Controlada por laceração do colo do útero em camundongos

O objetivo geral do experimento é gerar uma lesão de laceração reprodutível da medula espinhal do camundongo. Isso é conseguido expondo a lâmina cervical posteriormente quando o animal é posicionado no aparelho do sistema de lesões de Louisville. Como segunda etapa, um dispositivo estabilizador especialmente projetado é usado para a fixação da vértebra alvo da coluna vertebral do camundongo.

Em seguida, a medula espinhal alvo entre os arcos laminares é identificada após a remoção do ligamento amarelo na extremidade. A hemiseção dorsal cervical a uma profundidade de 0,75 milímetros é criada com precisão com o uso de uma lâmina oscilante e um micro driver. A principal vantagem da técnica que desenvolvemos no laboratório é a criação de um método muito preciso de produzir uma lesão medular por laceração.

Isso é importante porque as técnicas que foram usadas até agora, ou seja, a tesoura ou o bisturi, criaram problemas que são métodos incompletos e imprecisos de lesão medular. Agora temos métodos para evitar a contusão da medula espinhal, o deslocamento da medula espinhal para longe do dispositivo lacerante e a hemorragia excessiva que ocorre na lesão da medula espinhal. Ao usar essa técnica, somos capazes de criar um método muito preciso que evita o método de estimativa visual da profundidade da lesão medular.

Ao usar essa técnica, sentimos que podemos revolucionar os métodos experimentais de lesão medular usados no modelo de laceração, que podem ser inerentemente importantes na regeneração do axônio, bem como na criação de uma cura para a lesão medular. Demonstrando este procedimento está eing Jang, um neurocirurgião que é um cientista de pesquisa neurocirúrgica em nosso laboratório, Comece este procedimento esterilizando os seguintes instrumentos cirúrgicos, dois a três pares de fórceps, três pares de microtesouras, agulha calibre 30, sutura micro URS e um clipe de pele porta-agulha e um aplicador de clipe. Em seguida, desinfete o estabilizador da coluna depois disso, anestesiar o mouse com um coquetel de cetamina, xilazina ou trietanol intraperitoneal.

Em seguida, raspe o cabelo do pescoço do mouse. Limpe a pele com uma solução de iodopovidona e álcool 70%. Em seguida, transfira o mouse para a mesa de operação com uma almofada de aquecimento pré-aquecida.

Aplique pomada oftálmica nos olhos para evitar o ressecamento da córnea. Após a indução anestésica, faça uma incisão posterior na pele da linha média cervical do oput até o animal de gordura subcutâneo da coluna cervical inferior. Sob o microscópio, faça uma incisão na pele na linha média entre os músculos trapézios em C dois e retraia os músculos capita semifinalistas lateralmente.

Em seguida, estenda a dissecção muscular da linha média coddly para o processo espinhoso T dois que serve como um marco confiável. Separe os músculos do processo espinhoso T dois. Em seguida, remova a porção cartilaginosa do processo espinhoso T dois.

Em seguida, disseque os músculos paraespinhais dos arcos laminares bilateralmente de C quatro a T dois usando uma microtesoura. Começa adjacente aos processos espinhosos e se estende por ambos os arcos laminares até as articulações facetárias. Depois que as facetas laterais forem expostas, coloque o mouse no canal em forma de U do estabilizador da coluna do mouse.

Em seguida, coloque os braços de aço inoxidável do estabilizador do mouse sob as facetas expostas bilateralmente. Assim que os braços estiverem no lugar, aperte os parafusos de aperto manual dos braços de aço para imobilizar a coluna sob o microscópio. Remova o flam do ligamento entre os arcos laminares C cinco e C seis para expor a dura-máter subjacente entre o espaço interlaminar.

Use uma agulha de calibre 30 para criar uma pequena durotomia e uma micro tesoura para expandir a durotomia. A medula espinhal está agora pronta para sofrer a lesão de laceração controlada. Neste procedimento, coloque o estabilizador da coluna e o mouse no estágio do aparelho do sistema de lesões de Louisville, no qual uma lâmina é fixada com sua posição controlada por micro drivers.

Capaz de três amplitudes de movimento para realizar uma lesão de seção HEMI dorsal entre a lâmina C cinco a seis com uma lâmina plana de 2,3 milímetros presa ao oscilador. Defina a amplitude da lâmina oscilante para 0,5 milímetros, pois amplitudes mais baixas podem diminuir a facilidade de laceração completa do cordão. Em seguida, ligue o interruptor do vibrador da lâmina sob o microscópio, coloque a medula espinhal do mouse diretamente abaixo da lâmina vibratória.

Em seguida, eleve o stage em direção à lâmina oscilante com o registro de controle do micro driver. A posição zero quando a lâmina mal toca a veia dorsal da medula espinhal, a profundidade da laceração da medula espinhal é medida em relação à posição zero. Em seguida, eleve a posição do palco com o controle do micro driver.

Um giro de 360 graus do botão do micro driver eleva o palco em 0,25 milímetros. Assim, uma lesão de hemissecção dorsal de 0,75 milímetro é criada girando o botão do micro driver três vezes quando a lâmina começa a dilacerar a medula espinhal e lubrificar o campo cirúrgico com irrigação salina. Assim que a profundidade predeterminada for atingida, desligue o interruptor do vibrador, abaixe o stage apoiando o mouse e o clamp da lâmina de corte.

Remova o sangue irrigando com solução salina sobre o local da cirurgia. Em seguida, seque a área com cotonetes de algodão, pois a hemostasia geralmente ocorre em um minuto. No final, retire o mouse do estabilizador da coluna e feche a pele com aço inoxidável.

Michelle clipes. A coluna cervical é fixada colocando os braços sob as facetas laterais e, em seguida, travando os parafusos de aperto manual conforme mostrado nesta figura, a dura-máter é exposta entre o laminado de C cinco a seis C, seis a sete e C sete a T um sem qualquer remoção de osso. Aqui mostra as vistas sagitais de quatro lacerações dorsais da medula espinhal nas profundidades de 0,5, 0,8, 1,1 e 1,4 milímetros.

Eles indicam o alto grau de precisão usando esta técnica. Um dos problemas inerentes à criação de lesões medulares tem sido a falta de estabilização da coluna cervical. Usando o estabilizador de coluna que foi desenvolvido pelo nosso grupo, agora somos capazes de criar uma coluna cervical absolutamente imóvel.

Isso permitirá o aprimoramento da lesão da medula espinhal usando a contusão da medula espinhal, injeções na medula espinhal, bem como transplante de células na medula espinhal para todos os métodos de pesquisa da medula espinhal.