Name: Estudo do esvaziamento gástrico em ratos diabéticos não obesos utilizando a 13 C -octanóico teste de respiração Ácido (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 24 s
Description: Aprenda a medir o esvaziamento gástrico em camundongos diabéticos não obesos utilizando o teste de respiração com ácido octanóico marcado com carbono-13. Este método não invasivo permite medições repetidas ao longo do tempo.

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Esta publicação vídeo foi possível graças ao financiamento do Instituto Nacional de Diabetes e Doenças Digestivas e Renais (NIDDK) para o Projeto Programa de Grant &quot;Patobiologia do Sistema Entérico&quot; DK 68055. Christopher T. Creedon foi apoiado pelo Programa de Mentoria Rochester Escolas Públicas. Agradecemos o Sr. Gary Stoltz para assistência técnica, a Sra. Kristy Zodrow para secretariado assistência e Douglas Dr. Baer, ​​de Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA).

1. Treinamento e habituação dos Ratos <ol><li> Antes da análise, colocar todos os ratos em câmaras de teste de 2-4 horas, com o fluxo de ar constante, a fim de se habituam-as às condições de teste. Isso reduz acentuadamente a níveis de tensão que de outra forma poderiam causar detecção aberrante de esvaziamento gástrico retardado. Tratar os ratinhos do mesmo modo que se a experiência do esvaziamento gástrico foi executado. Prepare gema de ovo (ver mais adiante) sem adição de ácido octanóico e alimentar 0,2 g a cada rato. </li><li> Repita esse processo até que os ratos são suficientemente treinados (tipicamente 2-3 vezes). Os ratos tipicamente são facilmente habituados, desde que as condições ambientais são mantidos os mesmos. </li></ol> Nota: Não habituados ratos continuam a se mover em torno de cerca de 1 hora após a transferência para a câmara, e defecar e urinar com frequência, enquanto os ratos habituados rapidamente resolver em seu novo ambiente e descansar tranquilamente. Nãote: Durante o experimento: os animais monitorar os sinais de perda de habituação, como urinar em excesso, a defecação, a falta de interesse em comer o ovo. Se este for o caso, considerar re habituating em uma câmara vazia 1-2 vezes antes de obter os dados de esvaziamento gástrico. A consistência é extremamente importante ao fazer esta experiência. Fazer as coisas exatamente da mesma maneira todas as vezes é a única maneira de obter resultados confiáveis ​​e reprodutíveis. Isto inclui fornecer o tratamento (por exemplo, insulina), a cada dia, ao mesmo tempo, não separar os ratos dos seus companheiros de gaiola, a menos que seja absolutamente necessário, os ratos em jejum e de iniciar o teste o esvaziamento gástrico ao mesmo tempo, e manipulação dos ratos da mesma maneira. 2. Preparação do Isotope contendo farinha de Teste <ol><li> Comece com pesar 5 g de gema de ovo em um tubo falcon 50 ml. Repita essas etapas cada dia experimental para preparar uma refeição de teste fresco. </li><li> Adicionar 10 ul de ácido octanóico com um Concentrção de 2 ul / g para o tubo de 50 ml Falcon contendo o ovo e misturar vigorosamente durante 1 min, com uma espátula no tubo falcon. </li><li> O ovo é então transferido para um béquer de vidro e aqueceu-se ao longo de um bico de Bunsen até que coagula e a sua consistência é adequado para fazer pequenas bolas. Isso normalmente leva cerca de 30 segundos. </li></ol> Nota: As bolas de gema de ovo deve pesar 0,2 g por mouse. Isto é importante para manter a dose cumulativa constante em todos os ratos. 3. Do início do experimento <ol><li> Uma vez treinados e prontos para o esvaziamento gástrico rápido, os ratos durante a noite (12 horas) em um metal &quot;malha inferior&quot; rack jejum para evitar coprofagia. Certifique-se de que eles têm livre acesso à água potável. Uma vez que são utilizados ratos diabéticos na experiência actual, eles não devem ser sujeitos a jejum durante mais de 16 horas. </li><li> Comece definindo-se as câmaras de esvaziamento gástrico. Use câmaras limpas e tampas que tenham sido secos ao ar. Além disso, qualquertubos que ligam as câmaras para o analisador de CO ou o fornecimento de ar 2 deve estar isenta de humidade, a água pode interferir com o sinal lido pelo analisador </li><li> Conectar as câmaras para os tubos de entrada que proporcionam um fluxo de ar constante. Em seguida, ligar os tubos de saída das câmaras para a máquina. Fechar os tubos e ligar o fluxo de ar. </li></ol> Nota: aplicar uma pequena quantidade de vaselina no final das tampas de cobertura assim que se fecham de forma fácil e estão firmemente selado. Esta vedação é necessário recolher todo o dióxido de carbono produzido pelos ratos. 4. Procedimentos Experimentais <ol><li> Comece por pesagem de cada rato. O peso corporal é uma medida da sua saúde continuada bom. Em seguida, coloque cada rato na câmara apropriada. É claro que é importante que o ar que flui para dentro das câmaras no momento. </li><li> Para iniciar a medição, permitir que os ratos para se aclimatar para as câmaras antes de ajustarção dos níveis de ar. </li><li> Uma vez que os ratos aparecem calma, o que pode demorar alguns minutos, ajustar a taxa de fluxo de ar para cada câmara de mouse. Isto pode ser diferente para cada rato. Tipicamente, o fluxo de ar é ajustada no início da experiência para se certificar de que o CO 2 exalado atinge níveis detectáveis ​​por qualquer que seja o equipamento está a ser utilizado, e para certificar-se de que o nível permanece suficientemente baixa para garantir a circulação de ar saudável. Usamos iniciais níveis de CO 2 entre 1.000 e 1.500 partes por milhão. </li><li> Se ter dificuldade com os ajustes, verificar se há vazamentos de ar. Em seguida, repita o processo para cada uma das câmaras e prestar atenção para uma nova rodada de medidas para ver se os ajustes feitos ao fluxo de ar ter corrigido o nível de CO 2. É importante para se obter uma linha de base estável da leitura antes da alimentação dos animais. Nós usamos uma máquina com um recurso de auto-calibração. Se este não é o caso de calibração deve ser verificada. </li><li> Quando isto for conseguido, administrar a refeição ovopara o primeiro registo do tempo e do rato a cada rato recebe os alimentos. </li><li> Corremos o procedimento para 4 horas para obtenção de valores suficientes para a montagem da curva 13 CO 2 para o enriquecimento de cada rato. Confira os ratos a cada 30-60 minutos para se certificar de que os níveis de CO 2 são ainda seguros para os ratos. </li><li> Preparar novas caixas contendo o alimento antes do final do teste, de modo que os ratos podem começar a comer imediatamente após o teste terminou. </li></ol>

<ol><li>Yeung, C. K., McCurrie, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+to+investigate+the+inhibitory+effects+of+drugs+on+gastric+emptying+in+the+mouse+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Toxicol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).</li>
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</ol>

Os autores declaram que não têm interesses conflitantes financeiros.

A técnica aqui descrita permite uma repetida e não-invasiva de medição in vivo de esvaziamento gástrico em ratos sólido. Este sistema tem a vantagem de que os animais não são retidos na câmara de medição, o que lhes permite mover-se e girar livremente. Uma vez que este é um ambiente desconhecido, os ratos ainda precisam ser treinados e habituados às câmaras de testes para evitar efeitos do estresse sobre o esvaziamento gástrico. De um modo geral, nós assumimos os dados de esvaziamento gástrico são fiáv...

Este manuscrito descreve as considerações técnicas e metodológicas envolvidas na medição não invasiva do esvaziamento gástrico em ratos. Seguindo o protocolo descrito aqui, os investigadores podem de forma fiável e reproduzível acompanhar as alterações no esvaziamento gástrico, devido ao desenvolvimento de uma doença, estudar o impacto dos agentes farmacológicos sobre o esvaziamento gástrico e seguir a resposta de esvaziamento gástrico para o tratamento de doenças subjacentes ou defeitos 6,8, 11,12. Em publicações anteriores, a aplicação de 13 C do ácido octanóico testes de respiração mostrou ser uma forma útil de medir o esvaziamento gástrico nos seres humanos e animais 3,8. Este trabalho descreve, em detalhe, os procedimentos necessários para obter dados fidedignos sobre a 8 6 para meses necessários para um estudo longitudinal de esvaziamento gástrico em ratos com diabetes. As vantagens de seguir este protocolo, quando comparada com os métodos anteriormente publicados são de que o investigador pode ser assegurado o obtaine dadosd será confiável e reprodutível. Além disso, o sistema automático de recolha e análise de amostras de gás aqui descrita aumenta o número de animais que podem ser seguidos simultaneamente em estudo. No geral, o objetivo deste trabalho é identificar os principais fatores que mantêm a habituação dos ratos para o teste e que reduzir a variabilidade nos resultados obtidos. Para a medição in vivo de esvaziamento gástrico, os ratos são alimentados durante a noite e colocados nas câmaras de ensaio de plástico transparente, com fluxo de ar constante. Depois de os ratos ficam habituados aos tubos, de linha de base exalado 13 níveis de CO 2 são determinadas e o fluxo de ar ajustado de acordo. Em seguida, administrar uma refeição de teste consistindo em gema de ovo misturado com 13 C-rotulado ácido octanóico. Porque os ratos são jejuou e treinados, eles geralmente comem a refeição de teste dentro de 2 min. A administração de ácido octanóico não é absorvido no estômago, mas será retomado no duodeno umd vai ficar metabolizada no fígado em 13 CO 2, o qual é libertado e expirado, resultando num enriquecimento de 13 CO 2 no ar circundante. As amostras de ar são recolhidos em intervalos de tempo determinados e são analisados ​​pelo analisador de isótopo de carbono. O passo limitante da velocidade, em todo este processo é o esvaziamento gástrico e a excreção pulmonar de 13 CO 2 corresponde directamente com o esvaziamento gástrico da refeição rotulados. <img src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1highres.jpg"/> Figura 1. Esquemática do aparelho de esvaziamento gástrico. Após jejum, os ratos são colocados em câmaras transparentes, permitindo-lhes mover e girar livremente. Um tubo de entrada permite que o influxo de ar fresco e constante e uma saída conduz ao analisador de isótopo para medir a 13 C a 12C em relação a respiração exalada. A câmara também tem uma porta central para fornecimento de alimentos contendo [13 C]-ácido octanóico.

<table border="1"><tbody><tr><td> NOME </td><td> EMPRESA </td><td> NÚMERO CAT </td><td> COMENTÁRIOS </td></tr><tr><td> Uma fonte de fornecimento constante de ar de fluxo, bem como a composição </td><td> central de fornecimento de ar na unidade de pesquisa </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 130 ml câmara de amostragem que tem ar de entrada, de saída de ar, e abertura de administração de alimentos Tubos de plástico para o fornecimento de ar </td><td> Na casa construída </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Octanóico </td><td> Cambridge Isotope Laboratories (Andover, MA) </td><td> CLM-293-1 </td><td></td></tr><tr><td> Para preparar a refeição de ovos: <ul><li> béquer pequeno </li><li> 50 tubo de plástico ml </li><li> Bico de Bunsen </li><li> ovo </li><li> espátula </li></ul></td><td> Qualquer fornecedor </td><td></td><td> Tenteser compatível com o fornecedor de ovos desde que o teor nutritivo e palatabilidade dos ovos pode afectar a ingestão e esvaziamento gástrico da refeição </td></tr><tr><td> Analisador de dióxido de carbono isótopo </td><td> Los Gatos Research Inc. (Mountain View, CA) </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

estudo do esvaziamento gástrico em ratos diabéticos não obesos utilizando a [<sup&gt; 13</sup&gt; c]-octanóico teste de respiração Ácido

Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Estudos de esvaziamento gástrico em ratos têm sido limitadas pela incapacidade para acompanhar alterações gástricas esvaziamento no mesmo animal uma vez que as técnicas mais vulgarmente utilizados necessitam de matar os animais e recuperação pós-morte de 1,2 a refeição. Esta abordagem evita a estudos longitudinais para determinar alterações no esvaziamento gástrico com a idade e progressão da doença. A comummente utilizados [13 C]-octanóico teste de respiração para os seres humanos ácido 3 foi modificado para utilização em ratinhos e ratos 4-6 e 7 que anteriormente mostraram que este teste é de confiança e sensível às mudanças no esvaziamento gástrico em resposta a drogas e durante progressão da doença diabética 8. Neste vídeo de apresentação do princípio e aplicação prática deste teste modificado é explicado. Como no estudo anterior, os ratinhos NOD LTJ são usados, um modelo de diabetes do tipo 1 9. A proporção destes ratos desenvolvem os sintomas de gastroparesia, uma complicação da diabetes caracterizadas por esvaziamento gástrico retardado, sem obstrução mecânica do estômago 10. Este artigo demonstra como treinar os ratos para testes, como preparar a refeição de teste e obter 4 hr gástricas dados esvaziamento e como analisar os dados obtidos. O analisador de isótopo de carbono utilizado no presente estudo, é adequado para a amostragem automatizada de amostras de ar de até 12 ratinhos, ao mesmo tempo. Esta técnica permite o acompanhamento longitudinal de esvaziamento gástrico a partir de grupos maiores de ratos com diabetes ou outras doenças de longa duração.

Um conjunto de dados representativos a partir de três ratinhos diferentes é mostrada na Figura 2. O gráfico preto representa os pontos de dados de um rato, com o esvaziamento gástrico normal. Ela mostra a fracção de 13 C, que é recuperado no ar exalado, expressa em percentagem da dose administrada por hora expresso como uma função do tempo. A curva azul é a partir de um ratinho com um esvaziamento gástrico acelerado com um valor de meia T de 40 minutos e a curva de vermelho é de um rato com u...

Determinação do esvaziamento gástrico com um não-invasivo [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanóico teste de respiração ácido para gastroparesia rastreamento em camundongos NOD fêmeas LTJ.

Estudo do esvaziamento gástrico em ratos diabéticos não obesos utilizando a [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanóico teste de respiração Ácido

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um método para a medição in vivo do esvaziamento gástrico em camundongos utilizando um teste respiratório com ácido octanoico 13C. Camundongos e outros animais pequenos têm sido, é claro, muito úteis para nos ajudar a compreender a fisiopatologia de doenças; em nosso laboratório, estudamos a gastroparesia, e um dos problemas com a gastroparesia é que, para estudar a doença, precisamos acompanhar o esvaziamento gástrico ao longo do tempo. Esse tem sido um problema com as técnicas atuais, pois essas técnicas exigem que você introduza uma substância, na forma líquida ou sólida, no estômago do camundongo e, algum tempo depois, sacrifique o animal para estimar o que saiu do estômago.O que queríamos fazer era estabelecer uma técnica não invasiva para medir o esvaziamento gástrico, e o que fizemos foi adaptar o teste respiratório conhecido com o aminoácido 13 carbono para permitir o seu uso em camundongos. Isso nos permite realizar medições repetidas ao longo do tempo e, em seguida, correlacionar o que observamos com a histologia e a fisiologia. O equipamento que utilizamos aqui permite automatizar o procedimento, embora, é claro, ele também possa ser feito manualmente.A vantagem da automação não é apenas o fato de podermos realizar muito mais esvaziamentos gástricos ao longo do tempo, mas também de podermos realizá-los em múltiplos camundongos simultaneamente. O que mostraremos é um método no qual podemos analisar até 12 camundongos ao mesmo tempo. A animação a seguir mostra a montagem do nosso experimento de esvaziamento gástrico para a medição in vivo do esvaziamento gástrico.Os camundongos são colocados em tubos de plástico transparentes com fluxo de ar constante. Após os camundongos se habituarem aos tubos e após o ajuste do fluxo de ar, administramos uma refeição-teste composta por gema de ovo misturada com ácido octanoico marcado com 13 carbono. Como os camundongos estão fixados e treinados, geralmente consomem a refeição-teste.Em até dois minutos, o ácido OCT NOIC administrado será absorvido no duodeno e metabolizado no fígado, sendo liberado e exalado, resultando no enriquecimento de dióxido de carbono 13C no ar circundante, o qual é então medido pelo nosso analisador de isótopos. Vamos analisar com mais detalhes o que ocorre no organismo do camundongo. Após ingerir a refeição-teste contendo o ácido OCT NOIC marcado com 13C, a refeição entra no estômago.O ácido OCT NOIC permanece intacto no estômago. Após a passagem pelo piloro, é rapidamente absorvido no duodeno. O composto marcado atinge o fígado através da veia porta e é metabolizado em dióxido de carbono marcado com 13 carbonos.O dióxido de carbono marcado é liberado no sangue venoso e é exalado. A etapa limitante da velocidade neste processo inteiro é o esvaziamento gástrico. Isso significa que a excreção pulmonar do dióxido de carbono 13 corresponde diretamente ao esvaziamento gástrico da refeição marcada.As amostras de ar são coletadas em intervalos de tempo determinados e analisadas por um analisador de isótopos de carbono. Diversos analisadores de isótopos podem ser utilizados. Neste estudo, optamos por utilizar um analisador de isótopos de carbono LGR 13 de baixo GATOS para pesquisa.A coleta de amostras durante quatro horas fornece cinética reprodutível de dióxido de carbono com 13 carbono, que reflete a taxa de esvaziamento gástrico. Ajuste de curva. O uso de regressão não linear permite o cálculo dos tempos de meia vida de esvaziamento.Este procedimento é adequado para o acompanhamento de camundongos com doenças crônicas. Neste estudo específico, utilizamos camundongos fêmeas não obesos diabéticos, N-O-D-L-T-J, que são um modelo para o diabetes tipo um humano. Antes da análise, todos os camundongos são deixados em habituação nas câmaras de teste para minimizar os níveis de estresse.Como o atraso no esvaziamento gástrico é um indicador característico de estresse em camundongos, os animais não habituados continuam se movimentando por cerca de uma hora após a transferência para a câmara, defecando e urinando. Frequentemente, considera-se que os camundongos foram habituados com sucesso quando se acomodam rapidamente em seu novo ambiente. Após a transferência para a câmara, depois de um breve período de exploração, os camundongos habituados permanecem tranquilos dentro da câmara.Em camundongos habituados, os resultados do teste de esvaziamento gástrico devem mostrar uma diferença inferior a 10% na variabilidade intra-animais. Uma vez treinados e prontos para o teste de esvaziamento gástrico, os camundongos devem ser submetidos à privação alimentar no dia anterior ao experimento. Os camundongos são mantidos em jejum durante a noite em uma grade de fundo de malha metálica.Para prevenir a afasia, certifique-se de que tenham livre acesso à água potável. Camundongos diabéticos não devem ser mantidos em jejum por mais de 16 horas. A consistência é extremamente importante durante um experimento de MCN gástrico.Fatores como manipular os camundongos da mesma maneira, jejuar os camundongos no mesmo horário todos os dias, verificar os níveis de glicose e administrar insulina no mesmo horário a cada dia. Para o usuário, usar o mesmo perfume e o mesmo jaleco laboratorial todos os dias é extremamente importante, pois todos esses fatores alterarão os dados de MTN gástrica. Os materiais que utilizamos para o preparo da refeição de ovo são um ovo, ácido oleico, um béquer de vidro, um tubo tipo falcon e uma espátula com ponta curvada.Inicie pesando cinco gramas de gema de ovo em um tubo cônico de 50 mililitros. Em seguida, adicione 10 microlitros de ácido okin NOIC com uma concentração de dois microlitros por grama ao tubo cônico contendo a gema e misture vigorosamente com a espátula dentro do tubo. Por um minuto, a gema é então transferida para um béquer de vidro e aquecida em um bico de Bunsen até coagular e atingir uma consistência adequada.Para fazer bolinhas pequenas, isso geralmente leva cerca de 30 segundos. As bolinhas de gema de ovo devem pesar 0,2 gramas por camundongo. É importante manter a dose cumulativa constante em todos os camundongos.Nossa faixa para recuperação aceitável da dose cumulativa é de 55 a 100%. Comece montando as câmaras de esvaziamento gástrico. Utilize câmaras e tampas limpas que tenham sido secas ao ar. Além disso, todos os tubos que conectam a câmara ao analisador ou ao suprimento de ar de dióxido de carbono devem estar livres de umidade.A umidade pode interferir no sinal vermelho detectado pelo analisador. Conecte as câmaras aos tubos de entrada que fornecem fluxo de ar livre de hidrocarbonetos. É importante que esse ar seja sempre constante, pois qualquer variação na quantidade de dióxido de carbono poderia alterar o valor da linha de base.Em seguida, conecte os tubos de saída das câmaras ao aparelho, feche os tubos e ligue o fluxo de ar. Aplique uma quantidade muito pequena de vaselina na extremidade das tampas para que fechem e sejam seladas de forma fácil e segura. Esse selamento hermético é necessário para coletar todo o dióxido de carbono produzido pelos camundongos.Pese os camundongos utilizando um suporte pequeno para camundongos para reduzir os níveis de estresse. O peso corporal é determinado como uma medida de sua saúde continuamente adequada. Em seguida, coloque cada camundongo na câmara apropriada.É importante que o ar esteja fluindo para dentro das câmaras neste momento. Cada camundongo é implantado com um dispositivo de rastreamento. Os dados sobre o peso do camundongo, glicemia e tratamentos são monitorados por meio de um banco de dados de software que utiliza este número.Utilizamos um software que nos permite vincular automaticamente o número de identificação do camundongo diretamente aos dados armazenados. É claro que isso também pode ser feito manualmente. Para iniciar a medição, permita que os camundongos se aclimatizem às câmaras antes de ajustar os níveis de ar.Uma vez que os camundongos pareçam calmos, o que pode levar alguns minutos, ajuste a taxa de fluxo de ar para cada câmara de camundongo. Isso pode variar para cada camundongo. Normalmente, o fluxo de ar é ajustado no início do experimento para garantir que o dióxido de carbono exalado atinja níveis detectáveis pelo equipamento utilizado e para assegurar que o nível permaneça baixo o suficiente para garantir uma renovação adequada do ar.Utilizamos níveis iniciais de dióxido de carbono entre 1000 e 1500 partes por milhão; caso haja dificuldade com os ajustes, verifique vazamentos de ar. Em seguida, repita o processo para cada uma das câmaras e observe uma nova rodada de medições para verificar se os ajustes feitos no fluxo de ar corrigiram o nível de dióxido de carbono. É importante obter uma leitura de linha de base estável antes da alimentação dos camundongos.Quando isso for alcançado, forneça a refeição com ovo ao primeiro camundongo e registre o horário em que cada camundongo recebe seu alimento. Realizamos o procedimento por quatro horas para obter valores suficientes para ajustar a curva de enriquecimento com carbono 13 do dióxido de carbono para cada camundongo. Verifique os camundongos a cada 30 a 60 minutos para garantir que os níveis de dióxido de carbono ainda estejam seguros.Para os camundongos, nossa máquina mede as concentrações de dióxido de carbono 12, dióxido de carbono 13 e água a cada 25 segundos. Assim, 12 camundongos podem ser analisados simultaneamente com um intervalo de cinco minutos entre as leituras. Se a amostragem for feita manualmente ou com outro dispositivo, certifique-se de que suas leituras sejam obtidas em intervalos mínimos de cinco a dez minutos.Prepare caixas novas contendo alimento antes do fim do teste para que os camundongos possam começar a se alimentar imediatamente após a conclusão do teste. Este gráfico representa os pontos de dados de um camundongo com esvaziamento gástrico normal. Ele mostra uma fração de carbono 13 recuperada no ar exalado, expressa como uma porcentagem da dose administrada por hora, em função do tempo.Os pontos de dados são ajustados por uma curva com a seguinte equação. Por que a porcentagem do carbono 13 recuperado na respiração por hora e uma constante de regressão B e CA? A meia-vida é calculada inserindo os parâmetros dessa curva na função gama inversa, conforme estabelecido em um estudo anterior em nosso laboratório; o tempo normal de meia-esvaziamento gástrico para um camundongo NOD não diabético com idade entre nove e 15 semanas varia de 62 a 131 minutos, conforme representado pela caixa cinza.A curva azul é de um camundongo com esvaziamento gástrico acelerado, com um valor de T meio de 40 minutos, e a curva vermelha é de um camundongo com esvaziamento gástrico retardado, com um valor de T meio de 168 minutos. Em conclusão, este vídeo demonstra como medir o esvaziamento gástrico sólido por meio de um teste respiratório não invasivo. Em camundongos, mostramos como preparar os animais para o teste, o preparo da dieta e a coleta dos dados.Este método de mensuração do esvaziamento gástrico sólido com a administração do ácido 13 carbono OCT oak foi previamente relatado para humanos, e adaptamos o protocolo para uso em camundongos. Este protocolo nos fornece um método valioso para medir repetidamente o esvaziamento gástrico no mesmo camundongo, o que permite a investigação do esvaziamento gástrico para o estudo de doenças de longo prazo. Existem diversas aplicações futuras deste método.Por exemplo, a realização de testes com diferentes medicamentos para o tratamento da gastroparesia diabética.

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Research

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Medicine

Medicina

Este vídeo apresenta como realizar um teste oral de tolerância à glicose em um camundongo de laboratório.

Teste oral de tolerância à glicose (OGTT): medindo o metabolismo da glicose em camundongos

A medição in vivo das contrações do músculo liso ao longo do trato gastrointestinal de animais de laboratório continua sendo uma técnica poderosa, embora subutilizada. Strain gages flexíveis de elemento duplo não estão disponíveis comercialmente e requerem fabricação. Este protocolo descreve a construção de strain gages confiáveis e baratos para implantação aguda ou crônica em roedores.

Fabricação e Implantação de miniatura de elemento duplo Medidores de tensão para medição<em&gt; In Vivo</em&gt; Gastrointestinal Contrações em roedores.

A cirurgia bariátrica é a maneira mais eficiente de reduzir o peso corporal e as complicações metabólicas mortais (diabetes, obesidade e dislipidemia) frequentemente associadas à obesidade mórbida. Modelos de camundongos de cirurgia bariátrica representam um recurso único para decifrar os mecanismos moleculares por trás dos efeitos benéficos dessas cirurgias sobre diabetes, hipertensão e dislipidemia.

Técnicas de gastrectomia vertical e modificado Roux-en-Y bypass gástrico em ratos

O atual artigo descreve a geração e caracterização metabólica de ratos alimentados com dieta de alto teor de gordura como um modelo de obesidade e resistência à insulina induzida pela dieta. Possui ainda mais protocolos detalhados para executar o teste de tolerância à glicose oral e o teste de tolerância à insulina, monitoramento de alterações de todo o organismo de glicose metabolismo na vivo.

Estudo do metabolismo in vivo da glicose em camundongos alimentados com dieta de alto teor em gordura usando o teste oral de tolerância à glicose (OGTT) e o teste de tolerância à insulina (ITT)

A incidência da obesidade está aumentando e aumenta o risco de doenças pulmonares crônicas. Estabelecer os mecanismos subjacentes e estratégias preventivas, animal bem definido modelos são necessários. Aqui, nós fornecemos três métodos (teste de tolerância à glicose, pletismografia de corpo e fixação do pulmão) para estudar o efeito da obesidade sobre os resultados pulmonares em camundongos.

Teste de tolerância à glicose intraperitoneal, medição da função pulmonar e a fixação do pulmão para estudar o impacto da obesidade e metabolismo prejudicado em resultados pulmonares

O artigo atual descreve um protocolo detalhado para o jejum intermitente isocalístico 2:1 para proteger e tratar de encontro à obesidade e ao metabolismo danificado da glicose em ratos do selvagem-tipo e do ob/ob.

Avaliação dos efeitos metabólicos do jejum intermitente isocalórico 2:1 em camundongos

Este estudo descreve a medição direta da produção de glicose hepática em um modelo de rato com síndrome do ovário policístico usando um rastreador de glicose isotópico estável via veia da cauda em estados ricos em jejum e glicose em conjunto.

Avaliação da Produção de Glicose Hepática em um Modelo de Rato da Síndrome do Ovário Policístico

Este protocolo introduz dois métodos para aquisição de imagens em ultrassonografia gástrica. Além disso, são fornecidas dicas para interpretar essas informações para auxiliar na tomada de decisão médica.

Ultrassonografia gástrica em adultos: aquisição e interpretação de imagens

A bateria de testes (IMAP) para a realização de uma avaliação aprofundada das capacidades cognitivas auditivas e contribuindo para a capacidade de ouvir é descrito. É rápido para administrar, criança-amigável e livre de confunde linguística. Geração de estímulo e gerenciamento de protocolos são controlados através de uma plataforma de software (IHR-STAR) para garantir procedimentos replicáveis.

Making Sense of Listening: A bateria de testes IMAP

A amônia é um importante metabólito fisiológico relevante para várias doenças e estados de bem-estar. É também uma molécula difícil de medir na respiração, o que exige cuidados especiais para obter resultados precisos. Nem todos os fatores que influenciam a amônia são conhecidos, mas o progresso pode ser difícil sem levar em conta esses fatores.

Medição Amônia ar exalado Rápido e Preciso

Aprenda a medir o esvaziamento gástrico em camundongos diabéticos não obesos utilizando o teste de respiração com ácido octanóico marcado com carbono-13. Este método não invasivo permite medições repetidas ao longo do tempo.

Estudo do esvaziamento gástrico em ratos diabéticos não obesos utilizando a [

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