5/6th Nephrectomy em combinação com uma dieta alta de sal e Óxido Nítrico Sintase inibição para induzir o Doença Renal Crônica no Rato Lewis

O objetivo geral deste procedimento é induzir doença renal crônica na rata Lewis. Isso é realizado primeiramente administrando o bloqueador do óxido nítrico, NG Nitro, L arginina, ou LNNA por um período de quatro semanas. Em seguida, remove-se completamente o rim direito.

Então, uma semana depois, dois terços do rim esquerdo são removidos. Por fim, enquanto são tratados com LNNA e uma dieta rica em sal, acompanha-se ao longo do tempo o desenvolvimento de insuficiência renal na rata. Em última análise, podem-se obter resultados que demonstram doença renal crônica estabelecida por meio da coleta de urina para a medição de proteína e hematócrito e da IAU no sangue, plasma e/ou urina e da pressão arterial sistólica.

A função renal é determinada, em última análise, pela inulina e pela taxa de ácido para-aminohipúrico, ou depuração de PAH. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área da nefrologia, como uma melhor compreensão da patologia da DRC, e pode ser utilizado para estudar o efeito de intervenções terapêuticas. Quatro semanas antes do procedimento inicial de nefrectomia, iniciar a administração de 20 miligramas por litro do inibidor da óxido nítrico sintase LNNA na água de beber dos ratos.

De acordo com esta linha do tempo. Antes de iniciar o procedimento, use álcool 70% para desinfetar a mesa. Para se preparar para a cirurgia, comece esterilizando os seguintes instrumentos: uma pinça para tecidos estudantil com uma ou duas pontas, de 12 centímetros, uma pinça padrão estudantil, duas pinças Simkin, uma tesoura Mayo, uma tesoura iris estudantil e um porta-agulhas Olson Heger com tesoura.

Em seguida, tenha o seguinte material pronto. Uma mesa cirúrgica com almofada térmica e lâmpada de oxigênio e isoflurano. Uma máquina de barbear, instrumentos cirúrgicos estéreis, gaze estéril 5x5 e 10x10, álcool 70%, solução de cloreto de sódio 0,9%, uma seringa de um mililitro, agulhas de calibre 25, espumas de gel, pontos de sutura Vicryl 4,0 e 5,0, buprenorfina 0,03 miligramas por quilograma e uma gaiola limpa para os ratos após a cirurgia.

Após induzir a anestesia em uma câmara de indução com 4% de iso-fluorano e administrar analgesia prévia, se necessário, transfira a rata para o coxim aquecido, posicionando-a em decúbito lateral esquerdo sobre a mesa, e ventile-a utilizando um cone nasal com uma mistura de 2% de isofluorano, fluorano e um litro de oxigênio. Depile a região do flanco da rata e use álcool para desinfetar o local cirúrgico.

Como a cirurgia ocorre em um ambiente semiesteril, desinfetamos a pele vermelha apenas com álcool para uma preparação mais estéril. Pode-se usar esfregaço com Betadine, colocar um gorro e uma máscara, depois lavar e desinfetar as mãos antes de colocar luvas cirúrgicas estéreis. Em seguida, utilizando pinças anatômicas e tesoura romba, faça uma incisão de um a um centímetro e meio paralela às costelas.

Em seguida, com dissecação romba dos músculos das costas, exponha o rim direito. Assim que o polo inferior do rim ficar visível, use a pinça romba pequena para segurar cuidadosamente o tecido adiposo perirrenal. Em seguida, use a pinça para puxar suavemente o tecido adiposo perirrenal, tomando cuidado para não perturbar a glândula adrenal e exteriorizar o rim, separando-o da glândula adrenal.

Posicione uma pinça no local medial no tecido adiposo e mova suavemente o tecido para cima, entre a glândula adrenal e o rim. Coloque delicadamente o rim sobre gaze e remova todo o tecido adiposo e conjuntivo ao redor. Identifique a artéria e a veia renais e solte-as levemente.

Coloque uma ligadura com um nó simples ao redor dos vasos para impedir que ela escorregue. Após o corte, mova cuidadosamente o nó solto ao longo dos vasos em direção à aorta, aproximadamente 0,5 centímetros, para criar espaço entre o rim e o nó. Em seguida, faça dois nós duplos sem cortar as pontas da ligadura.

Se a profusão for interrompida com sucesso, a cor do rim ficará imediatamente marrom. Em seguida, corte os vasos renais próximos ao rim e remova-o. Puxe suavemente as extremidades longas da ligadura para verificar sangramento dos vasos renais.

A ligadura deve permanecer no lugar no vaso. Corte as extremidades longas da ligadura. Os vasos renais remanescentes irão retrair para dentro da cavidade abdominal.

Utilize imediatamente suturas contínuas de Vicryl 5.0 para fechar o músculo esquelético na extremidade posterior. Administre intramuscularmente 0,03 miligramas por quilograma de buprenorfina. Em seguida, utilize suturas intradérmicas de Vicryl 4.0 para fechar a pele.

Em seguida, seque o rim ressecado e pese-o. Deixe o rato se recuperar em uma gaiola limpa e individual, colocada pela metade sobre uma placa aquecida com acesso a alimento e água, e acompanhe-o conforme o protocolo descrito no texto. Sete dias depois.

Em preparação para uma segunda cirurgia, calcule o peso de aproximadamente dois terços do rim direito e prepare pequenos pedaços de espuma de gel. Repita o procedimento mostrado para exteriorizar o rim esquerdo e destacar a glândula adrenal dele. Posicione uma tesoura afiada ao redor do polo superior do rim esquerdo e resseque o polo superior em um único movimento, cobrindo imediatamente com um pedaço de espuma de gel e exercendo pressão suave com gaze estéril.

Em seguida, resseque o polo inferior do rim e cubra-o de maneira semelhante para evitar coagulação na pele. Levante o rim e use gaze estéril para manter uma leve pressão sobre ambas as almofadas de gelatina esponjosa até que o sangramento cesse. Se o sangramento persistir em outra almofada de espuma, coloque o rim remanescente com as almofadas de gelatina esponjosa aderidas no interior do abdômen e feche o músculo e a pele.

Siga o mesmo procedimento descrito anteriormente para monitorar a recuperação e acomodar a rata. Após nefrectomia subtotal, aproximadamente um sexto da massa renal total permanece. Esta figura mostra a porcentagem calculada da massa renal removida do rim direito, com média e desvio padrão.

Em nossos experimentos anteriores na semana seguinte, ocorre hipertrofia do rim esquerdo após nefrectomia unilateral, resultando em uma leve subestimativa da quantidade ideal de tecido renal que precisa ser removido, a qual foi baseada no peso calculado do rim direito. No entanto, como não é possível determinar o peso do rim esquerdo, esta é a maneira mais precisa de remover cerca de cinco sextos da massa renal. A progressão da insuficiência renal é acompanhada pela coleta de urina para medição de proteína e creatinina, de sangue para ureia plasmática e creatinina e da pressão arterial sistólica.

A depuração de creatinina pode ser calculada, mas tende a subestimar a diminuição da TFG devido à extensa secreção tubular de creatinina em ratos, destacando a importância do método padrão-ouro para determinar a função renal por meio da depuração de inulina e PAH. Conners et al. descreveram completamente o procedimento. A depuração de inulina e PAH é calculada a partir de suas concentrações na amostra de urina, da taxa de fluxo urinário e de suas concentrações plasmáticas. Ao longo do tempo, ratos com doença renal crônica ou DRC desenvolvem hipertensão, anemia urêmica, proteinúria, diminuição significativa da taxa de filtração glomerular e do fluxo plasmático renal efetivo.

Após seis semanas, a DRC estabelecida já se desenvolveu, o que constitui um ponto temporal adequado para testar intervenções de resgate; nesse período, observa-se maior duração, forte progressão da hipertensão e proteinúria, enquanto o hematócrito e a função renal apresentam leve deterioração. Outros sintomas não enfocados em nossos experimentos incluem distúrbios do metabolismo de cálcio, fosfato e lipídios, além de muitos outros, dependendo da linhagem de ratos. O desenvolvimento da DRC pode variar acentuadamente com a utilização da linhagem Lewis de ratos empregada aqui.

Uma dieta rica em sal e um bloqueador do óxido nítrico foram adicionados para induzir hipertensão e disfunção endotelial. Um pequeno passo. Esta técnica pode ser realizada em aproximadamente 50 a 20 minutos, se for executada corretamente.

Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como induzir doença renal crônica em loose reds realizando uma nefrectomia subcapsular escalonada.