Name: Teste de estresse cardíaco induzido por dobutamina e Monitorado por cateterismo cardíaco em ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-10T14:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 45 s
Description: Aprenda a realizar teste de estresse cardíaco induzido por dobutamina e monitorado por cateterismo em camundongos. Este método revela doenças cardíacas subclínicas em modelos obesos induzidos por dieta rica em gordura.

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Agradecemos ao Dr. Hélio Salgado, Renata Lataro e Mauro de Oliveira, da Escola de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo e Ben Dr. Janssen, Instituto de Pesquisa Cardiovascular de Maastricht, Universidade de Maastricht, por generosa assistência durante o processo de configuração. Este trabalho foi financiado por subvenções Fondecyt N ° 11090114 para SDC

Protocolo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Faculdade de Medicina Clínica Alemã-Universidade del Desarrollo. I. Preparação infusão de dobutamina <ol><li> Dissolvem-se 10 mg de dobutamina, em 20 ml de água destilada estéril, com o fim de se obter uma solução stock de 500 ug / ml de dobutamina. Alíquota e armazenar a -20 ° C. Esta solução pode ser utilizada, pelo menos, durante 3 meses. </li><li> Descongelar uma alíquota da solução de reserva de dobutamina, à temperatura ambiente. </li><li> Diluir solução-mãe de dobutamina em NaCl estéril 0,9%, a fim de obter a solução de trabalho de dobutamina, cuja concentração é calculada utilizando a fórmula: dobutamina (ug / ml) = peso corporal x 0,2. </li><li> Encha uma seringa 1 ml 29Gx1 / 2 &quot;com solução de trabalho dobutamina. </li><li> Inserir a agulha da seringa para um tubo de 20 centímetros PE-10. </li><li> Ajuste a seringa na bomba de infusão, seguindo as instruções do fabricante. </li><li> Defina-se a infusão de rampa em uma etapa-A-passo com o formato de um aumento de 10 ul / min para cada etapa, de 6 passos. </li></ol> II. Preparando sensor de pressão <ol><li> Para minimizar a variação do sinal, o sensor de pressão submergir em água estéril a 37 ° C durante pelo menos 15 min. Não molhe o cateter mais de 0,5 cm de profundidade, de modo a evitar que a pressão hidrostática atinge o sensor de pressão. </li><li> Electronicamente calibrar o sensor de pressão a 25 e 100 mmHg. Eléctrico de entrada (Volt) é convertido em sinal de pressão (mmHg). </li><li> Definir a taxa de amostragem de 2 k / s e utilizar o filtro passa baixo com um corte de 100 Hz. Definir o sinal de pressão para zero mmHg. </li><li> Marcar o cateter 15 mm da ponta. Distante para alcançar o coração a partir do ponto de introdução foi estimada por ecocardiograma, detectando a presença do cateter no interior do ventrículo esquerdo. </li></ol> III. Preparando Rato para cateterismo <ol><li> Peso C57BL / 6, machos, 30-32 semanas de idade. </li><li> Injectar por via intraperitoneal de cetamina 60 mg / kg e 4 mg / kg de xilazina 1. Nota: Outros anestésicos podem ser utilizados, por exemplo: 350-450 ug / kg avertina, 50 ug / kg de pentobarbital, ou 1,5-2% 2-3 isoflurano. </li><li> Raspar o pescoço com um barbeador elétrico. </li><li> Posicione o mouse anestesiado em decúbito dorsal em uma placa de aquecimento aquecido isotérmica. Fixe seus membros com fita de papel. </li><li> Realizar uma pitada de igual para confirmar sedação completa. </li><li> Insira com cuidado a sonda retal para monitorar a temperatura do corpo. Usando sonda vaselinized é recomendada. </li><li> Se a temperatura do corpo difere de 37 ° C ± 0,5 ° C, ajusta-lo através da placa de aquecimento. </li><li> Coloque focinho de rato perto do suprimento de oxigênio. </li><li> Coloque a região do pescoço do rato, ao microscópio estereoscópico. </li></ol> IV. Aquisição de Dados <ol><li> Na 7 LabChartPro software, selecione um canal para registro de pressão e um canal para a freqüência cardíaca (FC)registro. Para este último, selecione a opção &quot;Medidas cíclicos&quot; e medição de configuração como taxa. </li><li> Para o canal de pressão definir a faixa de escala: 0 a 150 mmHg. </li><li> Para HR canal definir a faixa de escala: 200-600 bpm. </li><li> Pressione a tecla START para iniciar o registro. </li><li> Inserir comentários indicando procedimentos realizados, por exemplo: administração de anestesia, o início da infusão de dobutamina, a concentração de dobutamina, respirando alterações. </li></ol> V. Cateterismo Cardíaco 4,5 <ol><li> Realizar uma pequena incisão no lado direito, perto da mandíbula. Com uma tesoura separar o tecido conjuntivo da pele-muscular. </li><li> Realizar uma dissecção longitudinal (1,5-2 cm), no lado direito da traqueia. Separou-se a gordura do tecido conjuntivo, músculo e com fórceps curvo, de modo a expor a artéria carótida direita perto da traqueia. </li><li> Coloque um expansor no lado animal direito para expor a artéria carótida. Pulsátilpressão gerada pelo coração facilita a identificação da artéria. A veia jugular, que é vermelho escuro, está à direita. </li><li> Separou-se a artéria a partir de tecidos adjacentes com fórceps curvo. O nervo vago, que se assemelha a uma linha branca, fica ao longo da artéria. </li><li> Corte um pedaço de 20 cm de fio 6/0 e seda &quot;double-lo&quot;. </li><li> Passe a linha &quot;casal&quot; sob a artéria da esquerda para a direita. Cortar o fio, a fim de obter extremidades separadas. </li><li> Passar por um terceiro segmento (10 cm) abaixo da artéria. </li><li> Dê um nó apertado no fio posicionado perto da cabeça, e um solto no segmento mais distal. </li><li> Dê um nó frouxo na linha do meio, e fixar a extremidade direita da linha média para a almofada de aquecimento com uma fita de papel. </li><li> Mantenha artéria carótida úmido, largando estéril NaCl 0,9%. Secar o excesso de líquido com cotonetes. </li><li> Estique a linha inferior com uma pinça hemostática. </li><li> Fixar a posição da tesoura pinça hemostática por pavançando a pele do abdómen, que se estende a linha de cima, a fim de ocluir o fluxo de sangue. Verificar que o tecido conjuntivo em torno da artéria foi removido. A artéria deve estar cheio de sangue e privados de pulso. Prevenir tópicos de produzir uma força de binário sobre a artéria. </li><li> Fazer uma secção transversal nick perto da parte inferior da artéria com um Vannas micro-tesoura. Gotas de sangue será derramado. </li><li> Inserir o cateter na artéria carótida. Certifique-se de introduzir o sensor de pressão inteiro. Verificar que não há perda de sangue. </li><li> Suavemente ajustar o nó rosca do meio, a fim de segurar o cateter no lugar. Não comprimir em demasia, o sensor de pressão é muito frágil. </li><li> Solte a tesoura hemostat do abdômen animal. </li><li> Segurar o cateter com uma mão e empurra o fio do meio, a fim de evitar a perda de sangue. Nota: artéria deve estar cheio de sangue. </li><li> Iniciar sinais de pressão de gravação. </li><li> Quando o cateter está dentro, osinal de pressão arterial oscila 60-70 a 100-120 mmHg. A forma do sinal de pressão é mostrada na Figura 1.A. Nota: se estiver interessado em diante, neste ponto do tempo é possível registar a pressão arterial se sinal é estável durante pelo menos 5 min. Valores de FC foram obtidos a partir das formas de onda de pressão, considerando um intervalo de 30 segundos de sinal de gravação. É possível utilizar também um método de ECG para a medição directa da AR, de acordo com os objectivos de investigação. </li><li> Suavemente empurrar o cateter se observar uma alteração na forma do sinal de pressão (Figura 1 B). Uma vez que o cateter está no interior do ventrículo esquerdo, o sinal de pressão varia de 0 a 100-120 mmHg. Se for difícil para deslizar o cateter, belisque peito animal com dois dedos. </li><li> Continuamente controlar a taxa de respiração, a temperatura corporal, o nível de anestesia e sinal de pressão. Todos eles devem permanecer estáveis. </li></ol> VI. A infusão de dobutamina <ol><li&gt; Para a canulação da veia jugular certifique-se de descascar o tecido adiposo em torno da veia, a fim de evitar a sua perfuração. O procedimento cirúrgico para a oclusão da veia é semelhante ao procedimento descrito para a artéria carótida. </li><li> Introduzir um tubo de PE-10 para dentro da veia. Confirmar que o fluxo de sangue não é bloqueado se movendo para trás o êmbolo da seringa. </li><li> A infusão de dobutamina começa com 10 ul / min e terminar com 60 ul / min. Em cada passo, a velocidade de perfusão é mantida durante 2 min 6. </li><li> Após a última dose de dobutamina, sacrificar o animal com uma overdose de anestesia. </li></ol> VII. Análise de Dados <ol><li> Para análise dos dados, escolha a seção dos dados gravados de seu interesse. Certifique-se de considerar um intervalo de tempo em que o sinal de pressão é estável. </li><li> Selecione o ícone de configuração no módulo de Pressão Arterial. Indique o tipo selecionado de sinal de pressão. </li><li> Automaticamente os LabChartPro 7 software exibe média máxima,e os valores mínimos de RH, pressão arterial sistólica (P max), pressão diastólica (P min), pressão diastólica final (PDE), o desenvolvimento positivo pressão máxima (dP / dtmax) e desenvolvimento de pressão negativa máxima (dP / dt min). Além disso, os parâmetros cardíacos podem ser representadas no traçado da pressão. </li></ol>

<ol><li>Hart, C. Y., Burnett, J. C., Redfield, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+avertin+versus+xylazine-ketamine+anesthesia+on+cardiac+function+in+normal+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of avertin versus xylazine-ketamine anesthesia on cardiac function in normal mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 281, H1938-H1945 (2001).</li>
<li>Janssen, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+anesthetics+on+systemic+hemodynamics+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of anesthetics on systemic hemodynamics in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 287, H1618-H1624 (2004).</li>
<li>Lorenz, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+practical+guide+to+evaluating+cardiovascular%2C+renal%2C+and+pulmonary+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A practical guide to evaluating cardiovascular, renal, and pulmonary function in mice.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 282, R1565-R1582 (2002).</li>
<li>Lorenz, J. N., Robbins, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+intraventricular+pressure+and+cardiac+performance+in+the+intact+closed-chest+anesthetized+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Measurement of intraventricular pressure and cardiac performance in the intact closed-chest anesthetized mouse.</a> Am. J. Physiol. 272, H1137-H1146 (1997).</li>
<li>Nemoto, S., DeFreitas, G., Carabello, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+catheterization+technique+in+a+closed-chest+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp.+Top.+Lab+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Cardiac catheterization technique in a closed-chest murine model.</a> Contemp. Top. Lab Anim. Sci. 42, 34-38 (2003).</li>
<li>Daniels, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+cardiac+functional+reserve+in+type+2+diabetic+db%2Fdb+mice+is+associated+with+metabolic%2C+but+not+structural%2C+remodelling%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol.+%28Oxf%29%22%5BJournal%5D)">Impaired cardiac functional reserve in type 2 diabetic db/db mice is associated with metabolic, but not structural, remodelling.</a> Acta Physiol. (Oxf). 200, 11-22 (2010).</li>
<li>De Celle, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+structural+and+functional+consequences+of+cardiac+ischaemia-reperfusion+injury+in+vivo+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Long-term structural and functional consequences of cardiac ischaemia-reperfusion injury in vivo in mice.</a> Exp. Physiol. 89, 605-615 (2004).</li>
<li>Huntgeburth, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transforming+growth+factor+beta+oppositely+regulates+the+hypertrophic+and+contractile+response+to+beta-adrenergic+stimulation+in+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Transforming growth factor beta oppositely regulates the hypertrophic and contractile response to beta-adrenergic stimulation in the heart.</a> PLoS One. 6, e26628(2011).</li>
<li>Reddy, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+function+in+young+and+old+Little+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol.+A.+Biol.+Sci.+Med.+Sci%22%5BJournal%5D)">Cardiac function in young and old Little mice.</a> J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 62, 1319-1325 (2007).</li>
<li>Christoffersen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+lipid+accumulation+associated+with+diastolic+dysfunction+in+obese+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Cardiac lipid accumulation associated with diastolic dysfunction in obese mice.</a> Endocrinology. 144, 3483-3490 (2003).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Teste de estresse cardíaco induzido por dobutamina e monitorado por cateterismo cardíaco é trabalhoso. No entanto, seguindo o protocolo aqui descrever e com um curto tempo de formação, é possível avaliar a seis parâmetros hemodinâmicos numa única experiência que duram aproximadamente uma hora. Os passos essenciais do protocolo aqui apresentado são as cânulas dos vasos sanguíneos. Em relação à canulação da artéria carótida, a incisão realizada deve ser profundo o suficiente para quebrar as tr...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> Reagentes </td></tr><tr><td> PE-50/10 </td><td> Warner Instruments </td><td> 64-0752 </td><td></td></tr><tr><td> Fio de seda 6/0 HR17 </td><td> Tagum </td><td> SN0713K </td><td></td></tr><tr><td> Xylacin 20 mg / ml </td><td> Centrovet Laboratorio </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cetamina 100 mg / ml </td><td> Arraste Pharma </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cloreto de sódio a 0,9% </td><td> Laboratório de Sanderson SA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cloridrato de Dobutamina </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D0676 </td><td></td></tr><tr><td> Seringa de insulina U-100 29G x ½ &quot; </td><td> Terumo Medical Co. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fórceps Dissecando Estilo Micro centímetros 11,5 7 </td><td> LawtonMedizintechnik </td><td> 09-0959 </td><td></td></tr><tr><td> Graefe Fórceps DCV 0,7 milímetros 7 centímetros </td><td> Lawton Medizintechnik </td><td> 62-0263 </td><td></td></tr><tr><td> Grampos Dieffenbach bulldog Str Cl 38 milímetros </td><td> Lawton Medizintechnik </td><td> 60-010 </td><td></td></tr><tr><td> Vannas Tesoura 8 centímetros Str Fh </td><td> Lawton Medizintechnik </td><td> 63-1400 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> SPR-671 Pressão cateter Mikro-Tip </td><td> Millar instrumentos </td><td> 840-6719 </td><td></td></tr><tr><td> PCU-2000 Unidade de Controle de Pressão </td><td> Millar instrumentos </td><td> 880-0129 </td><td></td></tr><tr><td> PowerLab 4/30 </td><td> ADInstruments Pty Ltd. </td><td> ML866 </td><td></td></tr><tr><td> LabChartPro 7 </td><td> ADInstruments Pty Ltd. </td><td> MLU260 / 7 </td><td></td></tr><tr><td> Bomba de infusão Legato200 </td><td> KdScientific </td><td> KD-KDS210P </td><td></td></tr><tr><td> TCAT-2LV controlador de temperatura e placa de aquecimento isotérmico </td><td> PhysiTemp instrumentos Inc. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fornecimento de oxigênio medicinal </td><td> Indura </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Retal sonda </td><td> ADInstruments Pty Ltd. </td><td> MLT1404 </td><td></td></tr><tr><td> Microscópio trinocular, iluminação axial </td><td> LW Científico </td><td> Z2B-TRI-Etne, ILP-1502-LTS1, ILP-1502-DGGF </td><td></td></tr></tbody></table>

teste de estresse cardíaco induzido por dobutamina e monitorado por cateterismo cardíaco em ratos

Cardiac Stress Test Induced by Dobutamine and Monitored by Cardiac Catheterization in Mice

A dobutamina é um agonista β-adrenérgico com uma afinidade mais elevada para o receptor expresso no coração (β 1) do que para os receptores expressos nas artérias (β 2). Quando administrada sistemicamente, aumenta a procura cardíaca. Assim, dobutamina desmascara ritmo anormal ou áreas isquêmicas potencialmente em risco de infarto. A monitorização da função cardíaca durante um teste de esforço cardíaco pode ser realizada por qualquer ecocardiografia ou a cateterização cardíaca. A última é uma técnica invasiva, mas mais preciso e informativo que a primeira. Teste de esforço cardíaco induzido pela dobutamina e monitorizada por cateterismo realizado como descrito aqui permite, numa única experiência, a medição dos seguintes parâmetros hemodinâmicos: ritmo cardíaco (HR), pressão sistólica, pressão diastólica, a pressão diastólica final, a pressão positiva máxima desenvolvimento (dP / dtmax) e negativa da imprensa máximaure desenvolvimento (dP / dt min), em condições basais e sob doses crescentes de dobutamina. Como esperado, em camundongos normais foi observado um aumento relacionado com a dose de dobutamina em RH, dP / dt max e dP / dt min. Além disso, na maior dose testada (12 ng / g / min), a descompensação cardíaca de alto teor de gordura da dieta, os ratos obesos induzidos foi desmascarado.

O sinal de pressão arterial é definida pela pressão sistólica e diastólica. Quando o sensor de pressão está no interior do ventrículo esquerdo, a sua pressão (LVP) da forma de onda é caracterizada por uma queda para zero da pressão diastólica, e o aparecimento da contracção do átrio esquerdo, antes de contracção do ventrículo esquerdo (Figura 1). No estado inicial, cetamina-xilazina anestesiados ratos normais tiveram de RH de 280 ± 24, P máximo de 107 ± 8, P min de 5 ± 1, a EDP, de...

Nós descrever o protocolo para realizar um teste de estresse cardíaco induzido por dobutamina e monitorado por cateterismo cardíaco em ratos normais. Também vamos mostrar a sua aplicação para desmascarar doença cardíaca subclínica em alto teor de gordura da dieta induzida ratos obesos.

Teste de estresse cardíaco induzido por dobutamina e Monitorado por cateterismo cardíaco em ratos

Dobutamine is a &beta;-adrenergic agonist with an affinity higher for receptor expressed in the heart (&beta;1) than for receptors expressed in the ...

Teste de esforço cardíaco induzido por dobutamina e monitorado por cateterismo cardíaco em camundongos. Neste vídeo, apresentaremos uma descrição passo a passo de um teste de esforço cardíaco induzido por dobutamina e monitorado por cateterismo cardíaco realizado em camundongos normais. Também mostraremos sua aplicação para desmascarar doenças cardíacas subclínicas em camundongos obesos induzidos por dieta rica em gordura.O mouse anestesiado é colocado em uma placa de regulação térmica. O suprimento de oxigênio é administrado por meio de um tubo de plástico e a temperatura corporal é monitorada por meio de uma sonda retal para cateterismo cardíaco. Em um procedimento de tórax fechado, a artéria carótida é usada, pois o acesso através do sensor de pressão na ponta do cateter é fino o suficiente para entrar na artéria para medir a pressão arterial.O cateter é introduzido aproximadamente 10 milímetros. A forma de onda da pressão arterial é assim. Para medir a pressão ventricular, o cateter deve seguir a via retilínea do RE e passar pela válvula aórtica até a câmara ventricular.A forma da onda de pressão muda quando o sensor de pressão entra na câmara ventricular para administrar dobut

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