Name: MR Imagem Molecular do cancro da próstata com um pequeno Molecular CLT1 Peptide alvejado agente de contraste (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 54 s
Description: Aprenda imagem molecular por ressonância magnética de câncer de próstata em camundongos usando um agente de contraste direcionado por peptídeo CLT1. Este método permite detectar tumores prostáticos com alta especificidade e resolução.

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Este trabalho é apoiado em parte pela American Heart Association GRA Spring 09 Postdoctoral Clube (09POST2250268) eo NIH R01 CA097465. Nós apreciamos muito Dr. Wen Li e Dr. Vikas Gulani para teste protocolo MRI e configuração, ea Sra. Yvonne Parker por sua assistência na implantação do tumor.

Protocolo adaptado de um estudo prévio 11. 1. Conjugação de Gd-DOTA para CLT1 Peptide <ol><li> Usando a síntese de péptidos em fase sólida padrão, sintetizar CLT1 péptido (CGLIIQKNEC) a partir de aminoácidos protegidos com Fmoc numa resina de cloreto de 2-clorotritilo (1,0 mmol). </li><li> Após a adição de aminoácido final, ciclizar o péptido linear em-resina com tálio (III), trifluoroacetato (1,09 g, 2,0 mmol, 2 equivalentes) em DMF (20 ml) a 0 ° C durante 2 horas. </li><li> Em seguida, o conjugado de PEG e lisina sequencialmente para o N-terminal do péptido CLT1 (1,0 mmol) de resina por meio de reacção sequencial com Fmoc-NH-PEG-COOH (3,0 mmol), Fmoc-Lys (Fmoc)-OH (3,0 mmol), e uma segunda porção de Fmoc-Lys (Fmoc)-OH (6 mmol). </li><li> Retirar Fmoc com piperidina. Adicionar DOTA-tris (t-Bu) (4,58 g, 8,0 mmol, 2 equivalentes para cada grupo amino) para reagir com as aminas livres de quatro dendrímero lisina sobre a resina durante 2 horas. </li><li> Finalmente, clivar e desproteger o produtoa partir da resina por tratamento com um cocktail de ácido trifluoroacético, água e triisobutylsilane (TIS) (20 ml, 95/2.5/2.5) durante 8 horas à temperatura ambiente. Remover a resina por filtração, seguida de lavagem com ácido trifluoroacético (TFA). Adicionar os filtrados combinados gota a gota a éter etílico frio (200 ml), centrífuga, e lava-se com éter etílico 4x. Seca-se sob vácuo para dar um sólido incolor (1,99 g, 61% de rendimento). </li><li> Purifica-se o produto em bruto por HPLC preparativa utilizando um gradiente de 0-40% de solvente B (0,1% TFA em acetonitrilo) no solvente A (0,1% de solução aquosa de TFA) durante 20 minutos e 40-90% de solvente B em solvente A durante 10 min . </li><li> Dissolver CLT1-dl-(DOTA) 4 (250 mg, 0,077 mmol) em água Dl (15 ml) e ajustar o pH a 6 usando NaOH 1M. Adicionar Gd (OAc) 3 0,4 H 2 O (472 mg, 0,462 mmol, 1,5 equivalentes a monoamida DOTA), em porções, à solução, enquanto se mantinha o pH a 6 usando NaOH 1M. Agita-se a solução de reacção à temperatura ambiente durante 48 horas. </li><li> Complexo do Gd residual (III) com ethylenediaminetetraacetic ácido acético (EDTA) (90 mg, 0,31 mmol), e purifica-se o produto bruto com uma coluna de exclusão de tamanho para obter o produto final CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 (169 mg, 57%). </li></ol> 2. Caracterização de agentes de contraste <ol><li> Medir o teor de Gd (III), com a espectroscopia de emissão de plasma indutivamente acoplado-óptico. </li><li> Adquirir laser de dessorção / ionização de tempo-de-voo (MALDI-TOF) os espectros de massa assistida por matriz no modo linear com o ácido 2,5-di-hidroxibenzóico (2,5-DHB) como uma matriz. </li><li> Medida do tempo de relaxação da solução aquosa dos agentes de contraste de CLT1-dl-(Gd-DOTA) e 4 um agente de controlo de nontargeted sCLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 com diferentes concentrações, a 60 MHz (1,5 T) com um relaxometer a 37 ° C. Use uma seqüência de pulso inversão-recuperação para medir T 1 e uma seqüência de Carr-Purcell-Meiboom-Gill com 500 ecos para medir T 2. Calcule T 1 e T 2 relaxividades of thagentes e das encostas das parcelas de 1 / T 1 e 1 / T 2 versus as concentrações de D&#39;us. </li></ol> 3. Cultura Celular e Desenvolvimento de Modelo Animal com Ortotópico PC3 próstata Tumor <ol><li> Cultura PC3 células de cancro da próstata com a expressão constitutiva da proteína de fluorescência verde (GFP) em meio RPMI suplementado com 5% de soro bovino fetal e penicilina / estreptomicina / fungizona, colheita por tripsinização e ressuspender a densidade de 2,5 x 10 4 células / ul de PBS. </li><li> Manter NIH ratos pelados atímicos machos (4-5 semanas de idade) no Centro de atímicos animal Core, Case Western Reserve University (CWRU) de acordo com um protocolo de animais aprovado pelo Comitê Animal Care e Use Institucional CWRU. </li><li> As superfícies cirúrgicos foram pulverizadas com uma solução de clorexidina a 2% e, em seguida, coberto com cortinas absorventes. Luvas cirúrgicas estéreis foram usados ​​durante o procedimento. Antes da cirurgia animal, ip injetar Avertin (250 mg / kg) para anesthetizenviar um e ratos. Alternativamente, a cetamina / xilazina / acepromazina pode ser utilizado numa concentração de 50/5/1 mg / kg. Pomada oftálmica foi aplicada ao rato para manter a humidade adequada durante a anestesia. </li><li> Comece a cirurgia por corte de uma pequena incisão através da pele e do peritoneu ao longo da linha média inferior a um comprimento de cerca de 1 cm, usando um bisturi estéril. A cortina cirúrgica estéril foi coberto ao redor do local da incisão durante a cirurgia de sobrevivência. </li><li> Suavemente exteriorizar e estabilizar os lóbulos da próstata dorsal para expor a próstata. Injectar a suspensão de células PC3-GFP em PBS (20 mL) na próstata com uma agulha de calibre 30. Finalmente fechar a incisão com ferida Autoclip 12. </li><li> Para o monitoramento pós-procedimento, monitorar os animais duas vezes por dia durante uma semana. Sinais de doença incluem a falta de alimentação, urina escura coleta em torno da uretra, e marcha instável que pode indicar infecção ou obstrução da bexiga nos grampos. </li><li> Após 10 dias, remover o tele grampos usando um removedor de grampos. Monitorizar os animais diariamente para avaliar o tamanho do tumor e qualquer evidência de dor, tais como a perda de peso, os desvios de comportamento, e defeitos de motor. Eutanásia dos animais que apresentaram um tamanho tumoral superior ao limite permitido eticamente ou evidência de dor durante o crescimento do tumor. </li></ol> 4. Confirmação de Tumor Encadernação Especificidade dos Peptídeos com imagens de fluorescência e Histologia <ol><li> Após a inoculação de células tumorais, permitir que cerca de 4 semanas de crescimento do tumor, antes de iniciar a geração de imagens. Antes da injeção das sondas de peptídeos, adquirir imagens de fluorescência de GFP com camundongos vivos em um gerador de imagens de fluorescência para verificar a presença de tumor. </li><li> Iv injectar Texas Red péptidos marcados para a ratinhos portadores do tumor a uma dose de 10 nmol / rato. </li><li> Sacrificar os ratos 2 horas mais tarde por deslocamento cervical, recolher o tumor e órgãos principais, e imediatamente imagem em um gerador de imagens de fluorescência. Use filtros de luz verde para GFP (excitação: 444-490 nm; emissão: 515 nm filtro passa muito tempo; configurações de aquisição: 500-720 em 10 passos nm) e filtros de luz vermelha para o Texas Red (excitação: 576-621 nm; emissão: 635 nm filtro passa muito tempo; aquisição configurações: 630-800 em 10 passos Nm). Tempo de exposição de 10 ms para GFP e 150 ms para vermelho do Texas. </li><li> Imediatamente após a medição da fluorescência do tecido todo, coletar tecidos tumorais, fixar com formalina e criocorte em fatias 5 mícrons. </li><li> Após lavagem com PBS, monte com uma gota de meio de montagem contendo 4 &#39;,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI), imagem imediatamente em um microscópio de varredura a laser confocal. </li></ol> 5. Imagem por Ressonância Magnética (MRI) <ol><li> Cerca de 4 semanas após a inoculação de células tumorais, permitem que os tumores cresçam até 0,3-0,6 cm de diâmetro. Use um scanner de ressonância magnética 7 T com um rádio de freqüência de volume (RF) bobina para estudo de ressonância magnética. </li><li> Anestesiar o rato com uma mistura de isoflurano em oxigênio 2% em uma câmara de indução isoflurano. Ophpomada thalmic foi aplicada ao rato para manter a humidade adequada durante a anestesia. </li><li> Inserir uma agulha de calibre 30 em um tubo de 1,0 m de comprimento cheia com solução salina heparinizada. Colocar o cateter de auto-feito na veia da cauda do rato. </li><li> Posicione o mouse para o ímã e manter sob anestesia inalatória com isoflurano a 1,5% em oxigênio através de um cone do nariz. </li><li> Coloque um sensor respiratório conectado a um sistema de monitoramento no abdômen para monitorar a freqüência ea profundidade da respiração. Manter a temperatura do corpo a 37 ° C por um sopro de ar quente para o íman através de um sistema de controlo de realimentação. </li><li> Comece com imagens de cortes sagital usando uma seqüência de localizações para identificar a localização do tumor (TR / TE = 200/3.7 ms, FOV = 3,0 cm, espessura de corte = 2,2 mm, número fatia = 16, média = 2, o ângulo de inclinação = 45 °, matriz = 128 x 128). </li><li> Use um gradiente seqüência supressão de gordura 2D T1-weighted para adquirir imagens axiais em 2D para CE-MRI (TR / TE = 151.2/1.9 ms, FOV = 3,0 centímetros x 3,0 cm, spiolhos espessura = 1,2 mm número fatia = 12, média = 1, o ângulo de inclinação = 80 °, matriz = 128 x 128). </li><li> Depois de pré-injecção de aquisição de imagens MR de linha de base, começam a injectar o agente alvo ou agente de controlo a uma dose de 0,03 mmol de Gd / kg, através de lavagem com 200 mL de solução salina. </li><li> Continuar a aquisição de imagens de ressonância magnética-CE em diferentes pontos de tempo de até 30 min. </li></ol> 6. Processamento de Imagem e Análise <ol><li> Use o software de imagens para análise de imagens. </li><li> Desenhe as regiões de interesse (ROI) em todo o tumor e os rins no plano de imagem bidimensional e medir a intensidade média do sinal. </li><li> Para quantificar os dados CE-MRI, medir tumor ou realce de contraste de rim (ΔSNR) por cálculo do aumento da pós-contraste SNR sobre pré-contraste SNR usando a seguinte equação: ΔSNR = (S t / σ t) - (S 0 / σ 0), em que R 0 e S t denotar o sinal no tumou ou os rins, antes e depois de contraste, e σ 0 e σ t são o desvio padrão do ruído de medida a partir do fundo do ar antes e depois de contraste. </li><li> Calcule os valores de p usando bicaudal do teste t de Student, assumindo significância estatística de p &lt;0,05. </li></ol>

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<li>Burden-Gulley, S. M., Gates, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+molecular+diagnostic+of+glioblastomas%3A+detection+of+an+extracellular+fragment+of+protein+tyrosine+phosphatase+mu%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">A novel molecular diagnostic of glioblastomas: detection of an extracellular fragment of protein tyrosine phosphatase mu.</a> Neoplasia. 12, 305-316 (2010).</li>
<li>McBride, J. 	D., Birgit, H., Leatherbarrow, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resin-coupled+cyclic+peptides+as+proteinase+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+and+Peptide%22%5BJournal%5D)">Resin-coupled cyclic peptides as proteinase inhibitors.</a> Protein and Peptide. 3 (3), 193-198 (1996).</li>
<li>Cline, D. J., Thorpe, C., Schneider, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((General+method+for+facile+intramolecular+disulfide+formation+in+synthetic+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">General method for facile intramolecular disulfide formation in synthetic peptides.</a> Anal. Biochem. 335 (1), 168-170 (2004).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Etapas críticas Seleção de Biomarcador adequada e Segmentação pequeno peptídeo Para desenvolver com sucesso um agente de contraste com o tamanho pequeno alvo, dois pontos principais devem ser consideradas. Em primeiro lugar, é importante seleccionar os biomarcadores moleculares adequados, que são abundantemente presentes em tecidos doentes com pouca ou nenhuma presença nos tecidos normais. Nossa biomarcador relacionada ao câncer selecionados, proteí...

Imagem eficaz de alvos moleculares relacionadas ao câncer é de grande importância para melhorar a precisão de antes detecção e diagnóstico do câncer. A ressonância magnética (RM) é uma modalidade de imagem clínica poderoso com alta resolução espacial e sem radiação de ionização 1. No entanto, nenhum agente de contraste alvo está disponível para imagem molecular do câncer MR clínica. Design inovador e desenvolvimento de agentes de contraste alvo de ressonância magnética avançaria muito a aplicação de imagem molecular do câncer MR. Foram feitos esforços significativos para desenvolver agentes de contraste para ressonância magnética direcionados dos biomarcadores expressas na superfície das células cancerosas. Devido à sensibilidade relativamente baixa ressonância magnética e baixa concentração desses biomarcadores, é um desafio para gerar aumento de contraste suficiente para imagiologia molecular MR eficaz usando pequenos agentes de contraste alvo molecular 2,3. A fim de obter reforço suficiente, vários sistemas de entrega de such como lipossomas, nanopartículas e polímeros conjugados com uma elevada carga de paramagnéticos Gd quelatos (III) foram preparados para aumentar a concentração local de agentes de contraste para os sites de destino 4,5. Embora estes sistemas de entrega eram capazes de gerar melhoria significativa do tumor em modelos animais, os tamanhos grandes resultaram na eliminação lenta e incompleta do corpo, resultando na acumulação prolongada de Gd iões tóxicos (III), que podem causar problemas graves de segurança 6. Recentemente, alguns estudos demonstraram que as limitações de ressonância magnética para imagiologia molecular pode ser superado pela selecção biomarcadores adequados com elevada expressão local das lesões e usando pequenos agentes moleculares que podem ser facilmente excretados 7,8. A principal característica desses agentes é que eles têm como alvo marcadores moleculares abundantemente presentes nos tecidos doentes com pouca presença nos tecidos normais. Uma alta concentração de agentes de contraste pode ligar-se a estes alvos, resultando em sufirealce de contraste ciente para imagiologia molecular MR eficaz. Uma vez que o seu tamanho é mais pequeno do que o limiar de filtração renal, os agentes de contraste não ligados podem ser facilmente eliminados do corpo com a redução do ruído de fundo. Nós selecionamos um biomarcador relacionada ao câncer universal, proteínas do plasma coagulado, que existem em abundância estroma tumoral, e raramente estão presentes em tecidos normais 9. Sintetizamos um agente de contraste de alvo contendo um pequeno péptido de alvejamento CGLIIQKNEC (CLT1), que mostrou uma forte ligação específica para o modelo de tumor de próstata PC3 10, e quatro monoamida quelatos Gd-DOTA. Aqui, nós fornecemos uma metodologia de imagem molecular para detectar câncer MR tumores em camundongos.

<table><tbody><tr><td colspan="4">REAGENTS</td></tr><tr><td>Fmoc aminoácidos protegidos</td><td>EMD Chemicals Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DOTA-tris(t-Bu)</td><td>TCI America</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PyBOP, HOBt, HBTU</td><td>Nova Biochem</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DIPEA, Trifluoroacetato de tálio(III), TIS</td><td>Sigma-Aldrich Corp.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Texas Red, éster succinimidílico, isômero único</td><td>Invitrogen</td><td>T20175</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">EQUIPMENTS</td></tr><tr><td>Agilent 1100 Sistema HPLC</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ZORBAX 300SB-C18 PrepHT coluna</td><td>Agilent</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ICP-&#8211; S Optima 3100XL</td><td>Perkin-Elmer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MALDI-TOF espectrômetro de massa</td><td>Bruker</td><td>AutoflexTM Speed</td><td></td></tr><tr><td>Maestro FLEX Sistema de imagem in vivo</td><td>Cambridge Research Instrumentation, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Scanner de ressonância magnética Biospec 7T</td><td>Bruker</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

mr imagem molecular do cancro da próstata com um pequeno molecular clt1 peptide alvejado agente de contraste

MR Molecular Imaging of Prostate Cancer with a Small Molecular CLT1 Peptide Targeted Contrast Agent

Matriz extracelular do tumor tem abundância de proteínas relacionadas com o cancro que podem ser utilizados como biomarcadores para imagiologia molecular do cancro. Neste trabalho, nós demonstramos imagem molecular do câncer MR eficaz com um pequeno peptídeo molecular complexa monoamida Gd-DOTA apontado como um agente de contraste MRI alvo específico para proteínas do plasma coagulado no estroma tumoral. Realizamos a experiência de avaliar a eficácia do agente para detecção não invasiva de tumor de próstata com ressonância magnética em um modelo ortotópico de câncer de próstata do rato PC-3. O agente de contraste de alvo era eficaz para produzir aumento significativo de contraste do tumor com uma dose baixa de 0,03 mmol de Gd / kg. O peptídeo alvo agente de contraste MRI é promissor para ressonância magnética molecular do tumor da próstata.

A Figura 1 descreve a síntese do agente de contraste alvo CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 e o esquema geral do experimento. CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 mostra muito maior relaxividade do que clínico Gd-DOTA (Tabela 1). A 1,5 T, T 1 relaxividade por gadolínio de CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 em PBS (pH 7,4) é de aproximadamente 3 vezes mais elevada do que a de Gd-DOTA 10. Imagiologia Maestro confirma a forte ligação específica de vermelho do Texas marcado CLT1 (CLT1-TR) de tumor ...

Para demonstrar imagem molecular do câncer MR com um pequeno peptídeo alvo MRI agente de contraste específico para proteínas do plasma coagulado no estroma tumoral em um modelo de câncer de próstata do rato.

MR Imagem Molecular do cancro da próstata com um pequeno Molecular CLT1 Peptide alvejado agente de contraste

Tumor extracellular  matrix has abundance of cancer related proteins that can be used as biomarkers  for cancer molecular imaging. In this work,  we ...

O objetivo geral deste procedimento é realizar a imagem molecular do câncer de próstata em camundongos utilizando um agente de contraste peptídico seguro e eficaz com ressonância magnética ou RM. Primeiro, verifica-se o desenvolvimento bem-sucedido e o tamanho adequado de tumores ortotópicos de próstata no modelo de camundongo com tumor de próstata. Em seguida, a especificidade de ligação do peptídeo ao tumor é confirmada por meio de imagem de fluorescência e histologia no modelo de câncer de próstata ortotópico em camundongo.Em seguida, o agente direcionado ou controle é injetado após a aquisição da imagem de ressonância magnética (RM) de linha de base pré-injeção. Por fim, imagens de RM com contraste são adquiridas em diferentes pontos temporais durante até 30 minutos. Em última análise, podem ser obtidos resultados que demonstram que o agente de contraste RI direcionado ao pept&í;deo CLT1 pode ser eficaz para a detecção específica de tumores de próstata por meio de técnicas de imagem molecular.A principal vantagem da RNM molecular com agentes de contraste MI direcionados em comparação com tecnologias existentes, como RNM e PET-RNM com agentes de contraste clínicos, é que essa tecnologia pode fornecer imagens eficazes e aprimoradas de tumores da próstata com alta resolução como uma única modalidade de imagem. Demonstraremos aqui que uma RNM molecular eficaz de tumores da próstata pode ser alcançada mediante a seleção de um biomarcador abundante na matriz extracelular tumoral e o uso de agentes de contraste mi direcionados de baixa massa molecular. Habilidades adequadas no manejo de animais, canulação da cauda e RNM também são fundamentais para obter imagens de RNM de alta qualidade dos tumores. Utilizando a síntese peptídica em fase sólida padrão, sintetize e, em seguida, caracterize os complexos de monoamida GD-DOTA conforme ilustrado aqui. Após gerar um modelo animal de tumor de próstata PC3-GFP, de acordo com o protocolo descrito, anestesie os camundongos com 2% de isoflurano em oxigênio em uma câmara de indução e realize uma pinça na cauda para verificar a sedação.Em seguida, utilize um imageador de fluorescência para verificar a presença de tumores no camundongo. Injete 10 mol por camundongo de peptídeos marcados com Texas red nos camundongos portadores de tumor. Duas horas depois, após sacrificar os camundongos por dislocação cervical, colete o tumor e os órgãos principais e realize imediatamente a imagem usando um imageador de fluorescência.Em seguida, após fixar os tecidos tumorais com formalina e crioseccionar em cortes de cinco micrômetros, utilize uma gota de DPI contendo meio de montagem para montar o tecido. Então, realize a imagem dos lâminas utilizando microscopia confocal de varredura a laser. Aproximadamente quatro semanas após a inoculação, os tumores devem ter crescido de 0,3 a 0,6 centímetros em diâmetro. Após anestesiar o camundongo com 2% iso-fluorano em oxigênio em uma câmara de indução, aplique pomada oftálmica para manter a umidade nos olhos do camundongo e realize uma compressão na cauda para verificar a sedação.Em seguida, insira uma agulha de calibre 30 em um tubo de um metro de comprimento preenchido com solução salina heparinizada. Então, coloque o cateter caseiro na veia da cauda do camundongo utilizando um scanner de RM 70 com uma bobina de rádio-frequência volumétrica. Coloque o camundongo no ímã, conecte um cone nasal e administre 1,5% de isoflurano em oxigênio para monitorar a frequência e profundidade da respiração.Coloque um sensor respiratório acoplado a um sistema de monitoramento sobre o abdômen do animal. Mantenha a temperatura corporal do animal a 37 graus Celsius com fornecimento constante de ar quente no interior do ímã. Agora, posicione o animal dentro da ressonância magnética para identificar a localização do tumor.Inicie com imagens de secção sagital utilizando uma sequência localizadora. Em seguida, utilize uma sequência gradientada ponderada em DT com supressão de gordura para adquirir imagens axiais 2D para ressonância magnética com contraste ou RM com contraste (CE). Após adquirir as imagens basais do tumor, comece a injetar o agente direcionado ou o agente controle em uma dose de 0,03 milimols de gadolínio por quilograma.Continue a aquisição de imagens de RNM com contraste por CE em diferentes momentos até 30 minutos para abranger completamente e obter imagens de todo o tumor. Após a conclusão da aquisição, colete 12 cortes, eutanazie o animal com dióxido de carbono e analise e processe as imagens de acordo com o protocolo descrito no texto, conforme mostrado aqui. A imagem Maestro confirma a ligação específica e forte do CLT marcado com Texas red um ao tumor GFP PC três, com pouca ligação aos órgãos e tecidos normais. Enquanto isso, o peptídeo controle desordenado não específico mostra ligação muito baixa ao tumor.Esta figura mostra imagens típicas ponderadas em T1 com contraste antes e após a injeção. O agente direcionado resulta em maior e mais prolongado realce no tecido tumoral em comparação com agentes não direcionados e aleatórios. O realce de contraste na bexiga urinária aumenta gradualmente ao longo do tempo, indicando que os agentes de contraste foram excretados por filtração renal.A análise quantitativa de sinal revela que o agente direcionado produziu um aumento de sinal mais significativo no tecido tumoral do que o agente controle até 30 minutos. O estudo de biodistribuição mostra que o agente apresenta retenção mínima de gadolínio nos principais órgãos e tecidos dois dias após a injeção. Nossos resultados preliminares mostram que o agente de contraste por RM CLT pode ser especificamente direcionado ao tumor em uma dose relativamente baixa.Sim, demonstramos aqui que uma ressonância magnética molecular eficaz de um câncer de próstata pode ser alcançada mediante a seleção de um biomarcador abundante no microambiente tumoral e o uso de um agente de contraste para ressonância magnética de molécula pequena e direcionado. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como desenvolver técnicas adequadas para uma ressonância magnética molecular eficaz ou para tumores malignos pequenos em modelos animais, utilizando um agente de contraste direcionado para ressonância magnética.

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Tomografia Computadorizada guiada por tomografia difusa no domínio do tempo de fluorescência em pequenos animais para localização de biomarcadores de câncer

Este vídeo demonstra uma técnica envolvendo um radioimunoconjugado para a imagem in vivo de um tumor em um modelo de camundongo. Após a injeção do radioimunoconjugado, os anticorpos do conjugado se ligam a um antígeno de membrana específico nas células cancerígenas. O radiotraçador do conjugado emite pósitrons que interagem com elétrons vizinhos para produzir energia, que é detectada por um scanner de tomografia por emissão de pósitrons (PET) para criar uma imagem do tumor.

Uma técnica de imagem PET in vivo para detectar tumores em um modelo murino usando anticorpos radiomarcados

A cicloadição de Diels-Alder de demanda inversa de elétrons bioortogonal foi aproveitada para criar uma estratégia de imagem PET pré-direcionada eficaz e modular para o câncer. Neste protocolo, as etapas desta metodologia são descritas no contexto de um sistema modelo que emprega o anticorpo direcionado ao câncer colorretal huA33 e um radioligante marcado com 64.

Aproveitando a demanda Bioorthogonal Inverse Electron Diels-Alder para Pretargeted PET Imagem

A imuno-histoquímica é uma poderosa técnica de laboratório para avaliar a localização e expressão de proteínas nos tecidos. Os métodos semiautomatizados atuais de quantificação introduzem subjetividade e muitas vezes criam resultados irreproduzíveis. Aqui, descrevemos métodos para imuno-histoquímica multiplexada e quantificação objetiva da expressão e co-localização de proteínas usando imagens multiespectrais.

A quantificação da expressão da proteína e co-localização Usando multiplexada Imuno-histoquímica Coloração e Multispectral Imagiologia

A polarização nuclear dinâmica com subsequente dissolução da amostra permitiu estudos em tempo real do metabolismo em sistemas biológicos. O piruvato de [1-13C]hiperpolarizado foi usado para estudar a atividade da lactato desidrogenase em uma linhagem celular de carcinoma de próstata in vitro.

hiperpolarizado 13 C Metabolic Espectroscopia de Ressonância Magnética e imagem

O objetivo do presente protocolo é demonstrar a injeção intrabenigna de células de câncer de próstata, com posterior castração. Ortotópico modelos pré-clínicos de câncer de próstata andrógeno-dependentes e resistente a castração são críticos para estudar a doença no contexto de um microambiente do tumor clinicamente relevantes e um host imunocompetentes.

Um modelo murino de ortotópico bioluminescentes e fluorescente Syngeneic de câncer de próstata andrógeno-dependentes e castração resistente

Este artigo descreve a radiossíntese, formulação, controle de qualidade de uma nova sonda radiomarcada (ou seja, nanocorpo NM-02 marcado com 68Ga) e seu uso para imagens de PET/CT de pequenos animais em um modelo de xenoenxerto.

Radiossíntese, controle de qualidade e imagens de tomografia por emissão de pósitrons de pequenos animais de 68nanomoléculas marcadas com Ga

A biópsia de próstata é o método diagnóstico padrão-ouro para o câncer de próstata. A biópsia de próstata guiada por fusão cognitiva, que combina ultrassom transretal com parâmetros de ressonância magnética pré-medidos, melhora a precisão da biópsia e aumenta a taxa de detecção de câncer de próstata clinicamente significativo.

Uma biópsia de próstata guiada por fusão cognitiva usando ressonância magnética multiparamétrica e ultrassom transretal

O tratamento excessivo é frequentemente administrado a pacientes com câncer de próstata de baixo risco; A vigilância superativa pode ajudar a evitar esse tratamento excessivo.

Uma nova técnica para tratar o câncer de próstata de baixo risco - vigilância super ativa

Esta pesquisa descreve o processo automatizado para produção de [68Ga]Ga-3BP-3940 com o sintetizador GAIA V2, para imagens PET da proteína de ativação de fibroblastos. Os resultados dos testes de controle de qualidade realizados em três lotes de teste também são apresentados.

Preparação automatizada de [68Ga]Ga-3BP-3940 em um módulo de síntese para imagens PET do microambiente tumoral

Aprenda imagem molecular por ressonância magnética de câncer de próstata em camundongos usando um agente de contraste direcionado por peptídeo CLT1. Este método permite detectar tumores prostáticos com alta especificidade e resolução.

MR Imagem Molecular do cancro da próstata com um pequeno Molecular CLT1 Peptide alvejado agente de contraste

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