Name: Uso de Microscopia Time Lapse para Visualize Anoxia induzida Suspended Animation em C. elegans Embriões (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Aprenda a imaginar dinâmicas subcelulares em embriões de C. elegans expostos à anoxia usando microscopia confocal de disco giratório. Este método permite visualizar em tempo real a resposta celular à privação de oxigênio.

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Nós gostaríamos de expressar o nosso apreço pela entrada e comentários dos membros do Laboratório de Padilla. Cepas de nematóides neste trabalho foram fornecidos pelo Centro de Genética Caenorhabditis, que é financiado pelo NIH National Center for Research Resources (NCRR). Nós reconhecer e agradecer o Dr. Lon Turnbull de assistência técnica com a microscopia confocal. Este trabalho foi financiado por uma bolsa da National Science Foundation (NSF-IOS, carreira) para PAP

1. Preparação da Amostra <ol><li> Produzir ou obter apropriado transgênico C. elegans estirpe de interesse, utilizando metodologias de transgênicos ou de Caenorhabditis Genética da Center (CGC) ou colega. Neste caso estamos usando tensão TH32 (torta-1 :: TBG-1 :: GFP; torta-1 :: GFP :: H2B) 5 para visualizar cromossomos e centrossomas como marcadores para a divisão celular. </li><li> Gerar uma população sincronizada usando um dos três métodos: 1) se desintegrar adultos grávidas em solução de hipoclorito e usar embriões restantes 6, 2) escolher adultos grávidas em uma placa sem sementes e deixá-los colocar embriões para 1-2 horas, ou 3) escolher L4 larvas de uma população mista e mudança para um novo prato semeado. </li><li> Nematóides crescer a 20 ° C a gravid idade adulta jovem, que terá cerca de 96 horas de incubação, 72 horas a partir de larvas L1 ou 24 horas pós muda L4. Embriões (2-20 células) no útero conter blastômeros grandes e núcleos que são ideais para imagalterações profundas sub-celular e sub-nuclear, respectivamente. Esta metodologia proporciona um meio para gerar uma população de adultos jovens que contêm um número abundante de embriões precoces. </li></ol> 2. Preparação de slides e anoxia Câmara Configurar <ol><li> Fazer uma câmara húmida para segurar lâminas preparadas pela colocação de uma toalha de papel húmido no interior de uma caixa de Petri grande ou bin coberto com uma tampa de tamanho suficiente. </li><li> Prepare fundido agarose a 2% em H2O desionizada aquecendo mistura em recipientes de vidro por meio de banho de ondas ou água. </li><li> Coloque gotas 1-3 de agarose quente sobre uma lâmina de vidro limpa microscópio. Colocar imediatamente uma segunda lâmina invertida perpendicularmente por cima da gota de agarose (s), pressione ligeiramente de modo que a almofada resultante será fina e livre de bolhas de ar. </li><li> Dê tempo para esfriar e, lentamente, desmontar as duas lâminas de microscópio, deixando o bloco de agarose intacto em um dos slides. É importante assegurar a almofada de agarose é suficientemente fino para não interferindore com a capacidade de focar o microscópio depois. Capacidade de visualizar de amostra é também dependente da distância óptica específica do objectivo de utilização, que pode variar entre os microscópios. </li><li> Use uma lâmina de barbear limpa para moldar almofada de agarose em um pequeno quadrado. Armazenar na câmara preparado úmido até que esteja pronto para uso. </li><li> Com cuidado, utilizando a mesma lâmina limpa, tomar a borda do bloco de agarose e transferi-lo a partir da corrediça para uma lamela 25 mm de diâmetro, micro, evitando a acumulação de bolhas de ar por baixo da almofada. A lamela rodada selecionado para usar apropriadamente se encaixa no microincubator. </li><li> Adicionar uma gota de anestésico (0,5% tricaina, tetramisole 0,05% em tampão M9) sobre a almofada de agarose para o uso como um anestésico. Escolha vermes 5-10 e coloque na gota de anestésico. Permitir 1-3 min para vermes para cessar o movimento. </li><li> O racional para a observação de embriões no útero de adultos, em vez de embriões dissecados, é o de minimizar o potencial de embrião desiccação e de movimento, devido ao fluxo de gás de azoto através do embrião. </li><li> Imediatamente adicionar uma gota de óleo halocarbono em cima dos vermes para prevenir os vermes de desidratação como o gás flui através da câmara. Uma vez que o óleo é viscoso halocarbono pode-se usar uma ponta de pipeta ou ponta de um verme escolher para recolher o óleo e cair sobre os vermes. </li><li> Uma vez que a lamela circular contendo as minhocas está pronta, as duas metades do Leiden fechado perfusão microincubator são separadas, e a lamela é então cuidadosamente colocada de pé sobre o anel inferior. Os dois lados da câmara são então fechada hermeticamente em conjunto. </li><li> A câmara é então ligada ao tanque de gás de azoto através do tubo de plástico flexível e colocado no local adequado na platina do microscópio (Figura 1C). Neste momento, o tubo e microincubator devem ser cuidadosamente verificados para identificar qualquer fuga ao assegurar uma fixação segura do tubo e dos tampões de porta ao longo do lado da câmara. Pode-se altão levemente espalhar uma pequena quantidade de água de sabão ao longo do tubo de olhar para as bolhas, as quais irão formar um vazamento, se estiver presente. </li></ol> 3. Microscopia em Anoxia <ol><li> Localize animais com menor ampliação, então, mudar-se para a ampliação adequada superior (64x para esta aplicação) para o tecido de imagem ou células de interesse, como blastômeros embrionárias ou ovócitos em adultos. Ligar o laser de 488 nm para visualizar o sinal GFP e localizar a proteína GFP na célula (s) de interesse. </li><li> Para visualizar a prisão na fase específica de parada do ciclo celular (por exemplo, prófase tarde) identificar um blastômero em um estágio antes da divisão celular (interfase tardio, ou prófase). Marcadores celulares, tais como a posição de centríolos, a iniciação da condensação cromossômica, localização cromossoma ea presença ou ausência do envelope nuclear permitirá identificar estágio do ciclo celular (Figura 2A). </li><li> A câmara é, então, submetido a perfusão com gás azoto (99,999%N 2; &lt;2 ppm de O 2). Neste caso, usamos uma pressão de 6 psi, mas a pressão pode necessitar de ser ajustado e optimizado em função do tamanho de cada microincubator e diâmetro do tubo a ser utilizado. Continuar a monitorizar o blastômero (s) como o azoto enche a câmara, ajustando o plano focal conforme necessário. </li><li> Neste ponto, o lapso de tempo de imagem tiver começado. Formação de imagens é realizada durante o tempo necessário para capturar fenómeno de interesse, neste caso prisão prófase e acoplagem de cromossomas para a membrana nuclear interna. Imagens são tomadas uma vez a cada 10 segundos por não mais do que 30 minutos. Freqüências de captura de imagem e definições, como ganho e potência do laser deve ser ajustada conforme necessário. </li><li> O tempo em que os embriões respondem ao ambiente anóxico pode variar dependendo da fase do ciclo celular após exposição anoxia. Tipicamente anóxia induzida prisão prófase ocorre dentro de 20-30 min a partir do fluxo de gás de azoto. Temos observado anóxia induzida por células ocu parada do ciclorring em &lt;20 min. As imagens podem ser obtidas durante este período de tempo, ou imagens específicas pode ser isolado depois de uma série de lapso de tempo. Uma opção adicional é a utilização de microscopia de vídeo para visualização de estruturas sub-celulares em embriões. </li><li> Para documentar a recuperação do estado de anóxia induzida preso, o gás está desligado ea câmara é permitida para retornar à normóxia por difusão durante a gravação de uma série de lapso de tempo. Reinício da progressão do ciclo celular e desencaixe de cromossomos normalmente ocorre dentro de 5-20 minutos de transformar o gás nitrogênio fora. </li><li> Note-se que em experiências separadas indicador anoxia, resazurina, foi colocado na microcâmara flow-through, determinou-se que a câmara anóxica torna-se, em média, de cerca de 19 min após o fluxo de gás azoto foi iniciada. </li><li> Imagens e vídeos são processadas utilizando Imaris, Imagem J ou Photoshop e importados para o QuickTime para exibição. </li></ol>

<ol><li>Powell-Coffman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+signaling+and+resistance+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Hypoxia signaling and resistance in C. elegans.</a> Trends Endocrinol. Metab. 21 (10), 435-440 (2010).</li>
<li>Padilla, P. A., Ladage, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suspended+animation%2C+diapause+and+quiescence%3A+Arresting+the+cell+cycle+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Suspended animation, diapause and quiescence: Arresting the cell cycle in C. elegans.</a> Cell Cycle. 11, (2012).</li>
<li>Hu, P. J. Dauer. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHu%2C+PJ+%22WormBook%22">WormBook</a>. , 1-19 (2007).</li>
<li>Zhou, K. I., Pincus, Z., Slack, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longevity+and+stress+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">Longevity and stress in Caenorhabditis elegans.</a> Aging (Albany NY). 3, 733-753 (2011).</li>
<li>Schmidt, D. J., Rose, D. J., Saxton, W. M., Strome, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+analysis+of+cytoplasmic+dynein+heavy+chain+in+Caenorhabditis+elegans+with+fast-acting+temperature-sensitive+mutations%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Functional analysis of cytoplasmic dynein heavy chain in Caenorhabditis elegans with fast-acting temperature-sensitive mutations.</a> Mol. Biol. Cell. 16, 1200-1212 (2005).</li>
<li>Sulston, J., Hodgkin, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSulston%2C+J+%22The+Nematode+Caenorhabditis+elegans%22">The Nematode Caenorhabditis elegans</a>. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. 587-606 (1988).</li>
<li>Padilla, P. A., Nystul, T. G., Zager, R. A., Johnson, A. C., Roth, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dephosphorylation+of+Cell+Cycle-regulated+Proteins+Correlates+with+Anoxia-induced+Suspended+Animation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Dephosphorylation of Cell Cycle-regulated Proteins Correlates with Anoxia-induced Suspended Animation in Caenorhabditis elegans.</a> Mol. Biol Cell. 13, 1473-1483 (2002).</li>
<li>Hajeri, V. A., Trejo, J., Padilla, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+sub-nuclear+changes+in+Caenorhabditis+elegans+embryos+exposed+to+brief%2C+intermediate+and+long-term+anoxia+to+analyze+anoxia-induced+cell+cycle+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Characterization of sub-nuclear changes in Caenorhabditis elegans embryos exposed to brief, intermediate and long-term anoxia to analyze anoxia-induced cell cycle arrest.</a> BMC Cell Biol. 6, 1471-2121 (2005).</li>
<li>Padilla, P. A., Goy, J. M., Hajeri, <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPadilla%2C+PA+%22Anoxia%22">Anoxia</a>. Padilla, P. A. , InTech. (2012).</li>
<li>Hajeri, V. A., Little, B. A., Ladage, M. L., Padilla, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NPP-16%2FNup50+function+and+CDK-1+inactivation+are+associated+with+anoxia-induced+prophase+arrest+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">NPP-16/Nup50 function and CDK-1 inactivation are associated with anoxia-induced prophase arrest in Caenorhabditis elegans.</a> Mol. Biol. Cell. 21, 712-724 (2010).</li>
<li>Nystul, T. G., Goldmark, J. P., Padilla, P. A., Roth, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Suspended+animation+in+C.+elegans+requires+the+spindle+checkpoint%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Suspended animation in C. elegans requires the spindle checkpoint.</a> Science. 302, 1038-1041 (2003).</li>
<li>Margalit, A., Vlcek, S., Gruenbaum, Y., Foisner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breaking+and+making+of+the+nuclear+envelope%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Breaking and making of the nuclear envelope.</a> J. Cell Biochem. 95, 454-465 (2005).</li>
<li>Maddox, A. S., Maddox, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-resolution+imaging+of+cellular+processes+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">High-resolution imaging of cellular processes in Caenorhabditis elegans.</a> Methods Cell Biol. 107, 1-34 (2012).</li>
<li>Miller, D. L., Roth, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C.+elegans+are+protected+from+lethal+hypoxia+by+an+embryonic+diapause%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">C. elegans are protected from lethal hypoxia by an embryonic diapause.</a> Curr. Biol. 19, 1233-1237 (2009).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Privação de oxigênio e Suspended Animation Embora a exposição à privação de oxigênio grave pode ser fatal para alguns organismos, alguns organismos são capazes de sobreviver à exposição a anoxia. No caso de C. elegans, a sobrevivência de exposição anoxia depende estágio de desenvolvimento e de resposta à anoxia é a entrada para um estado de animação suspensa reversível no qual um certo número de processos biológicos observáveis ​​são presos. Processos de divisão celular, o desenvolvime...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagentes / Equipamentos </td><td></td><td></td><td> Composição </td></tr><tr><td> Solução de hipoclorito </td><td></td><td></td><td> 0,7 g de KOH, 12 ml de NaOCl a 5%, levar a 50 ml com DDQ 2 0 </td></tr><tr><td> Tampão M9 </td><td></td><td></td><td> 3 g KH 2 PO 4, 11 g de Na 2 HPO 4, 5 g de NaCl, 1 ml (1 M) MgSO 4 por 1 L DDH 2 O </td></tr><tr><td> Lâminas de vidro de microscópio </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-343 </td><td> 3 &quot;x1&quot; mm X1.0 </td></tr><tr><td> Rodada micro lamínula </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 72223-01 </td><td> 25 mm de diâmetro </td></tr><tr><td> Halocarbon óleo 700 </td><td> Sigma </td><td> H8898-100ml </td><td></td></tr><tr><td> Anestésico </td><td></td><td></td><td> Tric 0,5%aine, tetramisole 0,05% </td></tr><tr><td> Leiden Perfusão Fechado Microincubator </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 650041 </td><td></td></tr><tr><td> Nitrogênio UHP </td><td> Calgaz (Air Liquide) </td><td></td><td> &gt; 99,9990% N 2 &lt;2 ppm de O2 </td></tr><tr><td> Tubos de plástico </td><td> VWR </td><td> 89068-468 </td><td> 0.062 &quot;ID x 0,125&quot; OD </td></tr><tr><td> Spinning microscópio confocal de disco </td><td> McBain Sistemas </td><td></td><td> Invertido Zeiss microscópio óptico, o sistema de iluminação de epifluorescência, CSU-10 Yokogawa digitalizador confocal, Hamamatsu multiplicador de electrões de câmara CCD. </td></tr></tbody></table>

uso de microscopia time lapse para visualize anoxia induzida suspended animation em<em&gt; c. elegans</em&gt; embriões

Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos

Caenorhabdits elegans tem sido amplamente utilizado no estudo da resistência a fadiga, o que é facilitado pela transparência das fases adultas e de embriões, assim como pela disponibilidade de mutantes genéticos e estirpes transgénicas que expressam uma variedade de proteínas de fusão 1-4. Além disso, os processos dinâmicos, tais como a divisão celular pode ser visualizado utilizando proteínas repórter fluorescente etiquetado. O estudo da mitose pode ser facilitado através da utilização de experiências de lapso de tempo de vários sistemas, incluindo organismos intactos, assim a C. precoce embrião elegans é bem adequado para este estudo. Apresentado aqui é uma técnica pela qual imagem in vivo de sub-estruturas celulares em resposta a anóxica (99,999% N 2; &lt;2 ppm O 2) o estresse é possível através de um fluxo de gás através de simples instalação em um microscópio de alta potência. A câmara microincubation é usado em conjunto com um fluxo de azoto e de gás através de um microscópio confocal de disco giratóriopara criar um ambiente controlado no qual os animais podem ser visualizados in vivo. Usando GFP-tagged tubulina gama e histona, a dinâmica ea prisão de divisão celular podem ser monitorados antes, durante e após a exposição a um ambiente privado de oxigênio. Os resultados desta técnica são de alta resolução, vídeos e imagens detalhadas das estruturas celulares dentro blastômeros de embriões expostos à privação de oxigênio.

Embriões C. elegans expostas à privação de oxigênio grave (anoxia) são capazes de sobreviver com a prisão de processos biológicos, incluindo desenvolvimento e divisão celular 7. A prisão anóxia induzida da divisão celular pode ser monitorizada, a um nível sub-celular, por meio de uma câmara de microincubation em conjunto com um fluxo de azoto e de gás através de um microscópio confocal de disco giratório para criar um ambiente controlado no qual os animais podem ser visualizados in vivo <str...

Descrito aqui é um<em&gt; In vivo</em&gt; A técnica de sub-imagem estruturas celulares em animais expostos a anoxia usando um fluxo de gás através da câmara microincubation em conjunto com um microscópio confocal de disco giratório. Este método é simples e suficientemente flexível para satisfazer uma variedade de parâmetros experimentais e sistemas modelo.

Uso de Microscopia Time Lapse para Visualize Anoxia induzida Suspended Animation em<em&gt; C. elegans</em&gt; Embriões

O *Caenorhabditis elegans* tem sido extensivamente utilizado no estudo da resistência ao estresse, o que é facilitado pela transparência dos estágios adulto e embrionário...

O objetivo geral deste procedimento é descrever uma técnica in vivo para imagens de dinâmicas subcelulares em embriões de C. elegans expostos à anóxia, utilizando um sistema de fluxo de gás em um microscópio de alta potência. Isso é realizado primeiramente preparando uma amostra de animais transgênicos jovens adultos para gerar uma população adequada de embriões jovens para aquisição de imagens. Em seguida, preparam-se lâminas com tampão de agarose fina para uso na câmara de microincubação.Em seguida, os exemplares de sea elegance são adequadamente anestesiados e cobertos com óleo de halo carbono para evitar dessecação quando expostos ao fluxo de gás. Por fim, a lamínula redonda com os animais anestesiados é colocada na câmara de microincubação. A câmara é então posicionada sobre a platina do microscópio e preenchida com gás nitrogênio para criar um ambiente anóxico durante a aquisição de imagens, utilizando-se, em última instância, um fluxo de gás através da câmara de microincubação.Em conjunto com a microscopia de fluorescência in vivo, permite vídeos e imagens detalhadas de alta resolução da parada do ciclo celular em resposta à anoxia. A principal vantagem desta técnica em rela

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Imagem C. elegans Os embriões utilizando um microscópio de epifluorescência e Software de Código Aberto

Este artigo descreve uma técnica para a visualização dos eventos iniciais da embriogênese do...

Lapso de tempo Microscopia de embriogênese inicial em Caenorhabditis elegans

Um dispositivo simples de microfluidos foi desenvolvido para realizar anestésico...

Simples dispositivos microfluídicos para<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging de<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; E Zebrafish

Este protocolo descreve como as células em divisão imagem dentro de um tecido em Caenorhabditis elegans embriões. Embora vários protocolos descrevem como a divisão celular imagem no embrião precoce, este protocolo descreve como imagem divisão celular dentro de um tecido em desenvolvimento em meados embriogénese tardia.

Visualizando neuroblasto Cytokinesis Durante<em&gt; C. elegans</em&gt; Embriogênese

Um protocolo é descrito que utiliza anoxia / inanição em C. elegans para modelo de isquemia / reperfusão. Os resultados funcionais incluem um aumento da mortalidade, anormalidades visíveis em processos neuronais marcado com GFP, e respostas comportamentais comprometidas que requerem a função neuronal.

Um modelo de anóxia-inanição por isquemia / reperfusão em<em&gt; C. elegans</em

Aqui é mostrado como rastrear e quantificar os processos de desenvolvimento em C. elegans. Os métodos apresentados são baseados em ferramentas de código aberto que podem ser facilmente implementadas. É demonstrado como reconstruir modelos 3D de forma celular, como rastrear manualmente estruturas subcelulares e como analisar o fluxo contrátil cortical.

Rastreamento e quantificação processos de desenvolvimento em<em&gt; C. elegans</em&gt; Como usar as ferramentas de código aberto

Aqui detalhamos protocolos projetados especificamente para monitorar defeitos morfogênicos que ocorrem durante as fases inicial e tardia do alongamento embrionário do nematóide Caenorhabditis elegans. Em última análise, esses protocolos são projetados para identificar genes que regulam essas fases e caracterizar suas necessidades diferenciais ao longo do eixo ântero-posterior do embrião.

Novas métricas para Caracterizar Embryonic Alongamento do nemátodo<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Este trabalho descreve um protocolo semi-alta de supressão que permite imagens simultâneas de lapso de tempo 3D de embriaênese embrionária em embriões de 80-100 C. elegans em uma única corrida noturna. Além disso, as ferramentas de processamento e visualização de imagens são incluídas para simplificar a análise de dados. A combinação destes métodos com tensões personalizadas do repórter permite a monitoração detalhada do embryogenesis.

Um método de imagem semi-alta-fonte e um kit de ferramentas de visualização de dados para analisar o desenvolvimento embrionário de C. elegans

Aqui, apresentamos um protocolo para preparar e montar embriões de Caenorhabditis elegans , registrando o desenvolvimento sob um microscópio 4D e traçando a linhagem celular.

Microscopia 4D: Desvendando caenorhabditis elegans Desenvolvimento Embrionário usando Microscopia Nomarski

O protocolo descreve um projeto de chip microfluídico simples e metodologia de microfabricação usada para cultivar C. elegans na presença de um suprimento contínuo de alimentos por até 36 h. O dispositivo de crescimento e imagem também permite imagens intermitentes de alta resolução a longo prazo de processos celulares e subcelulares durante o desenvolvimento por vários dias.

Um chip microfluídico simples para crescimento a longo prazo e imagem de Caenorhabditis elegans

Aqui, apresentamos protocolos e ferramentas para visualizar o cálcio durante a fertilização e embriogênese inicial usando um repórter de cálcio geneticamente codificado expresso na linha germinativa do nematóide modelo C. elegans.

Visualização in vivo de transientes de cálcio durante a fertilização e desenvolvimento inicial em C. elegans

Aprenda a imaginar dinâmicas subcelulares em embriões de C. elegans expostos à anoxia usando microscopia confocal de disco giratório. Este método permite visualizar em tempo real a resposta celular à privação de oxigênio.

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