></td></tr><tr><td> Tubos de 15 ml </td><td> Cultura software </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> Tubos de 50 ml </td><td> Cultura software </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> EGF </td><td> Fator de crescimento </td><td> R &amp; D </td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> b-FGF </td><td> Fator de crescimento </td><td> R &amp; D </td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td> Heparina </td><td> Fator de crescimento </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> Reconstituído em PBS </td></tr></tbody></table> * Para fazer HEM, mix de pacotes 1x10L de MEM and160ml de HEPES 1M e obter um volume de 8,75 L com água destilada. Definir o pH final para 7,4 umd armazenar a 4 ° C. ** Para preparar solução inibidora de tripsina, primeiro fazer 10 ml de solução de DNase I (100 mg DNase dissolvida em 100 ml de HEM) e em seguida, adicionar 0,14 g de inibidor de tripsina para a solução DNase e, finalmente, tornar o volume até 1 litro utilizando HEM. Manter as alíquotas dos produtos finais em -20 ° C freezer.

isolamento e expansão da human glioblastoma multiforme células tumorais utilizando o ensaio neurosphere

Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay

-Tronco como células foram isoladas em tumores como mama, pulmão, cólon, próstata e cérebro. Uma questão crítica em todos estes tumores, especialmente em mutliforme glioblastoma (GBM), é identificar e isolar a população de células tumorais iniciar (s) para investigar o seu papel na formação de tumores, progressão e recorrência. Tumor compreensão iniciar populações de células irá fornecer pistas para encontrar abordagens terapêuticas eficazes para estes tumores. O ensaio neurosphere (NSA), devido à sua simplicidade e reprodutibilidade tem sido utilizado como o método de escolha para isolamento e propagação de muitas das células tumorais isso. Este protocolo demonstra o método de cultura neurosphere para isolar e expandir-tronco como células no tecido humano ressecado cirurgicamente GBM tumor. Os procedimentos incluem uma digestão química inicial e dissociação mecânica do tecido tumoral e, posteriormente, chapeamento da suspensão de células resultantes único da cultura NSA. Após 70-10 dias, neurospheres primária de 150-200 m de diâmetro podem ser observadas e estão prontos para mais passaging e expansão.

Este protocolo vídeo demonstra o isolamento e expansão de células-tronco como de mutliforme glioblastoma humano ressecado cirurgicamente (GBM) tecido tumoral utilizando o método de cultura neurosphere ensaio.

Isolamento e Expansão da Human Glioblastoma Multiforme Células Tumorais Utilizando o Ensaio Neurosphere

Células do tipo tronco foram isoladas em tumores como os de mama, pulmão, cólon, próstata e cérebro. Uma questão crítica em todos esses tumores, especialmente em...

O objetivo deste protocolo é o isolamento e a expansão de células tumorais de glioblastoma multiforme humano utilizando o método de neuroesferas. Isso é alcançado inicialmente pela trituração do tecido tumoral colhido, seguida pela dissociação mecânica e, finalmente, pelo plaqueamento das células resultantes para crescerem em cultura de neuroesferas. Neste vídeo, vamos mostrar como isolar e expandir células semelhantes a células-tronco a partir de tecido tumoral de glioblastoma humano utilizando o método de cultura de neuroesferas.Este método também pode ser utilizado para cultivar células de outros tumores cerebrais, bem como tumores sólidos, como os de mama, próstata, fígado e pulmão. Pronto, vamos começar. Após receber o tecido tumoral de GBM ressecado proveniente da cirurgia, o meio é removido.O tumor é lavado duas ou três vezes usando PBS estéril para remover contaminantes como sangue e debris. Após a lavagem, coloque o tumor ressecado em uma placa de Petri estéril. Primeiro, corte o tumor em porções menores, depois transfira uma porção do tecido tumoral para uma placa de Petri separada e pique o tecido usando uma lâmina número 10 em pedaços minúsculos.Isso aumentará a área superficial disponível para a dissociação enzimática. O picamento pode levar de um a três minutos, dependendo do tamanho do tumor. Agora, adicione de três a cinco ml de tripsina pré-aquecida ao tecido picado e transfira-o para um tubo falcon estéril de 15 ml.Coloque o tubo de 15 mL em banho-maria a 37 graus por 10 a 15 minutos. Agite o tubo a cada cinco minutos. Para garantir uma melhor digestão do tecido, adicione um volume igual de inibidor de tripsina para interromper a reação.A ativação da tripsina é garantida pipetando para cima e para baixo várias vezes. Centrifugue a suspensão a 800 RRP M ou 110 G durante cinco minutos. Remova o sobrenadante, depois re-suspenda o pellet em um mL de meio basal para células-tronco neurais, colocando a ponteira contra o fundo do tubo.Pipete para cima e para baixo de três a sete vezes para desfazer grumos até obter uma suspensão leitosa, pois pipetar em excesso pode resultar em morte celular. Coloque um filtro de 40 micrômetros sobre um tubo de 50 ml. Agora, adicione 10 a 15 ml de meio basal à suspensão celular e misture suavemente, passando a suspensão celular através do filtro de 40 micrômetros para remover detritos e grumos não associados.PT as células e remova o sobrenadante a vácuo. Re-suspenda as células em um a dois mL de meio completo. Em seguida, pipete suavemente para cima e para baixo para homogeneizar a suspensão.Misture 10 microlitros da suspensão celular em 90 microlitros de azul de tripano. Homogeneíze bem a suspensão e transfira 10 microlitros para o hemocitômetro. Realize uma contagem celular conforme mostrado aqui.É necessária uma suspensão de células únicas, sem agregados, para obter uma contagem celular precisa. Não inclua células positivas para azul de tripano. Ao contar para semear as células em um frasco T80.Adicione 20 ml de meio completo para células-tronco neurais a um tubo de 50 ml. Adicione a quantidade apropriada de suspensão celular para atingir uma densidade de 200.000 células por ml. Agora, adicione EGF para obter uma concentração final de 20 nanogramas por ml.Adicione heparina 0,2% na concentração de um microlitro por ml. Por fim, adicione BFGF para atingir uma concentração final de 10 nanogramas por ml. Misture as células em meio completo suplementado com fatores de crescimento.Em seguida, transfira a suspensão para um frasco T 80. Coloque o frasco no incubador a 37 graus Celsius e 5% de CO2 por sete a dez dias. Após oito dias em cultura, as esferas estão completamente desenvolvidas e prontas para serem repassadas.Colete o conteúdo do frasco e transfira para duas centrífugas de 50 ml. Centrifugue as células a 800 RPM por cinco minutos. Remova o sobrenadante a vácuo, depois re-suspenda o pellet em 1 ml de tripsina pré-aquecida.Incube as células em banho-maria a 37 graus Celsius por dois minutos. Adicione uma quantidade igual de inibidor de tripsina e misture bem para garantir uma ativação. Em seguida, peloteie as células.Remova o sobrenadante e ressuspenda as células em 1 ml de meio completo, pipetando suavemente para cima e para baixo para homogeneizar a suspensão celular. Realize uma contagem celular conforme descrito anteriormente, para semear as células em um frasco T80 com 20 ml de meio completo em um tubo de 50 ml. Adicione uma quantidade apropriada de suspensão celular para atingir uma densidade de 50.000 células por ml.Agora adicione fatores de crescimento, incluindo E-G-F-B-F-G-F e heparina, na concentração descrita anteriormente. Misture suavemente a suspensão celular resultante e, em seguida, transfira a suspensão para um frasco T 80 e coloque no incubador por sete a dez dias. Este é um exemplo de cultura primária de GBM.Após quatro dias nesta fase, é possível observar que as células estão se proliferando e começando a formar esferas. Você não deve observar grandes aglomerados esféricos de células nesta fase. Isso teria resultado de um preparo inadequado do tecido.Após sete a 10 dias em cultura, esferas de tamanhos variados se formaram; quando as esferas atingem um diâmetro médio de 150 a 200 micrômetros, estão prontas para serem subcultivadas. Este é um exemplo de cultura de passagem de GBM após oito dias. Novamente, é possível observar esferas de tamanhos variados; esferas saudáveis exibem microespículas em sua periferia.Preparar uma suspensão de células isoladas é uma questão muito importante em qualquer cultura de esferoides. Caso contrário, você poderá acabar observando agregados celulares mesmo no dia seguinte ao plaqueamento das células. Esses agregados podem ser considerados esferoides, mas deve-se notar que leva pelo menos uma semana para que as células perfurem e formem esferoides verdadeiros.A quantidade de detritos em culturas de esferas de tumor primário varia conforme diversos fatores, como a origem do tecido, o quão preciso foi o seu isolamento e também a técnica de processamento do tecido. Esperamos que este vídeo seja útil e desejamos boa sorte em seus experimentos.

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JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este protocolo video demonstra o método de ensaio neurosphere para gerar e expandir as células-tronco neurais adultas da região periventricular do mouse, e fornece informações técnicas para garantir um pode conseguir culturas neurosphere reprodutível.

Isolamento e Expansão do Rato Adulto células-tronco neurais utilizando o ensaio Neurosphere

Este vídeo demonstra o ensaio de invasão de células-tronco tumorais cerebrais (BTSC) in vitro para determinar o efeito do tratamento medicamentoso na capacidade de invasão de BTSCs da neuroesfera por meio da técnica de imagem de células vivas.

Ensaio de invasão da neuroesfera de células-tronco tumorais cerebrais (BTSC): um ensaio in vitro para analisar o efeito do tratamento medicamentoso na invasão de BTSC da neuroesfera

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Otimização da cultura celular glioma de alto grau a partir de espécimes cirúrgicos para uso em modelos animais clinicamente relevantes e imunoquímica 3D

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Avaliação de biomarcadores em Glioma por imuno-histoquímica na parafina Glioma 3D Neurosphere culturas

Aqui apresentamos um sistema de cultura monocamada mista ex-vivo para o estudo da migração de células glioma humanas (hGC) em tempo real. Este modelo fornece a capacidade de observar interações entre hGCs e axônios mielinated e não-myelinated dentro de uma câmara compartimentada.

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A microdissecção a laser (LMD) é uma técnica sensível e altamente reprodutível que pode ser usada para descobrir caminhos que mediam a heterogeneidade e invasão do glioma. Aqui, descrevemos um protocolo otimizado para isolar áreas discretas do tecido glioma usando LMD a laser seguido de análise transcritiva.

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