Descolamento de Retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio

O objetivo geral deste procedimento é criar descolamentos retinianos experimentais com uma altura de descolamento reprodutível e sustentada, sem hemorragia subretiniana. Isso é realizado primeiramente fazendo uma incisão na conjuntiva temporal no limbo posterior, para separar a conjuntiva da esclera. Na segunda etapa, a ponta de uma agulha de calibre 30 é usada para fazer uma incisão escleral auto-selante e uma punção na córnea.

Em seguida, a urinato de sódio é injetado no espaço subretiniano para destacar a retina neurosensorial do epitélio pigmentado retiniano subjacente. Na etapa final, cola de cianoacrilato é aplicada sobre a ferida escleral e a conjuntiva é reaproximada à sua posição original, reduzindo o risco de vazamento de urinato de sódio. Por fim, o fundo do olho é examinado com o auxílio de uma lâmina de vidro para confirmar a criação de um descolamento retiniano em bolha sem hemorragia subretiniana.

Os métodos existentes para induzir descolamento da retina em roedores podem resultar em variabilidade na altura e na persistência do descolamento, levando a taxas inconsistentes de morte celular. Com esta técnica, podem ser criados descolamentos retinianos bolhosos e persistentes de forma reprodutível, com reduzido risco de hemorragia subretiniana, permitindo um modelo confiável de descolamento da retina em roedores. O descolamento retiniano experimental em roedores é relativamente simples de realizar, possui um curso temporal razoável e é bastante semelhante à doença humana.

Portanto, é um excelente modelo para estudar os mecanismos de morte celular dos fotorreceptores e terapias para prevenir a perda da visão. Em distúrbios degenerativos da retina, sabe-se que a morte variável das células fotorreceptoras na retina destacada torna vantajoso criar um descolamento reprodutível sem hemorragia subretiniana. Isso ocorre porque a maior duração do descolamento da retina ou a ocorrência de hemorragia subretiniana pode afetar a morte das células fotorreceptoras.

Após anestesiar um camundongo de oito semanas, corte os vibrissas do animal e, em seguida, dilate a pupila com uma solução contendo 5% de fenilefrina e 0,5% de tropicamida sob microscópio cirúrgico. Corte a córnea do animal, aplique anestesia tópica com solução oftálmica de cloridrato de proparcaína 0,5%. Posicione o camundongo em decúbito lateral com o nariz voltado para o cirurgião e, então, faça uma incisão na conjuntiva temporal no limbo posterior, separando a conjuntiva da esclera com um par de pinças.

Segure a conjuntiva na região do limbo para controlar o olho. Em seguida, segure uma agulha de calibre 30 com a bisel voltada para cima. Utilize a ponta da agulha para criar um túnel através da esclera, penetrando a esclera até a coroide sem atingir a retina.

Em seguida, segurando a agulha de calibre 30 paralela à íris, fure a córnea para reduzir a pressão intraocular. Agora, com o bisel voltado para baixo, insira uma agulha de calibre 33 conectada a uma seringa Hamilton de 10 microlitros no espaço sub-retiniano e injete 3,5 microlitros de urinato de sódio.

Isso irá destacar aproximadamente 50% da retina neurosensorial do epitélio pigmentado retiniano subjacente. Usando pinça, empurre a córnea ao redor da punção corneana para permitir que o humor aquoso escoe pela punção corneana, e então use uma ponta cirúrgica de celulose para confirmar a ausência de vazamento no ferimento escleral, reduzindo assim o risco de vazamento de urinato de sódio. Aplique cola de cianoacrilato sobre o ferimento escleral e, em seguida, reaproxime a conjuntiva à sua posição original.

Utilize uma lâmina de vidro para verificar o fundo do olho e confirmar a criação de um descolamento de retina bolus sem hemorragia subretiniana. Por fim, aplique pomada antibiótica no olho para reduzir o risco de infecção. Mantenha o camundongo sobre uma placa aquecida para prevenir baixa temperatura corporal.

Após a pressão sanguínea baixa. Retorne o animal ao seu recipiente depois que ele acordar da anestesia. Para avaliar a persistência do descolamento de retina provocado por este protocolo, foram confeccionadas seções criostáticas nos terceiro, sétimo e décimo quarto dias após a indução do descolamento.

Six olhos foram utilizados para cada ponto temporal, hematoxilina e eosina. A coloração foi utilizada para visualizar as seções, cada uma mostrando um bolo. Descolamento de retina próximo à lente.

Nenhum olho apresentou sinais de infecção ou lesão da lente. Uma vez dominada, esta cirurgia pode ser realizada em cerca de cinco minutos. Ao tentar este procedimento, é importante realizar cada etapa com delicadeza para evitar vazamento de sódio, hemorragia subretiniana intensa ou lesão da lente, todos os quais podem afetar a morte celular dos receptores na retina destacada. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como criar um descolamento retiniano experimental em roedores, com altura de descolamento reprodutível e sustentada, sem hemorragia subretiniana.