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DOI: 10.3791/4040-v
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Aqui, nós detalhe uma metodologia para o isolamento rápido de células de ratinho intestinais dendríticas (DC) e macrófagos. Caracterização fenotípica de DCs intestinais e macrófagos é realizada utilizando várias cores análise de fluxo citométrico enquanto enriquecimento grânulo magnético seguido por separação de células é usado para produzir populações altamente puros para estudos funcionais.
O objetivo geral deste procedimento é isolar rapidamente células dendríticas intestinais de camundongos ou dcs e macrófagos para caracterização fenotípica e funcional. Isso é feito pela primeira colheita de tecido intestinal. O segundo passo é dissociar o epitélio intestinal da lâmina própria.
Em seguida, a Lamin Propria intestinal é digerida durante as etapas finais do procedimento. As células da Lamin propria são coradas com fluorescência, anticorpos conjugados e fechadas para populações de células específicas. Em última análise, as populações intestinais de DC e macrófagos podem ser caracterizadas e purificadas com mais precisão para estudos funcionais para avaliar a produção de citocinas, a apresentação de antígenos e a regulação das células imunes.
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