1.15: Regular a temperatura no laboratório: aplicando calor

Existem muitas maneiras de regular a temperatura no laboratório. Às vezes, os reagentes precisam ser aquecidos, as culturas de células precisam ser mantidas em temperaturas específicas para um crescimento ideal e a temperatura corporal do animal precisa ser regulada durante ou após procedimentos cirúrgicos. Este vídeo examinará mais de perto algumas das maneiras e razões pelas quais um cientista pode querer aquecer as coisas e as temperaturas específicas usadas para aquecer amostras e reagentes.

Primeiro, é importante notar que, em procedimentos laboratoriais comuns, comumente falamos sobre temperatura em medições de graus Celsius ou centígrados. Como as outras unidades métricas de medida usadas na ciência, o grau Celsius é um dos padrões do Sistema Internacional de Unidades para medir a temperatura.

O termômetro, como você provavelmente já sabe, é o instrumento usado para medir a temperatura.

Para obter a leitura de temperatura mais precisa de um líquido que você está aquecendo ou resfriando, mergulhe o termômetro pelo menos 10-15 cm, ou cerca de 4-6 polegadas abaixo da superfície. Em seguida, prenda cuidadosamente ou prenda o termômetro no lugar, cuidando para que o instrumento esteja pelo menos 5 cm, ou cerca de 2 polegadas, acima do fundo do recipiente e pelo menos uma largura de termômetro da lateral do recipiente.

Se você estiver mexendo o líquido, certifique-se de que o termômetro não seja batido pela barra de agitação, caso contrário, você pode ter uma bagunça perigosa em suas mãos.

Leia o indicador de temperatura do líquido ao nível dos olhos. Ao ler um termômetro, tome cuidado para não tocá-lo ao longo do eixo. O calor do seu corpo pode afetar a precisão da medição.

A seguir, vamos revisar algumas temperaturas comuns nas quais muitos experimentos ocorrem.

Dependendo do tipo de trabalho realizado em seu laboratório e do tipo de equipamento alojado em seu laboratório, a temperatura ambiente da sala normalmente estará entre cerca de 20-25 °C. Pode-se geralmente presumir que um experimento deve ser realizado à temperatura ambiente se nenhum requisito de temperatura for indicado de outra forma. A temperatura ambiente é frequentemente abreviada em protocolos como, você adivinhou: RT.

Quando você é confrontado com um ?in vitro? procedimento, o experimento geralmente tem que ser conduzido a 37?C. Processos que são realizados ?in vitro? envolvem tecidos, células ou extratos e tentam imitar as condições que existem dentro de um organismo. Experimentos in vivo, por outro lado, são realizados com o organismo intacto e, como os mamíferos têm uma temperatura corporal de 37 ? C, ?in vitro? Experimentos de cultura de células são normalmente realizados a essa temperatura.

Em temperaturas acima de 56? C, as proteínas se desdobram, um processo chamado desnaturação. Isso pode ser útil por vários motivos, incluindo a abertura alterando a forma de uma proteína para facilitar a identificação por um anticorpo de detecção.

Água e algumas soluções aquosas ou aquosas fervem a aproximadamente 100 °C. Também pode ser uma boa temperatura para dissolver reagentes que são difíceis de colocar em solução à temperatura ambiente.

Freqüentemente, um protocolo experimental indicará que certas etapas precisam ocorrer em uma temperatura específica.

Experimentos executados na bancada são realizados em cerca de 20-25? C, ou temperatura ambiente.

À temperatura ambiente, a maioria dos reagentes e culturas de células são estáveis, embora alguns reagentes precisem ser protegidos da luz, alguns experimentos precisam ser realizados em um capuz para manter a esterilidade e alguns ensaios precisam ser realizados dentro de uma câmara úmida para evitar que os tecidos ou reagentes experimentais sequem.

Quando seu protocolo diz, para "descongelar em células ou um reagente específico", use um banho-maria definido para 37 ? C para aquecimento lento e uniforme. A menos que seu protocolo indique mais aquecimento, certifique-se de remover sua amostra do banho-maria assim que o último fragmento de gelo derreter.

Se o protocolo indicar que ?mídia pré-aquecida? ou outros reagentes pré-aquecidos devem ser usados, um 37 ? C banho-maria também é útil para manter as soluções em um ambiente constante, quente ? mas não quente - temperatura.

Para manter suas soluções livres de contaminação ou diluição da água circundante, use um rack flutuante de espuma para descongelar alíquotas congeladas de células ou para aquecer volumes de microlitros de solução. Se preferir um suporte de tubo mais seguro, um rack de metal também pode ser usado para essa finalidade.

Para volumes maiores de líquido, racks de plástico ou grampos de metal podem ser usados para manter as amostras na vertical no banho-maria.

Quando você é instruído a incubar culturas de células de mamíferos, geralmente significa colocar as células em um 37 ? C, com uma atmosfera de 5% de dióxido de carbono e uma bandeja de água para manter que mantém a incubadora com cerca de 95% de umidade.

As células bacterianas também são cultivadas às vezes aos 37? C, em uma incubadora, uma sala quente. Uma incubadora de agitação pode ser usada quando você deseja expandir rapidamente o número de culturas de células bacterianas, diminuindo o tempo de cultura Ao agitar as culturas líquidas, você garante que as bactérias recebam nutrientes suficientes porque não sedimentam no fundo do tubo.

Para aquecimento ou ebulição muito rápidos, tradicionalmente são usadas placas quentes. Agora que as microondas são comumente encontradas no laboratório, elas também podem ser usadas para ferver rapidamente soluções aquosas.

Agora vamos dar uma olhada em algumas das razões pelas quais você pode querer aquecer as coisas no laboratório.

A fixação por calor é uma maneira simples e rápida de fixar certas amostras biológicas, como células bacterianas ou biomacromoléculas, em uma lâmina de vidro antes da coloração. Aqui você pode ver algumas propagações cromossômicas que foram possíveis por meio da fixação por calor.

A agitação aquecida da solução líquida na qual você está tentando dissolver um reagente sólido pode ajudar a acelerar o processo, como o ágar em pó que está sendo dissolvido aqui.

Muitos experimentos com células vivas requerem pelo menos um período de incubação. A incubadora Incucyte permite imagens em tempo real do crescimento celular, sem a perturbação das células que pode ocorrer quando os recipientes de cultura são removidos da incubadora.

A imagem de células vivas também pode ser realizada com microscópios de mesa. Aqui, as células são mantidas em uma incubadora de imagem enquanto sua atividade antes e em resposta à adição de um estímulo experimental está sendo visualizada e registrada para análise posterior.

Você acabou de assistir a introdução de JoVE à regulação das temperaturas de laboratório aos 23 anos? C e acima.

Neste vídeo, analisamos: alguns dos equipamentos de laboratório mais comuns para aquecimento de células, animais e soluções, como decidir qual equipamento usar para aquecer células ou soluções e algumas razões diferentes pelas quais a temperatura pode precisar ser regulada durante um experimento. Obrigado por assistir e lembre-se de manusear seu termômetro com cuidado!