Name: Descolamento de Retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-09-11T15:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 58 s
Description: Aprenda a criar descolamentos de retina reprodutíveis em roedores usando injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio. Este método minimiza hemorragia e permite estudar morte de fotorreceptores em doenças retinianas.

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Agradecemos Wendy Chao, pelo seu apoio na revisão crítica. Este trabalho foi financiado pela Bausch &amp; Lomb Vitreoretinal Fellowship (HM), Instituto Nacional do Olho concessão EY014104 (JWM), Investigação para Prevenir Fundação Cegueira (DGV), Fundo de Investigação Eye Lions (DGV), e uma generosa doação da família Yeatts (JWM e DGV).

Todos os experimentos em animais foram realizados de acordo com a Associação de Pesquisa em Visão e Oftalmologia Declaração para o uso de animais em Ophthalmic and Vision Research, e as diretrizes e regulamentos estabelecidos pelo Massachusetts Eye and Ear Infirmary Comitê Animal Care. 1. O pré-tratamento <ol><li> Anestesiar um rato com 8 semanas de idade, com uma injecção intraperitoneal de uma mistura de 60 mg / kg de cetamina e 6 mg / kg de xilazina. </li><li> Cortar os bigodes. Isso é feito porque eles interferem com a visualização e colocação de instrumentos. </li><li> Dilatar a pupila com 5% de fenilefrina e 0,5% tropicamide. </li><li> Corte os cílios. Isto também é feito porque interferem com a visualização e a colocação do instrumento. </li><li> Aplicar anestesia tópica (solução oftálmica de 0,5% de cloridrato de proparacaína). </li></ol> 2. Cirurgia Sob o Microscópio <ol><li> Coloque o mouse em uma pos lateraisition com o nariz para o cirurgião. Uma pitada dedo do pé é realizado para confirmar a anestesia cirúrgica e luvas estéreis são vestiu antes de iniciar a cirurgia. </li><li> Incisão na conjuntiva temporais no limbo posterior e separar a conjuntiva da esclera. Evitar a penetração da esclerótica. Após este passo, compreender a conjuntiva no limbo com fórceps para controlar o olho. </li><li> Fazer uma incisão escleral de auto-selagem, utilizando a ponta de uma agulha G 30 com o chanfro apontada para cima. Fazer um túnel na esclerótica através da esclera e penetrar na esclerótica na coróide (Figura 1). Não penetrar a retina. Se o sangramento ocorre coróide e sai através da ferida escleral, realizar uma astriction com uma lança cirúrgico até que o sangramento pare. Esta ferida escleral será auto-selado com pressão intra-ocular. </li><li> Perfurar a córnea com uma agulha de 30 G para reduzir a pressão intra-ocular. Use a agulha paralela à íris para evitar ferir a íris e lente durante entry para a câmara anterior. A pressão intra-ocular vai fazer com que a ferida para auto-selagem. </li><li> Inserir uma agulha G 33 conectado a um mL da seringa no espaço sub-retiniano Hamilton 10, com o bisel apontado para baixo (em direção ao olho interno) e injetar o hialuronato de sódio 3,5 mL com cuidado para retirar a retina neurossensorial do EPR subjacente. Evite penetrar a retina com a agulha 33 G, porque o hialuronato de sódio vai para o espaço vítreo, mas não o espaço sub-retiniano, se a retina é penetrada. Além disso, evitar injeção rápida porque vai criar uma lágrima oral, e hialuronato de sódio vai vazar para a câmara anterior. </li><li> Deixe o fluxo do humor aquoso para fora do punção da córnea, empurrando a córnea em torno do furo da córnea com uma pinça para ajustar a pressão intra-ocular. </li><li> Confirmar a ausência de fuga a partir da ferida escleral usando uma lança cirúrgico. </li><li> Para reduzir o risco de fuga de hialuronato de sódio, colocar cianoacrilato cola cirúrgicaa ferida escleral. </li><li> Recoloque a conjuntiva à sua posição original, utilizando cianoacrilato cola cirúrgica. Isto irá reduzir ainda mais o risco de fuga de hialuronato de sódio. </li><li> Verifique o fundo usando uma tampa de vidro e confirme a criação de uma RD bolhosa sem hemorragia sub-retiniana. </li></ol> 3. Após tratamento <ol><li> Aplicar uma pomada antibiótica ao olho bacitracina para reduzir o risco de infecção. </li><li> Mantenha os ratos em uma almofada de aquecimento para evitar a anestesia (mistura de cetamina e xilazina) de causar baixa temperatura do corpo posterior à pressão arterial baixa. </li><li> Coloque os ratos de volta para a jaula de animais depois que eles despertam da anestesia. Monitorar os ratos diárias para complicações. Se surgir alguma complicação, eutanásia os ratos, conforme descrito abaixo. </li></ol> 4. Sacrifício <ol><li> Eutanásia dos ratinhos por deslocamento cervical depois de injecção intraperitoneal de 100 mg / kg de pentobarbital de sódio, e enucleate os olhos em pontos de tempo apropriados para cada experiência (não mostrado). Evite aplicar pressão sobre o olho durante a enucleação porque o hialuronato de sódio pode vazar. RDs bolhosas deve ser persistente durante pelo menos 14 dias. </li></ol>

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</ol>

O Olho de Massachusetts e Ear Infirmary tem uma participação acionária em três patentes norte-americanas voltadas para o uso de verteporfin. Além disso, Massachusetts Eye e Ear Infirmary tem participação em certas aplicações de patentes dirigidas para a destruição selectiva de neovascularização coroidal sub-retiniana para o tratamento de degeneração macular e outras doenças. O Olho de Massachusetts e Ear Infirmary recebe royalties como resultado dessas patentes e pedidos de patentes e Dr. Miller recebe uma parte do mesmo, de acordo com o Massachusetts Eye e Política Ear Infirmary do institucional de Patentes e Procedimentos, que inclui disposições relativas à partilha de royalties. O autor, Dr. Joan W. Miller, é membro do conselho do passado e ex-acionista da Alcon, Inc., e atualmente atua como consultor da Alcon; Imagen Biotech, Inc.; Isis Pharmaceuticals; Kalvista Pharmaceuticals; Regeneron Pharmaceuticals, Inc. e ONL Therapeutics, LLC. Dr. Demetrios G. Vavvas servecomo consultor para a Roche, Genentech, Kala Pharmaceuticals.

Vários métodos para o estabelecimento de um modelo de RD em roedores olhos foram relatados 3-15 de 22. A maioria deles utilizam a injecção sub-retiniana de hialuronato de sódio porque é um material viscoso, utilizado durante a cirurgia intra-ocular em seres humanos, e não está associada com qualquer conhecida toxicidade ocular 1-15. Hialuronato de sódio, em vez de solução salina normal tamponada com fosfato (PBS) ou solução salina, aumenta a duração da RD. Os métodos para a injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio usar uma das duas abordagens: uma abordagem transvitreal 3-6 ou uma abordagem escleral 7-15. Ambos os métodos são realizados com a observação do fundo. Na abordagem transvitreal, um injector sub-retiniana é introduzida na cavidade vítrea, uma retinotomia é criada na periferia da retina, e o hialuronato de sódio é injectado no espaço sub-retiniano. Neste método, duas rasgaduras da retina são feitos, o que aumenta o risco da retinal hemorragia que pode ir para o espaço sub-retiniano. Além disso, existe o risco de lesão de lentes quando o retinotomia é criado. Existem vários métodos modificados para a abordagem escleral. Na maior parte destes métodos de 7-12, após a redução da pressão intra-ocular com um punção da câmara anterior, uma agulha de 30 G ligada a uma seringa cheia com hialuronato de sódio está directamente inserida no espaço sub-retiniano através da conjuntiva, esclerótica, coróide e RPE. O hialuronato de sódio é então injectado no espaço sub-retiniano. O risco de desgaste e danos da retina lente usando este método escleral é menor do que utilizando a abordagem transvitreal. No entanto, o furo feito na esclerótica com uma agulha de 30 G é grande, especialmente para os olhos de rato, e o hialuronato de sódio injectado no espaço sub-retiniano facilmente fugas para fora do olho através da ferida escleral. Isto leva a uma RD inferior a menos persistente e a morte celular de fotorreceptores mais variável. Além disso, se a hemorragia ocorre na coróideo passo de perfuração de esclerótica, a hemorragia irá propagar-se no espaço sub-retiniano por causa da pressão intra-ocular tem sido reduzido antes da injecção sub-retiniana hialuronato. Vários fatores podem influenciar o efeito de RD no descolamento de retina, incluindo a hemorragia sub-retiniana ea altura e persistência da RD 16-21. Células fotorreceptoras de morte aumenta com o aumento da altura da RD 16, 17, e danos às células fotorreceptoras podem ser mais extensa, devido à redução de difusão de oxigênio e nutrientes essenciais dos coriocapilares com maior RD comparação com RD superficial. Hemorragia sub-retiniana também é tóxico para as células fotorreceptoras 18-21; possíveis mecanismos dessa toxicidade no descolamento de retina incluem hipoxia e perturbação metabólica, hemorragia sub-retiniana como uma barreira de difusão, e neurotoxicidade direta induzida por componentes do sangue (como o ferro). Lesão Lens, que tem sido relatado para ter um efeito protetor sobre a reticélulas ganglionares nal 23, também podem afetar a morte das células fotorreceptoras após a indução da RD. Além disso, se o local da ferida de entrada não é selado, o hialuronato de sódio pode sair com a manipulação de olho durante a enucleação. Isso pode levar à classificação errônea de um RD como superficial, o que por sua vez pode afetar a interpretação dos resultados. Nós modificámos o método escleral para injecção sub-retiniana de hialuronato de sódio para aumentar a reprodutibilidade de TR e reduzir o índice de hemorragia sub-retinal. O passo fundamental deste protocolo é a criação de uma incisão escleral auto-selante usando uma agulha 30 G, o que impede o vazamento de hialuronato de sódio após a injeção. Ao contrário dos métodos anteriores, este protocolo é realizada sem a observação do fundo de olho para que maior atenção é dada à ferida escleral. Aplicação de cola também impede o hialuronato de sódio de vazar para fora do olho. Em nossa experiência, a taxa de hemorragia sub-retiniana com este protocolo wcomo significativamente menor do que com outros protocolos. Se o sangramento coróide ocorre durante a etapa de incisão da esclerótica, irá sair do olho através da ferida de esclerótica porque este passo é executado antes de reduzir a pressão intra-ocular. Se o sangramento coróide ocorra após a redução da pressão intra-ocular e descolamento da retina neurosensorial, sangue dissecar para o espaço sub-retiniano. Descobrimos que isso aconteça em cerca de 5% dos casos, em contraste com cerca de 10-20% com as outras técnicas. Estes animais devem ser excluídos da análise. Esta técnica também pode ser usada para a injecção sub-retiniana de transferência de genes mediada por vector para atingir as células fotorreceptoras ou RPE 24, 25. Porque o veículo típico (PBS, solução salina) para essas injeções é significativamente menos viscoso do que o hialuronato de sódio, técnicas padrão são atormentados por mais vazamentos. A técnica aqui descrita, reduzindo este risco, faz experiências de transferência de vector mais reprodutível efiável.

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50660/">Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate</a>. The footnotes were removed from the abstract due to redundancy in the introduction.

Erratum: Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Fotorreceptores da morte celular e subsequente declínio visuais ocorre quando as células fotorreceptoras são separados a partir do epitélio pigmentar da retina subjacente. A separação física dos fotorreceptores é visto em várias doenças da retina, incluindo a degeneração macular relacionada com a idade (AMD), coriorretinopatia serosa central, retinopatia diabética e retinopatia de prematuridade, bem como regmatogéneo (isto é causado por uma ruptura na retina) descolamento da retina ( RD). Injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio é um modelo amplamente aceito para criar uma RD que leva à morte das células fotorreceptoras, fornecendo informações sobre a fisiopatologia da degeneração dos fotorreceptores 1-15. Degeneração de fotorreceptores induzida por injecção sub-retiniana de hialuronato de sódio, introduzido pela primeira vez em 2001, 7, tem a vantagem de um campo de tempo razoável (dias ou semanas). No entanto, ele pode ter uma variabilidade significativa da perda de células fotorreceptoras do animal ao animal devido a dois principais fatores que afetam a morte das células fotorreceptoras após RD: 1) de altura e duração da RD, e 2) a ocorrência de hemorragia sub-retiniana. Há uma curva de aprendizagem técnica íngreme para o método que contribui para ambos os factores. Degeneração de células fotorreceptoras aumenta com a altura da RD, como a distância entre o epitélio pigmentado da retina (RPE) da camada e fotorreceptores aumenta 16-17. De acordo com esses relatórios, nossas experiências anteriores mostraram mais morte de fotorreceptores em RDs bolhosas que RDs rasas. Também tem sido relatado que a hemorragia sub-retiniana é tóxico para as células fotorreceptoras e afecta a morte celular de fotorreceptores 18-21. Da mesma forma, temos observado mais a morte de fotorreceptores em RDs com hemorragia sub-retiniana de DRs sem hemorragia sub-retiniana. Assim, as técnicas para minimizar a variabilidade tem de se concentrar em alcançar alturas consistentes de RD, evitando hemorragia sub-retiniana. O nosso método de modificação emdução RD pode fazer bolhosa reprodutível e RD persistente na mesma posição do olho com rara ocorrência de hemorragia sub-retiniana. Foi realizada a cirurgia através de uma abordagem temporal, porque é mais fácil de conseguir um campo operatório mais largo em comparação com outros sites. Depois da incisão da conjuntiva, uma incisão escleral auto-selagem é feita utilizando uma agulha G 30. Um túnel na esclerótica é criado, seguido pela penetração de esclerótica para a coróide. Se o sangramento coróide ocorre neste passo, a hemorragia irá sair do olho através da ferida escleral, e o sangramento pode ser interrompido por astriction com uma lança cirúrgico. Uma punção da câmara anterior é, então, realizada a partir da córnea para reduzir a pressão intra-ocular. Este é um passo importante, pois a injeção sub-retiniana só vai levar ao aumento da pressão intra-ocular com oclusão da artéria da retina resultante e isquemia da retina interna. Uma agulha 33 G ligada a uma seringa Hamilton de 10 ul é então inserida no espaço sub-retiniano, e 3,5 μ, Hialuronato de sódio l é suavemente injetado para descolar a retina neurossensorial do EPR subjacente. Em contraste com outros métodos de induzir RD que são realizados sob a observação de fundo de olho, esta técnica é realizada sob observação directa. Desde a ferida escleral é auto-selante, hialuronato de sódio não vai vazar para fora após a injeção. Finalmente, a cola é colocado sobre a ferida de esclerótica e a conjuntiva é recolocado na sua posição original. Estes passos dura também reduzir o risco de fuga de hialuronato de sódio. A injecção de 3,5 mL de hialuronato de sódio cria DRs reprodutíveis (50%) da retina nos olhos de ratinhos de 8 semanas de idade. Criando a ferida auto-selante é o passo mais importante no nosso procedimento modificado, pois evita que o hialuronato de sódio injetado vaze para fora do olho, permitindo assim bolhosa reprodutível e RDs persistentes.

<table><tbody><tr><td>Ketaject</td><td>Phoenix</td><td>2010025</td><td></td></tr><tr><td>AnaSed</td><td>LLOYD</td><td>4004821</td><td></td></tr><tr><td>5% Fenilepfrina / 0,5% Tropicamida</td><td>Massachusetts Eye and Ear Pharmacy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0,5% Solução Oftálmica de Cloridrato de Proparacaína</td><td>AKORN</td><td>17478-263-12</td><td></td></tr><tr><td>Provics</td><td>Alcon</td><td>8065183085</td><td></td></tr><tr><td>Webglue</td><td>Microscópio Veterinário Patterson</td><td>07-8566128</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Leica</td><td>MG90</td><td></td></tr><tr><td>30G1/2 Agulha PrecisionGlide</td><td>BD</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>Weck-Cel Eye Spears</td><td>Beaver-Visitec</td><td>0008685</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de 10 Microlitros</td><td>Hamilton</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>33 gauge, agulha de 0,5 polegada</td><td>Hamilton</td><td>7803-05</td><td></td></tr><tr><td>Tampa de Vidro 18x18mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>18-548A</td><td></td></tr></tbody></table>

descolamento de retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio é um método amplamente aceito de induzir o descolamento de retina (DR). No entanto, a altura e tempo de RD ou a ocorrência de hemorragia sub-retinal pode afectar a morte celular de fotorreceptores na retina descolada. Por isso, é vantajoso criar DRs reprodutíveis sem hemorragia sub-retiniana para avaliar a morte celular de fotorreceptores. Nós modificamos um método previamente relatado para criar bolhosa e RDs persistentes em um local reprodutível com rara ocorrência de hemorragia sub-retiniana. O passo crítico deste método modificado é a criação de uma incisão escleral auto-vedante, o que pode impedir a fuga de hialuronato de sódio, após injecção no espaço sub-retiniano. Para fazer a incisão escleral de auto-selagem, um túnel na esclerótica é criado, seguido pela penetração de esclerótica para a coróide, com uma agulha G 30. Apesar de hemorragia de coróide podem ocorrer durante esta etapa, astriction com uma lança cirúrgica reduz a taxa de hem coróideorrhage. Este método permite que um modelo mais reprodutível e fiável de morte de fotorreceptores em doenças que envolvem RD como regmatogéneo RD, retinopatia da prematuridade, retinopatia diabética, coriorretinopatia serosa central, e degeneração macular relacionada com a idade (AMD).

Para avaliar a persistência da RD feito por este protocolo, criosecções foram feitas nos dias 3, 7 e 14 após a indução da RD. Seis olhos foram utilizadas para cada ponto de tempo. Hematoxilina e eosina (HE) foi usado para visualizar as seções. Todas as secções mostraram uma RD bolhosa aproximando a lente (Figura 2). Um olho mostrou hemorragia sub-retiniana no dia 7. Não há olhos mostrou quaisquer sinais de infecção ou lesão lente. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" /> Figura 1. Criando uma incisão escleral de auto-selagem. Este esquema mostra uma imagem em corte transversal de um olho normal de rato. Linha vermelha indica a incisão escleral auto-selante. Um túnel na esclerótica, seguido pela penetração de esclerótica para a coróide, com uma agulha G 30, cria uma incisão escleral de auto-selagem. Esta ferida escleralvai ser auto-selado com pressão intra-ocular, o que pode impedir a fuga de hialuronato de sódio após a injecção para dentro do espaço sub-retinal e alcançar os descolamentos de retina bolhosas persistentes. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="Figura 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" /> Figura 2. Curso do tempo de descolamento de retina. Esta foto de fundo de olho mostra um descolamento de retina bolhosa sem hemorragia sub-retiniana imediatamente após a cirurgia. Criosecções com hematoxilina e eosina (HE) show de descolamento de retina bolhosa persistente sem hemorragia sub-retiniana por pelo menos 14 dias.

Criação de descolamento de retina experimentais com uma altura reprodutível e sustentada de desapego, e sem hemorragia sub-retiniana, é importante para o estudo da fisiopatologia da perda de células fotorreceptoras da retina na doença e avaliar intervenções terapêuticas potenciais. Relatamos tal método em detalhes.

Descolamento de Retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

O objetivo geral deste procedimento é criar descolamentos retinianos experimentais com uma altura de descolamento reprodutível e sustentada, sem hemorragia subretiniana. Isso é realizado primeiramente fazendo uma incisão na conjuntiva temporal no limbo posterior, para separar a conjuntiva da esclera. Na segunda etapa, a ponta de uma agulha de calibre 30 é usada para fazer uma incisão escleral auto-selante e uma punção na córnea.Em seguida, a urinato de sódio é injetado no espaço subretiniano para destacar a retina neurosensorial do epitélio pigmentado retiniano subjacente. Na etapa final, cola de cianoacrilato é aplicada sobre a ferida escleral e a conjuntiva é reaproximada à sua posição original, reduzindo o risco de vazamento de urinato de sódio. Por fim, o fundo do olho é examinado com o auxílio de uma lâmina de vidro para confirmar a criação de um descolamento retiniano em bolha sem hemorragia subretiniana.Os métodos existentes para induzir descolamento da retina em roedores podem resultar em variabilidade na altura e na persistência do descolamento, levando a taxas inconsistentes de morte celular. Com esta técnica, podem ser criados descolamentos retinianos bolhosos e persistentes de forma reprodutível, com reduzido risco de hemorragia subretiniana, permitindo um modelo confiável de descolamento da retina em roedores. O descolamento retiniano experimental em roedores é relativamente simples de realizar, possui um curso temporal razoável e é bastante semelhante à doença humana.Portanto, é um excelente modelo para estudar os mecanismos de morte celular dos fotorreceptores e terapias para prevenir a perda da visão. Em distúrbios degenerativos da retina, sabe-se que a morte variável das células fotorreceptoras na retina destacada torna vantajoso criar um descolamento reprodutível sem hemorragia subretiniana. Isso ocorre porque a maior duração do descolamento da retina ou a ocorrência de hemorragia subretiniana pode afetar a morte das células fotorreceptoras.Após anestesiar um camundongo de oito semanas, corte os vibrissas do animal e, em seguida, dilate a pupila com uma solução contendo 5% de fenilefrina e 0,5% de tropicamida sob microscópio cirúrgico. Corte a córnea do animal, aplique anestesia tópica com solução oftálmica de cloridrato de proparcaína 0,5%. Posicione o camundongo em decúbito lateral com o nariz voltado para o cirurgião e, então, faça uma incisão na conjuntiva temporal no limbo posterior, separando a conjuntiva da esclera com um par de pinças.Segure a conjuntiva na região do limbo para controlar o olho. Em seguida, segure uma agulha de calibre 30 com a bisel voltada para cima. Utilize a ponta da agulha para criar um túnel através da esclera, penetrando a esclera até a coroide sem atingir a retina.Em seguida, segurando a agulha de calibre 30 paralela à íris, fure a córnea para reduzir a pressão intraocular. Agora, com o bisel voltado para baixo, insira uma agulha de calibre 33 conectada a uma seringa Hamilton de 10 microlitros no espaço sub-retiniano e injete 3,5 microlitros de urinato de sódio.Isso irá destacar aproximadamente 50% da retina neurosensorial do epitélio pigmentado retiniano subjacente. Usando pinça, empurre a córnea ao redor da punção corneana para permitir que o humor aquoso escoe pela punção corneana, e então use uma ponta cirúrgica de celulose para confirmar a ausência de vazamento no ferimento escleral, reduzindo assim o risco de vazamento de urinato de sódio. Aplique cola de cianoacrilato sobre o ferimento escleral e, em seguida, reaproxime a conjuntiva à sua posição original.Utilize uma lâmina de vidro para verificar o fundo do olho e confirmar a criação de um descolamento de retina bolus sem hemorragia subretiniana. Por fim, aplique pomada antibiótica no olho para reduzir o risco de infecção. Mantenha o camundongo sobre uma placa aquecida para prevenir baixa temperatura corporal.Após a pressão sanguínea baixa. Retorne o animal ao seu recipiente depois que ele acordar da anestesia. Para avaliar a persistência do descolamento de retina provocado por este protocolo, foram confeccionadas seções criostáticas nos terceiro, sétimo e décimo quarto dias após a indução do descolamento.Six olhos foram utilizados para cada ponto temporal, hematoxilina e eosina. A coloração foi utilizada para visualizar as seções, cada uma mostrando um bolo. Descolamento de retina próximo à lente.Nenhum olho apresentou sinais de infecção ou lesão da lente. Uma vez dominada, esta cirurgia pode ser realizada em cerca de cinco minutos. Ao tentar este procedimento, é importante realizar cada etapa com delicadeza para evitar vazamento de sódio, hemorragia subretiniana intensa ou lesão da lente, todos os quais podem afetar a morte celular dos receptores na retina destacada. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como criar um descolamento retiniano experimental em roedores, com altura de descolamento reprodutível e sustentada, sem hemorragia subretiniana.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Fonte: Park, S. W., et al. Abordagem límbica-injeção sub-retiniana de vetores virais para terapia gênica no epitélio pigmentar da retina de camundongos. J. Vis. Exp. (2015)O vídeo descreve o método de injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina (EPR) em um modelo de camundongo. Ele detalha o procedimento desde a anestesia e preparação ocular até a entrega precisa do vetor lentiviral, garantindo a integração e expressão do gene no EPR.

Injeção sub-retiniana de vetores virais no epitélio pigmentar da retina em um modelo de camundongo

Aqui apresentamos um protocolo aceito pela comunidade em formato multimídia para injeção sub-retina de um bolus de células RPE em ratos e camundongos. Essa abordagem pode ser usada para determinar potenciais de resgate, perfis de segurança e capacidades de sobrevivência de células RPE enxertadas após implantação em modelos animais de degeneração retiniana.

Realizando Subretinal Injeções em roedores para entregar epitélio pigmentar da retina células em suspensão

Retina epitélio pigmentar (RPE) estratégias de substituição e terapia baseada em gene são considerados para várias condições degenerativas da retina. Para a tradução clínica, o olho dos modelos animais de grande porte são obrigados a estudar técnicas cirúrgicas aplicáveis ​​em pacientes. Aqui nós apresentamos um modelo de coelho para a cirurgia sub-retiniana voltada para o transplante de EPR, que é versátil e eficiente.

A Passo a Passo Protocolo de Cirurgia sub-retiniana em Coelhos

As injeções sub-retinianas são a técnica mais comum para administrar grandes agentes terapêuticos, como proteínas e vetores virais, aos fotorreceptores e ao epitélio pigmentar da retina. Um método alternativo em camundongos que atinge com sucesso o espaço sub-retiniano com danos colaterais mínimos e tempos de recuperação rápidos é descrito aqui.

Um método de injeção Alternativa e validado para acessar o espaço sub-retiniano<i&gt; via</i&gt; Uma abordagem transcleral Posterior

Subretinal injeção tem sido amplamente aplicada em estudos pré-clínicos de terapia de reposição de células-tronco para degeneration macular age-related. Neste artigo visualizado, descrevemos uma técnica de injeção subretinal menos arriscado, reproduzíveis e precisamente modificados através da abordagem trans-escleral para entregar as células nos olhos de rato.

Desenvolvimento de um protocolo refinado para Trans-escleral apresentam transplante de células epiteliais de pigmento Retinal humano nos olhos de rato

Aqui vamos demonstrar uma nova abordagem para usando a tomografia de coerência óptica espectral-domínio de alta resolução (HR-SD-OCT) para auxiliar entrega de agentes de terapia do gene para o espaço subretinal, avaliar sua cobertura areal e caracterizar vitalidade fotoreceptor.

Tomografia de coerência óptica Mouse ultra alta resolução para auxiliar a injeção intra-ocular em pesquisa de terapia de genes da retina

Células epiteliais de pigmento retinal podem servir como uma terapia de reposição celular para a forma avançada de degeneration macular age-related seco. Este protocolo descreve a geração de um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica e o subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal embrionárias humanas células-tronco derivadas para este modelo de doença.

Subretinal transplante de células epiteliais de pigmento retinal derivado de células-tronco embrionárias humanas em um modelo de grandes olhos de atrofia geográfica

O primata não humano (NHP) é um modelo ideal para estudar a terapêutica celular da retina humana devido às semelhanças anatômicas e genéticas. Este manuscrito descreve um método de transplante submacular de células epiteliais de pigmento retiniano no olho nHP e estratégias para prevenir complicações intraoperatórias associadas à manipulação macular.

Transplante de Epitélio de Pigmento De Retina em um modelo de primata não humano para doenças degenerativas da retina

A retinopatia diabética é uma das principais causas de cegueira. Histologia, ensaio de quebra da barreira hemorrânica e angiografia de fluorescência são técnicas valiosas para entender a fisiopatologia da retina, o que poderia aumentar ainda mais o rastreamento eficiente de drogas contra a retinopatia diabética.

Avaliação fisiofisiológica da retina em um modelo de rato

Este artigo descreve métodos para injeção sub-retiniana em ratos, utilizando visualização intraoperatória para controlar o local da injeção e a área de descolamento de retina.

Visualização intraoperatória de injeção sub-retiniana e descolamento de retina em ratos

Aprenda a criar descolamentos de retina reprodutíveis em roedores usando injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio. Este método minimiza hemorragia e permite estudar morte de fotorreceptores em doenças retinianas.

Descolamento de Retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio

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