Descolamento de Retina modelo em roedores por injeção sub-retiniana de hialuronato de sódio

O objetivo geral deste procedimento é criar descolamentos de retina experimentais com uma altura de descolamento reprodutível e sustentada sem hemorragia sub-retiniana. Isso é realizado pela primeira inci, a conjuntiva temporal no limbo posterior para separar a conjuntiva da esclera. Na segunda etapa, a ponta de uma agulha de calibre 30 é usada para fazer uma incisão escleral autovedante e punção da córnea.

Em seguida, a urina de sódio é injetada no espaço sub-retiniano para separar a retina neurossensorial do epitélio pigmentar da retina subjacente. Na etapa final, a cola de cianoacrilato é colocada na ferida escleral e a conjuntiva é recolocada em sua posição original, reduzindo o risco de vazamento de urina hall de sódio. Por fim, o fundo é examinado usando uma lamínula para confirmar a criação de um descolamento de retina em bolo alimentar sem hemorragia sub-retiniana.

Os métodos existentes para reduzir o descolamento de retina em roedores podem resultar em variabilidade na altura e persistência do descolamento de retina, levando a taxas de mortalidade celular inconsistentes sendo medidas. Com esta técnica, um descolamento de retina bolhoso e persistente reprodutível pode ser criado com um risco reduzido de hemorróidas sub-retinianas, permitindo um modelo confiável de descolamento de retina em roedores. O descolamento experimental de retina em roedores é relativamente simples de realizar, tem um curso de tempo razoável e é bastante semelhante à doença humana.

Portanto, é um ótimo modelo para estudar mecanismos de morte de células fotorreceptoras e terapias para prevenir a perda de visão. Em distúrbios degenerativos da retina Em saber que a morte variada de células fotorreceptoras na retina descolada, é vantajoso criar descolamento reprodutível sem hemorragia sub-retiniana. Isso ocorre porque a duração aumentada do descolamento de retina ou a ocorrência de hemorragia sub-retiniana podem afetar a morte das células fotorreceptoras.

Depois de anestesiar um camundongo de oito semanas, corte os bigodes do animal e, em seguida, dilate a pupila com uma solução contendo 5% de fenilrina e 0,5% trópico sob um microscópio cirúrgico. Corte o clia animal, aplique anestesia tópica, solução oftálmica de cloridrato de propano a 0,5%. Coloque o camundongo em posição lateral com o nariz voltado para o cirurgião e, em seguida, inci a conjuntiva temporal no limbo posterior, separando a conjuntiva da esclera usando uma pinça.

Segure a conjuntiva no limbo para controlar o olho. Em seguida, segurando uma agulha de calibre 30 com um chanfro apontado para cima. Use a ponta da agulha para fazer um túnel através da esclera, penetrando a esclera na coróide sem penetrar na retina.

Em seguida, segurando a agulha de calibre 30 paralela à íris, perfure a córnea para reduzir a pressão intraocular. Agora apontando o chanfro para baixo. Insira uma agulha de calibre 33 conectada a uma seringa Hamilton de 10 microlitros no espaço sub-retiniano e injete 3,5 microlitros de urinar de sódio.

Isso descolará aproximadamente 50% da retina neurossensorial do epitélio pigmentar da retina subjacente. Usando uma pinça, empurre a córnea ao redor da punção da córnea para permitir que o humor aquoso flua para fora da punção da córnea e, em seguida, use uma lança cirúrgica de celulose para confirmar a ausência de vazamento da ferida escleral para reduzir o risco de vazamento de urina de sódio. Coloque cola de cianoacrilato na ferida escleral e, em seguida, prenda a conjuntiva à sua posição original.

Use uma lamínula para verificar o fundo e confirmar a criação de um descolamento de retina em bolo alimentar sem hemorragia sub-retiniana. Por fim, aplique pomada antibiótica no olho para reduzir o risco de infecção. Mantenha o mouse em uma almofada de aquecimento para evitar baixa temperatura corporal.

Subsequente à pressão arterial baixa. Devolva o animal de volta à gaiola depois de acordar da anestesia. Para avaliar a persistência do descolamento de retina feito por este protocolo, foram feitos cortes criogênicos nos dias três, sete e 14 após a indução do descolamento.

Foram utilizados seis olhos para cada momento, hematina e eosina. A coloração foi usada para visualizar os cortes, cada um mostrando um bolo alimentar. Descolamento de retina se aproximando do cristalino.

Nenhum olho mostrou sinais de infecção ou lesão do cristalino. Uma vez dominada, esta cirurgia pode ser realizada em cerca de cinco minutos Ao tentar este procedimento, é importante executar cada etapa suavemente para evitar vazamento de sódio, hemorragia sub-retiniana de alto brilho ou lesão do cristalino, que podem afetar a morte das células receptoras na retina descolada. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como criar um descolamento de retina experimental em roedores com uma altura de descolamento reprodutível e sustentada sem hemorragia sub-retiniana.