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General Laboratory Techniques

Uma introdução ao micropipetador

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An Introduction to the Micropipettor

1.4: Making Solutions in the Laboratory

1.6: Introduction to Serological Pipettes and Pipettors

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09:15 min

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April 30, 2023

Overview

O micropipettor é um instrumento de laboratório comum utilizado para a transferência de microvoluis de soluções líquidas. Os micropipettores vêm em uma variedade de tamanhos para o movimento preciso de volumes entre 0,5 e 5000 μl e cada instrumento requer uma das três pontas descartáveis de tamanho diferente. Os micropipettores trabalham deslocando o ar do eixo da pipeta, permitindo que o líquido seja atraído para o vácuo resultante. Seus usos incluem a transferência de suspensões celulares para uma variedade de ensaios baseados em células, o carregamento de amostras para diferentes técnicas analíticas e a interrupção mecanicamente de tecidos em suspensões de células únicas. Micropipettores são ferramentas de laboratório extremamente úteis que são fáceis de usar com um pouco de instrução e prática. Neste vídeo, o JoVE mostra ao usuário de primeira viagem todas as dicas, truques e ins e outs de usar um micropipettor no laboratório.

Procedure

O micropipetador é um importante instrumento usado para medir com precisão pequenos volumes de líquido. Esta ferramenta de pesquisa, que pode ser encontrada em inúmeros laboratórios de pesquisa em todo o mundo, vem em várias formas e tamanhos. No entanto, apesar da variação entre os micropipettores, todos eles trabalham de forma semelhante para medir com precisão as quantidades de microliteres de líquido. Micropipettores são usados com pontas descartáveis, que, como micropipettores, vêm em uma variedade de tamanhos.

Todos os micropipettores compartilham os mesmos componentes básicos para aspirar e distribuir líquidos. O êmbolo é encontrado na parte superior do pipettor e é usado para elaborar ou expelir líquido, dependendo da posição para a qual está deprimido ou liberado.

O mostrador de ajuste de volume é usado para alterar o volume de líquido a ser transferido.

O visor de leitura de volume é lido de cima para baixo. Dependendo do micropipetador usado, os números refletem diferentes ordens de magnitude na medição do volume. Aqui você pode ver uma medição para 370 microliters.

As pontas descartáveis são carregadas na parte inferior do micropipettor.

O botão de ejetar a ponta e o eixo de ejetar ponta trabalham juntos para ejetar pontas de pipeta quando precisam ser descartadas.

A família de micropipettores inclui vários membros de tamanhos variados que transferem uma gama precisa de volumes.

Aqui você pode ver a família fazendo fila de acordo com as faixas de volume que cada um pode transferir. Por exemplo, papa P-1000 entrega entre 200-1000 μl, enquanto o bebê do grupo, o P-2, transfere entre 0,2-2 μl.

Cada um dos membros da família é reconhecível por um número na parte superior do êmbolo, e por cor, o que deixa claro quem eles são e quanto volume eles podem transferir confortavelmente.

Ocasionalmente, outros parentes de micropipettores aparecerão para um experimento, como tio P5000, tia P100 e primo P10. Juntos, esta família estendida pode auxiliar na movimentação de líquido de 0,2-5000 μl em volume.

Para garantir ainda uma transferência precisa e precisa de líquido, diferentes tamanhos de pontas de pipetas, muitas vezes, mas nem sempre, são codificadas por cores para facilitar o reconhecimento e são usadas para diferentes tamanhos de pipettors. Com relação ao volume transferido, as pontas do micropipettor branco normalmente transferem entre 0,5-2,5 μl, as pontas amarelas são para 1-200 μl, e as pontas azuis de 200 a 1000 μl.

Ao usar um micropipetador, primeiro escolha o instrumento com a faixa apropriada para o volume que deseja transferir. A escolha correta do pipettor pode significar a diferença entre um experimento bem sucedido ou fracassado.

Para começar, ajuste o mostrador ao volume desejado. Para aumentar o volume de aspiração, gire o mostrador no sentido anti-horário, passando o volume desejado por uma curva de um terço e, em seguida, lentamente diminuindo para a marca final. Para diminuir o volume, gire o mostrador no sentido horário.

Tenha em mente que esses dígitos na leitura de volume têm diferentes ordens de magnitude dependendo do micropipetador. Por exemplo, à esquerda, vemos o P1000, lendo 370 μl. Há um zero no lugar de milhares, um 3 nas centenas de lugares, e um 7 no lugar das dezenas. À direita está o P200, exibindo 159 μl com um 1 nas centenas de lugares, um 5 no lugar das dezenas, e um 9 no local.

Uma vez definido o volume, selecione uma dica.

Agora, segure o micropipettor em uma posição vertical com a parte estreita do corpo na palma da mão e a saliência sobre o dedo indicador,

Usando pressão leve para deprimir o êmbolo aproximadamente a meio caminho da primeira parada, ou quando você começa a sentir mais resistência.

Esta ação desloca o ar da ponta da pipeta.

Mantendo o êmbolo deprimido, mergulhe a ponta entre 1-3 mm na amostra. Solte suavemente o êmbolo de volta para a posição de descanso, espere um segundo para que o líquido se mova para a ponta e, em seguida, remova a pipeta da amostra.

Quando o êmbolo é liberado de volta para a posição de descanso, o líquido é atraído para o vácuo criado pelo ar deslocado.

Inspecione a ponta para confirmar a quantidade desejada de líquido e que a ponta não contém bolhas de ar.

Ao transferir a amostra para o vaso desejado, segure o micropipetador em um ângulo de 10-45° contra a parede interna do recipiente receptor. Isso evitará que bolhas se formem na ponta. Para expulsar o líquido depresse levemente o êmbolo para a primeira parada sem problemas, para começar a distribuir o líquido e, em seguida, aplicando resistência mais forte, pressione o êmbolo até a segunda parada para “soprar” o último pedaço de líquido da ponta.

Retire a ponta completamente do vaso e, em seguida, solte o êmbolo de volta para a posição de descanso.

Agora use o botão ejetar para descartar cuidadosamente a ponta da pipeta no recipiente apropriado. Preste atenção no que você está fazendo, porque as pontas ejetadas podem agir como projéteis e podem potencialmente ferir seus colegas de laboratório.

Para manter os micropipettores funcionando bem e preservar o mecanismo de ajuste de volume interno, nunca gire o mostrador de volume acima ou abaixo da faixa específica do micropipettor. Você pode quebrar o instrumento.

Para evitar contaminação cruzada entre as amostras, altere a ponta após cada transferência de volume.

A consistência do operador é importante quando se trabalha com micropipetters. Uma pressão suave do êmbolo produzirá ótimos resultados experimentais. Por fim, lembre-se, para manter seus micropipettores em condições de alto desempenho, sempre armazene os instrumentos em uma posição vertical quando não estiverem em uso.

Agora que cobrimos a operação básica e os princípios do uso de micropipettores, vamos discutir algumas aplicações laboratoriais comuns para transferências de microvolume, bem como variações deste instrumento.

Micropipettores são frequentemente usados para transferir suspensões celulares para placas de cultura para uma variedade de experimentos.

Em conjunto com dicas especializadas, micropipetadores podem ser usados para carregar cuidadosamente amostras para técnicas analíticas, como eletroforese de gel de DNA.

Micropipettores também podem ser usados para quebrar tecido mecanicamente, a fim de obter suspensões de células únicas.

Variantes do micropipettor, que operam com base no deslocamento do ar, também podem ser encontradas no laboratório.

As pipetas repetidos permitem a pipetação serial de volumes menores após uma aspiração inicial de um volume maior de solução. As pipetas são realmente úteis para transferir o mesmo volume de amostra para um grande número de recipientes.

As pipetas multicanais são geralmente usadas para transferir volumes na faixa de volume de 20-200 μl , e são úteis para carregar linhas inteiras de 96 placas de poço.

Você acabou de assistir a introdução do JoVE aos micropipettores.

Neste vídeo revisamos: o que é um micropipettor e como ele funciona, como aspirar e dispensar uma amostra de volume líquido, algumas precauções de segurança e diferentes aplicações de seus micropipettores. Obrigado por assistir e lembre-se escolher a pipeta certa para suas experiências.

Transcript

The micropipettor is an important instrument used to precisely measure small volumes of liquid. This research tool, which can be found in numerous research laboratories across the globe, comes in several shapes and sizes. However, despite the variation amongst micropipettors, all of them work in a similar way to accurately measure microliter quantities of liquid. Micropipettors are used with disposable tips, that, like micropipettors, come in a range of sizes.

All micropipettors share the same basic components for aspirating and dispensing liquids. The plunger is found at the top of the pipettor and is used for drawing up or expelling liquid depending on the position to which it is depressed or released.

The volume adjustment dial is used to change to volume of liquid to be transferred.

The volume readout display is read from top to bottom. Depending on the micropipettor used the numbers reflect different orders of magnitude in your volume measurement. Here you can see a measurement for 370 microliters.

Disposable tips are loaded onto the bottom of the micropipettor.

The tip eject button and tip eject shaft work together to eject pipette tips when they need to be discarded.

The micropipettor family includes several members of varying sizes that transfer a precise range of volumes.

Here you can see the family lining up according to the volume ranges that they each can transfer. For example, Papa P-1000 delivers between 200-1000 µl, while the baby of the bunch, the P-2, transfers between 0.2-2 µl.

Each of the family members is recognizable by a number at the top of the plunger, and by color, which makes clear who they are and how much volume they can comfortably transfer.

Occasionally, other micropipettor relatives will show up for an experiment, like Uncle P5000, Auntie P100, and Cousin P10. Together, this extended family can assist in moving liquid from 0.2-5000 µl in volume.

To further ensure an accurate and precise transfer of liquid, different sizes of pipettes tips, often, but not always, are color-coded for ease of recognition and are used for different sizes of pipettors. With respect to volume transferred, white micropipettor tips typically transfer between 0.5-2.5 μl, yellow tips are for 1-200 µl, and blue tips from 200 to 1000 μl.

When using a micropipettor, first choose the instrument with the appropriate range for the volume you wish to transfer. Correct choice of pipettor could mean the difference between a successful or failed experiment.

To begin, adjust the dial to the desired volume. To increase the aspiration volume, turn the dial in a counterclockwise direction, passing the desired volume by a one-third turn, and then slowly decreasing to the final mark. To decrease the volume, turn the dial clockwise.

Keep in mind that these digits in the volume readout have different orders of magnitude depending on the micropipettor. For example, on the left, we see the P1000, reading 370 µl. There’s a zero in the thousands place, a 3 in the hundreds place, and a 7 in the tens place. On the right is the P200, displaying 159 µl with a 1 in the hundreds place, a 5 in the tens place, and a 9 in the ones place.

Once volume is set, select a tip.

Now, hold the micropipettor in an upright position with the narrow part of the body in the palm of your hand and the overhang over your index finger,

Using light pressure to depress the plunger approximately halfway to the first stop, or when you start to feel more resistance.

This action displaces air from the pipette tip.

Keeping the plunger depressed, immerse the tip between 1-3 mm into the sample. Smoothly release the plunger back into the rest position, wait one second for the liquid to move into the tip, and then remove the pipette from the sample.

When the plunger is released back into the rest position, the liquid is drawn into the vacuum created by the displaced air.

Inspect the tip to confirm the desired amount of liquid was drawn up and that the tip contains no air bubbles.

When transferring the sample into the desired vessel, hold the micropipettor at a 10-45° angle against the inside wall of the receiving vessel. This will prevent bubbles from forming at the tip. To expel the liquid depress the plunger lightly to the 1st stop smoothly, to begin dispensing the liquid, and then, applying stronger resistance, depress the plunger all the way to the second stop to “blow out” the last bit of liquid from the tip.

Remove the tip completely from the vessel, and then release the plunger back to the rest position.

Now use the eject button to carefully discard the pipette tip into the appropriate receptacle. Pay attention to what you are doing, because ejected tips can act as projectiles and can potentially injure your fellow lab mates.

To keep micropipettors working well and preserve the internal volume adjustment mechanism, never turn the volume dial above or below the specific range of the micropipettor. You may break the instrument.

To avoid cross contamination among samples, change the tip after each volume transfer.

Operator consistency is important when working with micropipetters. A smooth plunger pressure will yield optimal experimental results. Finally, remember, to keep your micropipettors in top-performing condition, always store the instruments in an upright position when not they are not in use.

Now that we have covered the basic operation and principles of using micropipettors, let’s discuss some common laboratory applications for microvolume transfers as well as variations of this instrument.

Micropipettors are frequently used for transferring cell suspensions to culture plates for a variety of experiments.

In conjunction with specialized tips, micropipettors can be used to carefully load samples for analytical techniques, like DNA gel electrophoresis.

Micropipettors can also be used to mechanichally break up tissue, in order to obtain single cell suspensions.

Variants of the micropipettor, which operate based on air displacement, can also be found in the lab.

Repeater pipettes allow serial pipetting of smaller volumes after an initial aspiration of a larger volume of solution. The pipettes are really useful for transferring the same volume of sample to a large number of receptacles.

Multichannel pipettes are usually used to transfer volumes in the 20-200 μl volume range , and are helpful for loading entire rows of 96 well plates.

You’ve just watched JoVE introduction to micropipettors.

In this video we reviewed: what a micropipettor is and how it works, how to aspirate and dispense a liquid volume sample, some safety precautions, and different applications of your micropipettors. Thanks for watching and remember pick the right pipette for your experiments.

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