Name: Isolamento de células T CD4 + a partir dos nós linfáticos rato Usando Miltenyi Purificação MACS (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-11-01T00:34:55.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Aprenda o isolamento de células T CD4+ a partir de nódulos linfáticos de ratos usando o kit Miltenyi MACS. Este método de seleção negativa produz células com pureza ≥96% para estudos imunológicos.

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Queremos agradecer Rebecca Paquett para a preparação de tampão MACS.

Por favor, leia e siga o protocolo incluído no kit Miltenyi ou online em <a href="http://www.miltenyibiotec.com/">http://www.miltenyibiotec.com/</a> .

<ol><li>Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+repertoire+scanning+is+promoted+by+dynamic+dendritic+cell+behavior+and+random+T+cell+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 998-1003 (2004).</li>
<li>Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Class+IA+phosphoinositide+3-kinase+modulates+basal+lymphocyte+motility+in+the+lymph+node%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node.</a> J Immunol. 179, 2261-2269 (2007).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a declarar.

Isolamento de células a partir da fonte primária é um passo necessário em muitos protocolos mais complexos. Miltenyi oferece kits para isolar as células de vários organismos, incluindo seres humanos, primatas não-humanos, ratos e, como descrevemos aqui, camundongos. Separação magnética de células baseado em grânulos permite tanto a seleção positiva (ou depleção de células), bem como seleção negativa. Aqui, demonstramos seleção negativa de CD4 ve intocadas ou nd + células T helper. Usando este protocolo padrão que normalmente purificar as cé...

<table><tbody><tr><td>Tampão MACS</td><td>Reagente</td><td>Nenhum</td><td>Nenhum</td><td>Preparar conforme descrito pela Miltenyi.</td></tr><tr><td>Kit de Isolamento de Células T CD4+: Isolamento Não Tocado</td><td>Reagente</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-860</td><td>Para uso com o sistema Miltenyi.</td></tr><tr><td>Solução Salina Tamponada com Fosfato (PBS) Esterilizada</td><td>Reagente</td><td></td><td></td><td>Para uso no preparo do tampão MACS.</td></tr><tr><td>Placa de Cultura de 35 mm da Corning, Não Tratada para Adesão Celular (TC)</td><td>Outro</td><td>Corning</td><td>430588</td><td>Utilizada no preparo de uma suspensão de células únicas.</td></tr><tr><td>Peneira Celular de 70 mícrons</td><td>Ferramenta</td><td>BD Biosciences</td><td>352350</td><td>Utilizada no preparo de uma suspensão de células únicas.</td></tr><tr><td>Seringa de 6 mL</td><td>Ferramenta</td><td>Tyco Healthcare, Covidien</td><td>8881516051</td><td>Utilizada no preparo de uma suspensão de células únicas.</td></tr><tr><td>Solução Salina Tamponada com Fosfato de Dulbecco&amp;rsquo;s 10x (DPBS)</td><td>Reagente</td><td>Invitrogen</td><td>14200-075</td><td>Para uso na lise de hemácias.</td></tr><tr><td>Água Esterilizada</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W4502</td><td>Para uso na lise de hemácias.</td></tr></tbody></table>

isolamento de células t cd4 + a partir dos nós linfáticos rato usando miltenyi purificação macs

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

Isolamento de células a partir da fonte primária é um passo necessário em muitos protocolos mais complexos. Miltenyi oferece kits para isolar as células de vários organismos, incluindo seres humanos, primatas não-humanos, ratos e, como descrevemos aqui, camundongos. Separação magnética de células baseado em grânulos permite tanto a seleção positiva (ou depleção de células), bem como seleção negativa. Aqui, demonstramos seleção negativa de CD4 ve intocadas ou nd + células T helper. Usando este protocolo padrão que normalmente purificar as células que estão ≥ 96% CD4 pura + / CD3 +. Este protocolo é usado em conjunto com a dissecação de protocolo e 2-Photon Imagens de linfonodos periféricos em camundongos publicado na edição de 7 de Jove, para purificação de células T e outros tipos de células para adotivamente transferência para fins de imagem. Embora nós não demonstramos análise FACS neste vídeo de protocolo, é altamente recomendável para verificar a pureza total de células isoladas usando os anticorpos adequados via FACS. Além disso, demonstramos o método não-estéril de isolamento de células T. Se as células estéreis são necessários para o seu aplicativo do usuário final particular, não se esqueça de fazer todos os procedimentos demonstrado na capa de cultura de tecidos sob condições padrão estéril. Obrigado por assistir e boa sorte com suas próprias experiências!

Isolamento de linfócitos usando a Miltenyi MACs kit é uma maneira confiável para purificar as células de todo homogeneizados de tecido linfóide. Células purificadas usando o sistema Miltenyi são tipicamente ≥ 96% pura. Aqui, nós demonstrar as medidas tomadas para isolar células CD4 + T, um dos muitos kits oferecidos pela Miltenyi.

Isolamento de células T CD4 + a partir dos nós linfáticos rato Usando Miltenyi Purificação MACS

O isolamento de células da fonte primária é uma etapa necessária em muitos protocolos mais complexos. A Miltenyi oferece kits para isolar células de diversos...

Este é um ímã Max MIDI. Diz: cuidado, campos magnéticos extremamente fortes. Olá, sou Melanie Matthew do laboratório de Mike Collins, do Departamento de Fisiologia e Biofísica da Universidade da Califórnia, Irvine.Hoje vamos mostrar a vocês um procedimento de seleção negativa de células T CD4 positivas utilizando os kits da Milton Biotechnology. Aqui temos o Minimax e os ímãs Minimax, sendo que o Minimax é usado para separações maiores. É possível processar até 10⁹ células em uma coluna que se encaixa no Minimax, enquanto os Minimax são usados para volumes muito menores de células.Assim, dependendo de você estar realizando uma separação positiva ou negativa, você marcará suas células com o anticorpo apropriado. Eles possuem um grânulo magnético que se ligará ao ímã. No caso de uma seleção negativa, as células nas quais você está interessado passarão através da coluna e você poderá coletar o efluente, que conterá suas células de interesse.Devo mencionar que as técnicas que estou mostrando a vocês esta noite não são estéreis. Portanto, se desejar usar essas células para cultura celular, você deverá realizar todos os procedimentos na câmara de cultura tecidual com instrumentos estérei

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

A preparação altamente purificada de células dendríticas pulmonares do rato é descrito. Ênfase específica é dada para o isolamento de um subconjunto de células dendríticas convencionais.

Isolamento de células dendríticas pulmonares do rato

Este vídeo descreve o enriquecimento de células T do baço de um camundongo por seleção negativa usando um separador magnético. A técnica envolve direcionar as outras células da amostra para depleção usando anticorpos ou ligantes direcionados contra antígenos específicos da superfície celular.

Enriquecimento de células T: uma técnica para isolar células T da população de células mistas por separação magnética

Este vídeo demonstra um protocolo para o isolamento baseado em marcação magnética de uma população de baixa concentração de células T CD4+Vδ1+γδ de células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs). Usando uma combinação de anticorpos anti-Vδ1 conjugados com FITC, microesferas magnéticas anti-FITC e esferas superparamagnéticas revestidas com anticorpos anti-CD4, as células T CD4 + Vδ1 + podem ser purificadas com sucesso da população PBMC.

Isolamento seletivo de células T CD4+ Vδ1+ γδ de células mononucleares do sangue periférico humano

Com funções efectoras distintas das outras subpopulações de células T, células Th17 foram centralmente implicada na autoimunidade inflamatória. Este protocolo in vitro de diferenciação Th17 proporciona um meio para determinar se os linfócitos T CD4 + naive podem diferenciar-se em células Th17, e para examinar ainda mais o seu papel no auto-imunidade e resposta do hospedeiro.

Isolamento e Th17 Diferenciação de Linfócitos T CD4 Naïve

Este protocolo detalha um método para isolar células apresentadoras de antigénio a partir de timo humano por meio de diferentes passos de digestão enzimática do tecido seguida por centrifugação de densidade da suspensão de células individuais e finalmente separação magnética e / ou FACS das populações de células de interesse.

O isolamento de células dendríticas mielóides e células epiteliais de timo humano

As células T CD4+ virgens polarizam para vários subconjuntos, dependendo do ambiente no momento da ativação.  A diferenciação de células T CD4+ virgens em vários subconjuntos efetores pode ser alcançada in vitro através da adição de estímulos de receptores de células T e sinais específicos de citocinas.

Rato Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; Isolamento de células T e<em&gt; In vitro</em&gt; Diferenciação em subpopulações de células T

Subconjuntos distintos de células dendríticas existem como populações raras em órgãos linfóides e, portanto, são difíceis de isolar em número e pureza suficientes para experimentos imunológicos. Aqui descrevemos um método de alta eficiência e alto rendimento para isolamento de todos os principais subconjuntos atualmente conhecidos de células dendríticas esplênicas de camundongos.

Um método de rendimento eficiente e alta para o isolamento de subpopulações de células dendríticas Rato

Aqui descrevemos um protocolo detalhado para o isolamento de linfócitos de sites indutivos incluindo o tecido linfoide associado intestino de Peyer e os drenagem linfonodos mesentéricos e os sites de efetor incluindo a propria do lamina e o epitélio intestinal do sistema imunitário intestinal pequeno.

Isolando os linfócitos de rato pequeno Intestinal sistema imunológico

Aqui, apresentamos um protocolo para isolar as células dendríticas de murino baços célula magnética classificando e subsequente transferência adotiva em ratos ingênuos. O modelo de células dendríticas ativadas de elevado-sal foi escolhido para explicar os procedimentos passo a passo de transferência adotiva e citometria de fluxo.

Isolamento e transferência adotiva de sal alta trataram apresentadoras de células dendríticas

Dois fótons de imagem revelou motilidade linfócitos e interações celulares dentro do nó de linfa em condições basais e durante uma resposta imune 1. Aqui, demonstramos transferência adotiva de células T, o isolamento dos gânglios linfáticos, e motilidade de imagens de células CD4 + T no linfonodo explantado.

Dissecção e 2-Photon Imagens de linfonodos periféricos em ratos

Aprenda o isolamento de células T CD4+ a partir de nódulos linfáticos de ratos usando o kit Miltenyi MACS. Este método de seleção negativa produz células com pureza ≥96% para estudos imunológicos.

Isolamento de células T CD4 + a partir dos nós linfáticos rato Usando Miltenyi Purificação MACS

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