A plataforma de triagem baseada luciferase diversificadas para interrogar associados ao câncer transdução de sinal em células cultivadas

O objetivo geral do protocolo a seguir é permitir a interrogação em escala genômica da função gênica, monitorando simultaneamente várias leituras celulares. Nesta demonstração, os repórteres baseados em Firefly RAN e Cipro Dina Luciferase são usados para monitorar a atividade da via P 53 WINT e KRAS, respectivamente. Esses três repórteres são seccionados com irna visando um gene de interesse em HCT one 16 células, uma linha celular de câncer colorretal.

Posteriormente, as atividades de vaga-lume e luciferase de baunilha são medidas nos lisados celulares enquanto a atividade da cipro DEA luciferase. Uma enzima secretada é medida na cultura. São obtidos resultados médios que mostram a reprodutibilidade do sistema de ensaio, bem como a capacidade de revelar ações compartilhadas e únicas de genes dentro dessas três vias relevantes para o câncer.