Name: Em novembro deste ano em JOVE (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 51 s
Description: Descubra os destaques da edição de novembro do Journal of Visualized Experiments. Explore avanços em neurociência e biologia com experimentos visualizados que revelam novos comportamentos neuronais e técnicas inovadoras.

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<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3505/">Medição de Fluxos Rápidos de Cálcio em Cardiomiócitos</a></h2>
Urszula Golebiewska1, Suzanne Scarlata2 1Departamento de Ciências Biológicas e Geologia, Queensborough Community College, 2Departamento de Fisiologia e Biofísica, Stony Brook University
Apresentamos um método para isolar eventos rápidos (microssegundos) de cálcio de fluxos mais lentos em células vivas usando microscopia confocal de varredura a laser. O método mede as flutuações de intensidade de fluorescência dos indicadores de cálcio registrando varreduras de linha de várias centenas de pixels em uma célula. A análise de histograma nos permite isolar as escalas de tempo de diferentes fluxos de cálcio.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3373/">Síntese de submonômeros em fase sólida de polímeros peptóides e sua automontagem em nanofolhas altamente ordenadas </a></h2>
Helen Tran, Sarah L. Gael, <cor da fonte = 'preto'>Michael D. Connolly, <cor da fonte = 'preto' >Ronald N. Fundição Molecular Zuckermann , Laboratório Nacional Lawrence Berkeley
Um método manual simples e geral de síntese de peptóides envolvendo equipamentos básicos e reagentes disponíveis comercialmente é descrito, permitindo que os peptóides sejam facilmente sintetizados na maioria dos laboratórios. A síntese, purificação e caracterização de um peptóide anfifílico 36mer é descrita, bem como sua automontagem em nanofolhas altamente ordenadas.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3258/">Avaliação Comportamental da Destreza Manual em Primatas Não Humanos</a></h2>
<font color='black'>Eric Schmidlin*, Mélanie Kaeser*, Anne- Dominique Gindrat, Julie Savidan, Pauline Chatagny, Simon Badoud, Adjia Hamadjida, Marie-Laure Beaud, Thierry Wannier, Abderraouf Belhaj-Saif, Eric M. Departamento de Medicina Rouiller , Universidade de Friburgo * Esses autores contribuíram igualmente
Como a destreza manual é uma prerrogativa principalmente dos primatas, tarefas comportamentais têm sido desenvolvidas em macacos. Quatro tarefas de preensão de alcance e preensão, medindo a capacidade e a força de manipulação da mão, permitem estabelecer a recuperação funcional após uma lesão do sistema nervoso central e testar o efeito de um tratamento.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3588/">Determinando a atividade fagocítica de amostras clínicas de anticorpos</a></h2>
Elizabeth G. McAndrew1, <cor da fonte = 'preto' > Anne-Sophie Dugast1, < cor da fonte = 'preto' > Anna F. Licht1, Justin R. Eusébio1, <cor da fonte = 'preto' > Galit Alter1, < cor da fonte = 'preto'>Margaret E. Ackerman2 1Hospital Geral de Massachusetts, Instituto Ragon de MGH, MIT e Harvard, 2Escola de Engenharia Thayer, Dartmouth College
Apresentamos um ensaio citométrico de fluxo de alto rendimento para determinar a atividade fagocítica de anticorpos específicos de antígeno de amostras clínicas, utilizando esferas revestidas de antígeno fluorescente e uma linha celular monocítica expressando múltiplos receptores Fc - fornecendo uso de receptor e determinações de atividade fagocítica de forma padronizada e reprodutível para qualquer antígeno de interesse.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3187/">Estudo do citoesqueleto de actina em células endoteliais vivas que expressam GFP-actina</a></h2>
Travis M. Doggett, <cor da fonte = 'preto'>Jerome W. Departamento de Fisiologia de Breslin , Centro de Ciências da Saúde da Universidade Estadual da Louisiana Imagens microscópicas de células endoteliais vivas que expressam GFP-actina permitem a caracterização de mudanças dinâmicas nas estruturas do citoesqueleto. Ao contrário das técnicas que usam espécimes fixos, este método fornece uma avaliação detalhada das mudanças temporais no citoesqueleto de actina nas mesmas células antes, durante e depois de vários estímulos físicos, farmacológicos ou inflamatórios.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3260/">Implantação de transmissores de radiotelemetria que produzem dados sobre ECG, frequência cardíaca, temperatura corporal central e atividade em camundongos de laboratório em movimento livre</a></h2>
Nikola Cesarovic1, Paulin Jirkof2, Andreas Rettich2, Margarete Arras1 1Divisão de Pesquisa Cirúrgica, Hospital Universitário de Zurique, 2Instituto de Ciência de Animais de Laboratório, Universidade de Zurique
Uma técnica cirúrgica para implantação de transmissores de telemetria disponíveis comercialmente usados para medição contínua de biopotencial (ECG de uma derivação), frequência cardíaca, temperatura corporal central e atividade locomotora em camundongos em movimento livre é mostrada. Também são apresentadas recomendações e protocolos para cuidados pós-operatórios e alívio da dor, melhorando a recuperação, o bem-estar e a taxa de sobrevida.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3381">Eletroporação do Mesenquima Craniofacial</a></h2>
Jacqueline M. Tabler, Karen J. Departamento de Desenvolvimento Craniofacial de Liu , King's College London
As cartilagens craniofaciais se desenvolvem em contato próximo com outros tecidos e são difíceis de manipular em animais vivos. Estamos usando eletroporação para fornecer ferramentas moleculares durante o crescimento do esqueleto craniofacial, ignorando os efeitos embrionários iniciais. Essa abordagem nos permitirá testar com eficiência moléculas candidatas in vivo.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3379">Registro eletrofisiológico de fatias e estimulação optogenética de neurônios nascidos em adultos no bulbo olfatório</a></h2>
Matthew Valley, Sebastian Wagner, Benjamin W. Gallarda, Laboratório Pierre-Marie Lledo de Percepção e Memória, Institut Pasteur e Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)
Neurônios nascidos em adultos que expressam ChR2 podem ser manipulados em preparações eletrofisiológicas de fatia para examinar sua contribuição para a função dos circuitos neurais olfativos.

em novembro deste ano em jove

November 2011: This Month in JoVE

O número de novembro do Journal of Visualized Experiments começa com uma série de experimentos comportamentais para medir a capacidade de preensão em primatas. Pesquisadores da Universidade de Friburgo demonstram quatro tarefas de preensão e alcance, que seguem etapas comuns para restringir confortavelmente o animal e posicionar corretamente sua cabeça. O teste do Brinkman Board é usado para avaliar o alcance de objetos estáticos, enquanto o Brinkman Board Rotativo apresenta uma condição na qual os animais precisam antecipar a posição do objeto. O teste da Caixa Brinkman permite investigar a destreza em condições nas quais o macaco tem menos graus de liberdade para realizar a tarefa de preensão e não pode usar a visão para orientar o movimento. Enquanto os testes do Brinkman Board e da Caixa Brinkman dependem exclusivamente da análise de vídeos obtidos durante os experimentos, o aparato da tarefa de alcance de gaveta possui detectores que monitoram as forças de preensão e carga, bem como a posição da gaveta, gerando dados e tornando este teste adequado para medir força e capacidade de preensão. Em conjunto, esses quatro testes oferecem uma abordagem poderosa para avaliar o controle motor no membro anterior distal, e o grupo de Friburgo apresenta dados de estudos com lesões e experimentos destinados a testar terapias potenciais para lesões da medula espinhal. Na seção de Medicina Clínica e Translacional, colaboradores da Divisão de Pesquisa Cirúrgica do Hospital Universitário de Zurique e do Instituto de Ciência de Animais de Laboratório da Universidade de Zurique trabalham juntos para implantar um dispositivo de radiotelemetria em camundongos, que pode ser usado para obter medidas fisiológicas em animais livres para se movimentar. Os dispositivos consistem em dois eletrodos, capazes de medir atividade biopotencial (ECG, EEG ou EMG) e temperatura, e um transmissor de rádio leve (com largura de banda de 1-200 Hz) que pode ser implantado na cavidade abdominal. O estresse provocado pelo manejo dos animais, bem como a anestesia, são fatores de confusão conhecidos que afetam as medidas fisiológicas; portanto, os dispositivos de radiotelemetria são uma maneira conveniente de adquirir dados fisiológicos de animais em estado natural e inalterado, além de permitir a coleta simultânea de dados de múltiplos animais. O JoVE também acrescenta à sua coleção de protocolos de eletroporação um método para introduzir macromoléculas no mesênquima craniofacial de girinos em desenvolvimento de Xenopus laevis, proveniente do Laboratório Liu do King's College London. Girinos de Xenopus são transferidos para uma câmara de eletroporação, onde podem ser injetados com ácidos nucleicos e, em seguida, submetidos à eletroporação, que irá entregar vetores de expressão ou morpholinos para o tecido craniofacial em desenvolvimento. A entrega gênica em cartilagem diferenciada é inerentemente problemática, e o laboratório Liu mostra que, por meio da eletroporação, morpholinos podem ser introduzidos nos tecidos procartilaginosos e cartilaginosos do girino de Xenopus ao longo de diversas fases de desenvolvimento. Na seção de Bioengenharia, o grupo Zuckerman do Lawrence Berkeley National Laboratory ilustra seu método para sintetizar peptoides, uma classe de moléculas orgânicas biologicamente ativas que se assemelham a peptídeos, mas têm suas cadeias laterais ligadas ao nitrogênio da ligação peptídica, em vez do carbono alfa, o que os torna resistentes à proteólise. O grupo Zuckerman demonstra a síntese por submonômeros, na qual monômeros peptídicos são adicionados sequencialmente em reações de bromoacetilação e deslocamento de brometo, permitindo controle preciso do comprimento e da composição da cadeia de peptoide. Além disso, o fato de a síntese ser realizada em resina de amida — e, portanto, ser uma síntese em fase sólida — simplifica grandemente a purificação dos peptoides sintetizados. Os autores também mostram como os peptoides recém-sintetizados podem ser induzidos a se autoagruparem em estruturas altamente ordenadas, denominadas nanolâminas, que podem ser visualizadas por microscopia de fluorescência e microscopia eletrônica de varredura. Essas nanolâminas poderiam servir como uma plataforma potencial para miméticos de proteínas e membranas. Mais adiante no mês, o JoVE destaca um ensaio para medir a atividade fagocítica em células expostas a amostras clínicas de anticorpos na seção de Imunologia e Infecção. Colaboradores do Massachusetts General Hospital e do Dartmouth College mostram que células THP-1 englobam microesferas revestidas com antígeno ligado a anticorpos em microscopia de vídeo com lapso de tempo e apresentam um método baseado em placas com citometria de fluxo para quantificar o grau de fagocitose. Os autores utilizam este método para determinar a capacidade de diferentes amostras de anticorpos de induzir fagocitose, como aquelas provenientes de pacientes com HIV tratados e não tratados com terapias antirretrovirais. Este resumo do conteúdo do JoVE em novembro fornece uma breve visão geral dos destaques do mês. Outros artigos notáveis incluem métodos para imagem em tempo real da dinâmica do citoesqueleto em células endoteliais, medição do fluxo de cálcio em cardiomiócitos e eletrofisiologia em fatias de neurônios recém-nascidos no bulbo olfativo.

Em novembro deste ano em JOVE

A edição de novembro do Journal of Visualized Experiments começa com uma série de experimentos comportamentais para medir a capacidade de preensão em primatas. Investigadores da Universidade de Fribourg demonstram quatro tarefas de preensão e alcance, que seguem etapas comuns para a contenção confortável do animal e o posicionamento correto de sua cabeça. O teste Brinkman Board é utilizado para avaliar o alcance de objetos estáticos, enquanto o Rotating Brinkman Board apresenta uma condição na qual os animais precisam antecipar a posição do objeto. O teste Brinkman Box permite que a destreza seja investigada sob condições em que o macaco possui menos graus de liberdade para realizar a tarefa de preensão e não pode utilizar a visão para guiar o movimento. Enquanto os testes de board e box de Brinkman dependem exclusivamente da análise de vídeo obtido durante os experimentos, para a geração de dados, o aparelho da tarefa de alcance de gaveta possui detectores que monitoram as forças de preensão e de carga, bem como a posição da gaveta, tornando este teste apropriado para medir a força, além da capacidade de preensão. Em conjunto, esses quatro testes fornecem uma abordagem poderosa para avaliar o controle motor no membro anterior distal, e o grupo de Fribourg apresenta dados provenientes tanto de estudos de lesão quanto de experimentos destinados a testar terapias potenciais para lesões na medula espinhal.

Em Medicina Clínica e Translacional, colaboradores da Divisão de Pesquisa Cirúrgica do Hospital Universitário de Zurique e do Instituto de Ciência de Animais de Laboratório da Universidade de Zurique trabalham juntos para implantar um dispositivo de radiotelemetria em camundongos, que pode ser utilizado para realizar medições fisiológicas em animais em livre movimentação. Os dispositivos consistem em dois eletrodos, capazes de medir a atividade de biopotencial (ECG, EEG ou EMG), bem como a temperatura, e um transmissor de rádio leve (banda de 1-200 Hz) que pode ser implantado na cavidade abdominal. O estresse do manuseio animal, bem como a anestesia, são elementos de confusão conhecidos que impactam as medições fisiológicas; portanto, os dispositivos de radiotelemetria são uma maneira conveniente de adquirir dados fisiológicos de animais em um estado natural e não perturbado, além de realizar medições de múltiplos animais simultaneamente.

O JoVE também amplia seu conjunto de protocolos de eletroporação com um método para introduzir macromoléculas no mesênquima craniofacial de girinos de Xenopus laevis em desenvolvimento, do Laboratório Liu do King's College London. Girinos de Xenopus são transferidos para uma câmara de eletroporação, onde podem ser injetados com ácido nucleico e, em seguida, submetidos à eletroporação, que entregará vetores de expressão ou morfolinos no tecido craniofacial em desenvolvimento. A entrega de genes em cartilagem diferenciada é inerentemente problemática, e o laboratório Liu demonstra que, por meio da eletroporação, morfolinos podem ser introduzidos em tecidos procartilaginosos e cartilaginosos do girino de Xenopus ao longo de diversas etapas do desenvolvimento.

Em Bioengenharia, o grupo Zuckerman do Lawrence Berkeley National Laboratory ilustra seu método para sintetizar peptoides, uma classe de moléculas orgânicas biologicamente ativas que se assemelham a peptídeos, mas que possuem suas cadeias laterais ligadas ao nitrogênio da ligação peptídica, em vez do carbono alfa, o que os torna resistentes à proteólise. O grupo Zuckerman demonstra a síntese de submonômeros, na qual monômeros peptídicos são adicionados sequencialmente em reações de bromoacetilação e deslocamento de brometo, permitindo que o comprimento e a composição da cadeia do peptoide sejam controlados com precisão. Além disso, o fato de a síntese ser realizada em resina de amida e, portanto, ser uma síntese em fase sólida, simplifica consideravelmente a purificação dos peptoides sintetizados. Esses autores também mostram como os peptoides recém-sintetizados podem ser induzidos a se auto-organizarem em estruturas altamente ordenadas, denominadas nanofolhas, que podem ser visualizadas por fluorescência e microscopia eletrônica de varredura.

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Descubra os destaques da edição de novembro do Journal of Visualized Experiments. Explore avanços em neurociência e biologia com experimentos visualizados que revelam novos comportamentos neuronais e técnicas inovadoras.

Em novembro deste ano em JOVE (Vídeo) | JoVE Journal

Aaron Kolski-Andreaco

Em novembro deste ano em JOVE

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