Name: Rastreamento de viral geneticamente definido Neural dos circuitos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-10-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 6 s
Description: Aprenda a rastrear circuitos neurais sinapticamente conectados no sistema nervoso central usando vírus trans-sináptico e receptor TVA. Este método de alta vazão permite analisar microcircuitos neuronais com eficiência superior à eletrofisiologia tradicional.

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Nós gostaríamos de agradecer Sean Whelan para assistência com resgate variantes VSV recombinantes, e Didem Goz e Ryan Chrenek para assistência técnica. Este trabalho foi financiado por HHMI (CLC), e # NS068012-01 (KTB).

<ol><li>Wickersham, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+restriction+of+transsynaptic+tracing+from+single%2C+genetically+targeted+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic restriction of transsynaptic tracing from single, genetically targeted neurons.</a> Neuron. 53, 639-647 (2007).</li>
<li>Marshel, J. H., Mori, T., Nielsen, K. J., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+single+neuronal+networks+for+gene+expression+and+cell+labeling+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Targeting single neuronal networks for gene expression and cell labeling in vivo.</a> Neuron. 67, 562-574 (2010).</li>
<li>Wall, N. R., Wickersham, I. R., Cetin, A., De La Parra, M., Callaway, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+circuit+tracing+in+vivo+through+Cre-dependent+targeting+and+complementation+of+modified+rabies+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic circuit tracing in vivo through Cre-dependent targeting and complementation of modified rabies virus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 21848-21853 (2010).</li>
<li>Wickersham, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+restriction+of+transsynaptic+tracing+from+single%2C+genetically+targeted+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic restriction of transsynaptic tracing from single, genetically targeted neurons.</a> Neuron. 53, 639-647 (2007).</li>
<li>Yonehara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+asymmetric+reorganization+of+inhibition+establishes+a+motion-sensitive+circuit%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Spatially asymmetric reorganization of inhibition establishes a motion-sensitive circuit.</a> Nature. 469, 407-410 (2011).</li>
<li>Stepien, A. E., Tripodi, M., Arber, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monosynaptic+rabies+virus+reveals+premotor+network+organization+and+synaptic+specificity+of+cholinergic+partition+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Monosynaptic rabies virus reveals premotor network organization and synaptic specificity of cholinergic partition cells.</a> Neuron. 68, 456-472 (2010).</li>
<li>Beier, K. T., Samson, M. E. S., Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conditional+expression+of+the+TVA+receptor+allows+clonal+analysis+of+descendents+from+Cre-expressing+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Conditional expression of the TVA receptor allows clonal analysis of descendents from Cre-expressing progenitor cells.</a> Dev. Biol. 353, 309-320 (2011).</li>
<li>Seidler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Cre-loxP-based+mouse+model+for+conditional+somatic+gene+expression+and+knockdown+in+vivo+by+using+avian+retroviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">A Cre-loxP-based mouse model for conditional somatic gene expression and knockdown in vivo by using avian retroviral vectors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 10137-10142 (2008).</li>
<li>Beier, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anterograde+or+retrograde+transsynaptic+labeling+of+CNS+neurons+with+vesicular+stomatitis+virus+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Anterograde or retrograde transsynaptic labeling of CNS neurons with vesicular stomatitis virus vectors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15414-15419 (2011).</li>
<li>Whelan, S. P., Ball, L. A., Barr, J. N., Wertz, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+recovery+of+infectious+vesicular+stomatitis+virus+entirely+from+cDNA+clones%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Efficient recovery of infectious vesicular stomatitis virus entirely from cDNA clones.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 8388-8392 (1995).</li>
<li>Fuerst, T. R., Niles, E. G., Studier, F. W., Moss, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eukaryotic+Transient-Expression+System+Based+on+Recombinant+Vaccinia+Virus+That+Synthesizes+Bacteriophage+T7+RNA+Polymerase%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Eukaryotic Transient-Expression System Based on Recombinant Vaccinia Virus That Synthesizes Bacteriophage T7 RNA Polymerase.</a> PNAS. 83, 8122-8126 (1986).</li>
<li>Young, J. A., Bates, P., Varmus, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+chicken+gene+that+confers+susceptibility+to+infection+by+subgroup+A+avian+leukosis+and+sarcoma+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Isolation of a chicken gene that confers susceptibility to infection by subgroup A avian leukosis and sarcoma viruses.</a> J. Virol. 67, 1811-1816 (1993).</li>
<li>Madisen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+robust+and+high-throughput+Cre+reporting+and+characterization+system+for+the+whole+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A robust and high-throughput Cre reporting and characterization system for the whole mouse brain.</a> Nat Neurosci. 13, 133-140 (2010).</li>
<li>Franklin, K., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+K+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press. San Diego, CA. (1997).</li>
<li>van den Pol, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+strategies+for+studying+the+brain%2C+including+a+replication-restricted+self-amplifying+delta-G+vesicular+stomatis+virus+that+rapidly+expresses+transgenes+in+brain+and+can+generate+a+multicolor+golgi-like+expression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Viral strategies for studying the brain, including a replication-restricted self-amplifying delta-G vesicular stomatis virus that rapidly expresses transgenes in brain and can generate a multicolor golgi-like expression.</a> J. Comp. Neurol. 516, 456-481 (2009).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O uso de vírus para estudar circuitos neurais são um método de rendimento relativamente elevado de análise de neurónios ligados. No entanto, tanto a geração de viriões de VSV e RABV não é trivial. Embora o protocolo descrito acima, para resgatar o vírus a partir de ADNc é fornecido, é ainda um evento de baixa probabilidade. Os níveis de cada um dos N, P, e L plasmídeos necessitam de ser ajustado com precisão, e muitas tentativas e replica precisa de ser feito para assegurar resgate viral. A formação da partícula incorpo...

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;forte&gt;Cultura de Tecidos&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Células de rim de hamster bebê (BSRT7)</td><td>disponível mediante solicitação</td><td></td><td></td></tr><tr><td>vaccínia (vTF7-3)</td><td>disponível mediante solicitação</td><td></td><td></td></tr><tr><td>plasmídeos pN, pP, pl</td><td>disponível mediante solicitação</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de Cálcio</td><td>Sigma</td><td>C1016</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de Magnésio</td><td>Sigma</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>células HEK 293T</td><td>Open Biosystems</td><td>HCL4517</td><td></td></tr><tr><td>Prato de cultura tratado para TC de 60 mm</td><td>Corning</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>75 cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt; Frasco de Cultura Celular com Pescoço Inclinado Retangular e Tampa Ventilada</td><td>Corning</td><td>430641</td><td></td></tr><tr><td>Meio: DMEM (Meio Essencial Mínimo Modificado de Dulbecco)</td><td>Invitrogen</td><td>12491-015</td><td></td></tr><tr><td>1 M HEPES pH 7,4</td><td>Gibo</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>SFB: Soro bovino fetal</td><td>Gibco</td><td>10437-028</td><td></td></tr><tr><td>PKS</td><td>Invitrogen</td><td>15140-163</td><td></td></tr><tr><td>Reagente de Transfecção Lipofectamine 2000</td><td>Invitrogen</td><td>11668-019</td><td></td></tr><tr><td>Seringa: seringa Luer-Lock de 5 ml</td><td>Sigma</td><td>Z248010-1PAK</td><td></td></tr><tr><td>Filtros de seringa</td><td>Nalgene</td><td>190-2520</td><td></td></tr><tr><td>PEI: PEI linear de alta potência</td><td>Polysciences</td><td>23966</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;forte&gt;Centrifugação Viral&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Sistema de Filtragem a Vácuo com Tubo Corning de 150 ml, 0,45 &amp;mu;m Poros</td><td>Corning</td><td>430314</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de ultracentrífuga Thinwall, Ultra-Claro, 38,5 ml, 25 x 89 mm</td><td>Beckman-Coulter</td><td>344058</td><td></td></tr><tr><td>Ultracentrífuga</td><td>Beckman-Coulter</td><td>optima XL-80K</td><td></td></tr><tr><td>Rotor de ultracentrífuga SW28</td><td>Beckman-Coulter</td><td>342207</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;forte&gt;Injeção em Camundongo&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Micropipetas capilares</td><td>Drummond</td><td>5-000-2005</td><td></td></tr><tr><td>Estereotaxia</td><td>Narishige</td><td>SR-5M</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulador</td><td>Narishige</td><td>SM-15</td><td></td></tr><tr><td>Ump injector</td><td>World Precision Instruments</td><td>Sys-Micro4</td><td></td></tr><tr><td>Microcontrolador de quatro canais</td><td>World Precision Instruments</td><td>UMP3</td><td></td></tr><tr><td>M.TXB Motor de Bancada com Controle Digital C.EMX-1, 115 Volts</td><td>Foredom</td><td>M.TXB-EM</td><td></td></tr><tr><td>H.10 Peça de mão, Troca Rápida</td><td>Foredom</td><td>H.10</td><td></td></tr><tr><td>Broca de passo, 0,5 mm</td><td>Foredom</td><td>A-58005P</td><td></td></tr><tr><td>Micr&amp;#8211;suporte para eletrodo</td><td>World Precision Instruments</td><td>MEH2S</td><td></td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Henry Schein</td><td>995-2949</td><td></td></tr><tr><td>Xilazina</td><td>Henry Schein</td><td>4015809TV</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Henry Schein</td><td>1118217</td><td></td></tr><tr><td>seringa de 1 ml</td><td>Becton-Dickinson</td><td>309628</td><td></td></tr><tr><td>agulha de injeção 30 gauge</td><td>Becton-Dickinson</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Pomada Oftálmica Protetora</td><td>Doutores Foster e Smith</td><td>9N-014748</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Sigma</td><td>493511</td><td></td></tr><tr><td>Iodo</td><td>Sigma</td><td>PVP1</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;forte&gt;Instrumentos cirúrgicos e de dissecação&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Tesoura</td><td>Fine Science Tools</td><td>91402-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Padrão</td><td>Fine Science Tools</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Fina</td><td>Fine Science Tools</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de Vannas</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-00</td><td></td></tr><tr><td>Manga de bisturi</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de bisturi</td><td>Fine Science Tools</td><td>10015-00</td><td></td></tr><tr><td>Pontos</td><td>Robbins Instruments</td><td>20.SK640</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;forte&gt;Dissecção e coloração com anticorpos&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>paraformaldeído</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Solução Salina Tamponada com Fosfato</td><td>Sigma</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T9284</td><td></td></tr><tr><td>Soro de jumento</td><td>Jackson Imunoresearch</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;forte&gt;Anticorpos&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Anticorpos</td><td>Millipore</td><td>AB144P</td><td></td></tr><tr><td>Anti-gfp</td><td>Abcam</td><td>ab13970</td><td></td></tr><tr><td>Anti-frango de jumento Dylight 488</td><td>Jackson Imunoresearch</td><td>703-545-155</td><td></td></tr><tr><td>Donkey anti-chicken Alexa Fluor 647</td><td>Jackson Imunoresearch</td><td>705-605-147</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;forte&gt;Montagem do tecido&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>Lâminas de microscópio Superfrost plus</td><td>Fisher</td><td>12-550-100</td><td></td></tr><tr><td>Cobertura de vidro 22 x 22, espessura 0</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72198-10</td><td></td></tr><tr><td>Elastômero de silicone</td><td>Rogers Corp</td><td>HT-6220</td><td></td></tr><tr><td>Esmalte incolor para unhas</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>Reagente antidesvanecimento Prolong Gold</td><td>Invitrogen</td><td>P36930</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;jove_conteúdo&quot;&gt; &lt;/p&gt;</td></tr></tbody></table>

rastreamento de viral geneticamente definido neural dos circuitos

Viral Tracing of Genetically Defined Neural Circuitry

Os métodos clássicos para o estudo de circuitos neuronais são o rendimento relativamente baixo. Vírus da pseudo-raiva transsináptica, particularmente o (PRV) e do vírus da raiva (RABV), e, mais recentemente, o vírus da estomatite vesicular (VSV), para o estudo de circuitos, está a tornar-se cada vez mais popular. Estes métodos maior rendimento use vírus que transmitem entre os neurônios em qualquer direção do anterógrada ou retrógrada. Recentemente, um RABV modificados para monossináptico rastreio retrógrado foi desenvolvido. (Figura 1A). Neste método, o gene da glicoproteína (G) é eliminado a partir do genoma viral, e reabastecido apenas em neurónios-alvo. Especificidade infecção é conseguida por substituição de um G quimérica, composta pelo domínio extracelular do ASLV-A glicoproteína e o domínio citoplasmático da RABV-G (A RG /), para o normal RABV-G 1. Este G quimérico especificamente infecta as células que expressam o receptor TVA 1. O gene que codifica a TVA pode sido delivered por vários métodos 2-8. Seguindo RABV-G infecção de um neurónio TVA-expressar, o RABV pode transmitir a outros neurónios ligados sinapticamente em sentido retrógrado, por natureza, do seu próprio G, que foi co-fornecido com o receptor TVA. Esta técnica rotula um número relativamente grande de entradas (5-10%) 2 para um tipo de célula definidos, proporcionando uma amostra de todas as entradas para um tipo definido de arranque da célula. Recentemente modifiquei esta técnica de usar VSV como traçador transsináptica 9. VSV tem várias vantagens, incluindo a rapidez da expressão do gene. Aqui nós detalhes de um sistema viral novo rastreamento usando VSV útil para sondar microcircuitos com maior resolução. Embora as estratégias originais publicados por Wickersham et al. 4 e Beier et al. 9 rotulagem autorização de neurónios que qualquer projecto para inicialmente infectadas TVA-expressando células, aqui VSV foi concebido para transmitir apenas a TVAs células que expressam A-(Figura 1B). O vírus é primeiro pseudotipado com RABV-G para permitir a infecção de neurónios jusante da TVA-expressam os neurónios. Depois de infectar esta primeira população de células, o vírus libertado só pode infectar células que expressam TVA. Porque a propagação viral transsináptica está limitada a células que expressam TVA, presença ou ausência de ligação a partir de tipos de células definidas pode ser explorada com alta resolução. Um diagrama de fluxo experimental destas experiências é mostrado na Figura 2. Aqui nós mostramos um circuito modelo, o da direção-seletividade na retina do rato. Examinamos a conectividade das células amácrinas starburst (SACs) para as células ganglionares da retina (CGR).

Um método de rastreio neurónios ligados sinapticamente é descrito. Usamos TVA especificidade de uma célula de montante para investigar se uma população de células de interesse recebe entrada sináptica de tipos de células geneticamente definidos.

Rastreamento de viral geneticamente definido Neural dos circuitos

Os métodos clássicos para o estudo de circuitos neuronais possuem, em geral, baixa produtividade. Vírus transsinápticos, particularmente o vírus da pseudoraiva (PRV) e o vírus da raiva...

O objetivo geral do experimento a seguir é desenvolver uma nova técnica para analisar a microcircuitaria do sistema nervoso central. Isso é alcançado primeiramente definindo uma população de neurônios para infecção mediante a expressão do receptor TVA. Como segundo passo, o vírus trans-sináptico é injetado no SNC, o que infecta os neurônios primários de escolha.Em seguida, o vírus se espalhará apenas trans-sinapticamente para os neurônios conectados que expressam o receptor TVA. Para examinar se esses neurônios estão conectados, obtêm-se resultados que demonstram que esta técnica pode ser utilizada para analisar a microcircuitaria com base na validação da marcação de microcircuitos conhecidos. A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes, como eletrofisiologia e microscopia, é que ela constitui um método de alto rendimento para análise da circuitaria neuronal.Tivemos pela primeira vez a ideia deste método ao ler o primeiro estudo sobre o rastreamento viral restrito mono sinapticamente por Wickersham e colegas. Achamos que os vírus poderiam ser ainda mais modificados para estudar neurônios conectados de maneiras inovadoras. Consulte o protocolo escrito para o

viral-tracing-of-genetically-defined-neural-circuitry

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Nós fornecemos um guia prático para entregar...

Revelando Topografia Circuito Neural em Multi-Color

O rastreamento transsináptico tornou-se uma ferramenta poderosa para analisar eferentes centrais que regulam alvos periféricos por meio de circuitos multi-sinápticos. Aqui apresentamos um protocolo que explora o vírus da pseudo-raiva transsináptica para identificar e localizar um circuito cerebral funcional, seguido por técnicas clássicas de rastreamento de trato para validar conexões específicas no circuito entre grupos de neurônios identificados.

Transsináptica Rastreamento de Alvos periféricos com vírus da pseudo-Seguido por cólera toxina e Biotinilado Dextran aminas Duplo Labeling

Capitalizando uma estratégia genética binária, fornecemos um protocolo detalhado para rastreamento de circuitos neurais em camundongos que expressam traçadores transsinápticos complementares após a recombinação mediada por Cre. Como a produção de traçadores específicos da célula é codificada geneticamente, nossa abordagem experimental é adequada para estudar a formação e maturação de circuitos neurais durante o desenvolvimento do cérebro embrionário murino em uma única resolução celular.

Condicional Genetic transsináptica Tracing no Embryonic do cérebro do rato

Aqui descrevemos um procedimento baseado no uso de partículas lentivirais para a modificação genética de longo prazo de células-tronco neurais e/ou suas células ependimárias adjacentes no nicho neurogênico ventricular-subventricular adulto que permite a análise separada de efeitos celulares autônomos e não autônomos, dependentes de nicho em células-tronco neurais.

Estável e eficiente modificação genética de células do rato adulto V-SVZ para a Análise da Neural Stem Cell Autónoma e Efeitos não autónomos

Nós descrevemos uma técnica para identificar neurônios e seus processos via anterógrada ou retrógrada tracer injeções em núcleos cerebrais usando uma preparação in vitro. Nós modificamos um método existente de i n vitro tracer eletroporação, aproveitando fluorescente etiquetado ratos mutantes e equipamentos ópticos de base, a fim de aumentar a precisão de rotulagem.

Neuronal Tracing em explantes cérebro guiadas a laser

Este protocolo descreve reconstruções em larga escala de populações neuronais selectivos, marcados após a infecção retrógrada com um vírus da raiva modificado expressando marcadores fluorescentes, e análises independentes cluster, imparcial que permitem a caracterização abrangente de métricas morfológicas entre subclasses neuronais distintas.

Reconstruções em larga escala e, Clustering imparcial independente baseado no morfológicas Métricas para classificar Neurônios no seletivos Populações

Com base na engenharia lentivirais in vitro de precursores neuronais, seu cotransplante em cérebros de tipo selvagem e avaliação morfométrica pareada de derivados de "teste" e "controle", este método permite a modelagem precisa do controle genético in vivo de neokortikalny morfologia do neurônio de forma simples e acessível.

Transplante intraventricular de precursores neuronais projetados para estudos de Neuroarquitetura in vivo

Este protocolo tem como objetivo gerar interneurônios diretamente reprogramados in vivo, usando um sistema viral baseado em AAV no cérebro e um repórter GFP orientado por synapsin FLEX, que permite a identificação celular e análise mais aprofundada in vivo.

In vivo reprogramação direta de células gliais residentes em interneurônios por injeção intracerebral de vetores virais

O protocolo atual demonstra um método simples para traçar projeções de glutamato da área tegmental ventral (VTA) para o hipocampo. A fotostimulação dos neurônios de glutamato VTA foi combinada com a gravação de CA1 para demonstrar como terminais de glutamato VTA modulam a taxa de disparo piramipário putativo ca1 in vivo.

Rastreamento Anatômico e Funcional In Vivo dos Terminais de Glutamato da Área Tegmental Ventral no Hipocampo

Aqui apresentamos um protocolo descrevendo a transdução viral de regiões cerebrais discretas com construtos optogenéticos para permitir a caracterização eletrofisiológica específica da sinapse em cortes cerebrais agudos de roedores.

Ex Vivo Interrogação Optogenética da Transmissão Sináptica de Longo Alcance e Plasticidade do Córtex Pré-frontal Medial para o Córtex Entorrinal Lateral

Durante o desenvolvimento do córtex cerebral, os neurônios e as células gliais se originam na zona ventricular que reveste o ventrículo e migram em direção à superfície do cérebro. Muitos genes estão envolvidos neste processo. Este protocolo apresenta a técnica para a imagem de lapso de tempo de neurônios migratórios e progenitores gliais.

Imagem de lapso de tempo de neurônios migratórios e progenitores gliais em fatias de cérebro de camundongo embrionário

Aprenda a rastrear circuitos neurais sinapticamente conectados no sistema nervoso central usando vírus trans-sináptico e receptor TVA. Este método de alta vazão permite analisar microcircuitos neuronais com eficiência superior à eletrofisiologia tradicional.

Rastreamento de viral geneticamente definido Neural dos circuitos

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