Name: Enterrar mármore e triturar ninhos como testes de comportamentos repetitivos e compulsivos em camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-12-24T13:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Aprenda a usar os testes de enterrar mármore e triturar ninho para avaliar comportamentos repetitivos e compulsivos em camundongos. Esses métodos ajudam a modelar transtornos psiquiátricos humanos.

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Este trabalho foi apoiado por doações do Departamento de Assuntos de Veteranos e dos Institutos Nacionais de Saúde.

Todos os protocolos com animais foram realizados em estrita conformidade com as recomendações do Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório dos Institutos Nacionais de Saúde. Os protocolos foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso Institucional da Wayne State University (Licença Número A3310-01).
1. Preparação de gaiolas para enterrar mármore e triturar ninhos
<ol>
	<li>Utilizar gaiolas de rato de policarbonato padrão (26 cm x 48 cm x 20 cm) com tampas de filtro instaladas para o ensaio de enterramento de mármore. Adicione material de cama de rato fresco e sem perfume a cada gaiola a uma profundidade de 5 cm e nivele a superfície da cama inserindo outra gaiola do mesmo tamanho na superfície da cama. Isso tem a vantagem adicional de imprimir um modelo de linhas paralelas na superfície da cama que pode ser usado para colocação de mármore.</li>
	<li>Coloque bolinhas de gude de brinquedo de vidro padrão (estilos e cores variados, 15 mm de diâmetro, 5.2 g de peso) suavemente na superfície da cama em 5 fileiras de 4 bolinhas (consulte a Figura 1A). Lave as bolinhas de gude em detergente neutro de laboratório, enxágue exaustivamente em água destilada e desionizada e seque antes de cada uso.</li>
	<li>Use gaiolas de rato de policarbonato padrão (19 cm x 29 cm x 13 cm) com tampas de filtro instaladas para o teste de trituração do ninho. Adicione material de cama de rato fresco e sem perfume a cada gaiola a uma profundidade de 0,5 cm e embale a cama inserindo outra gaiola do mesmo tamanho na superfície da cama.</li>
	<li>Pese os ninhos de fibra de algodão disponíveis comercialmente (5 cm x 5 cm, 5 mm de espessura, ~ 2,5 g cada) em uma balança analítica e coloque um ninho em cima da cama em cada gaiola de teste (consulte a Figura 3A).</li>
	<li>Defina cronômetros ou cronômetros para cronometrar a duração da sessão (30 minutos para cada teste).</li>
</ol>
2. Manuseamento dos animais antes do ensaio
<ol>
	<li>Ratos domésticos individualmente ou em grupos em uma sala com um ciclo claro/escuro de 12 horas. Forneça comida e água a todos os ratos ad libitum. Manuseie os ratos com cuidado por três a cinco dias antes do teste. Use camundongos de ambos os sexos para ambos os testes.</li>
	<li>Realize testes comportamentais entre 9h00 e 4h00 e transporte todas as gaiolas domésticas contendo camundongos para a sala de testes 60 minutos antes do início dos testes.</li>
</ol>
3. Teste de enterramento de mármore
<ol>
	<li>Coloque um rato em um canto da gaiola contendo bolinhas de gude, tomando cuidado para colocar o rato na cama o mais longe possível das bolinhas de gude e coloque a tampa superior do filtro na gaiola. Reter comida e água durante o teste. Deixe o mouse permanecer na gaiola sem ser perturbado por 30 min.</li>
	<li>Remova o mouse e devolva-o à sua gaiola inicial após a conclusão do teste, tomando extremo cuidado para não mover ou desalojar as bolinhas de gude no processo de remoção do assunto da gaiola.</li>
	<li>Pontuadores de tarefas (2-3) cegos para as condições de tratamento ou genótipo do camundongo que está sendo testado para contar o número de bolinhas enterradas. Marque uma bola de gude como enterrada se dois terços de sua área de superfície estiverem cobertos por cama. Pontuações médias para o número de bolinhas enterradas para cada rato.</li>
	<li>Recupere todas as 20 bolinhas de gude da cama. Descarte a roupa de cama.</li>
</ol>
4. Teste de trituração de Nestlet
<ol>
	<li>Coloque um rato em uma gaiola contendo um único ninho pré-pesado e coloque a tampa superior do filtro na gaiola. Reter comida e água durante o teste. Deixe o rato intacto na gaiola com o ninho por 30 min.</li>
	<li>Remova o mouse e retorne a ele para sua gaiola inicial após a conclusão do teste. Remova o material intacto restante da gaiola com uma pinça e deixe secar O/N.</li>
	<li>Pese o ninho não triturado restante e divida esse peso pelo peso inicial para calcular a porcentagem de ninho triturado. Se desejar, pontue a forma do ninho produzido pelo mouse em questão usando uma escala definitiva de classificação de ninho de 5 pontos17, mas percebendo que essa escala geralmente se destina a pontuar a construção do ninho, não a trituração obsessiva.</li>
	<li>Descarte o restante do material de ninho triturado e da cama.</li>
</ol>

<ol><li>Chamberlain, S. R., Blackwell, A. D., Fineberg, N. A., Robbins, T. W., Sahakian, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+neuropsychology+of+obsessive+compulsive+disorder%3A+the+importance+of+failures+in+cognitive+and+behavioural+inhibition+as+candidate+endophenotypic+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">The neuropsychology of obsessive compulsive disorder: the importance of failures in cognitive and behavioural inhibition as candidate endophenotypic markers.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 29, 399-419 (2005).</li>
<li>McGuire, J. F., Lewin, A. B., Horng, B., Murphy, T. K., Storch, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nature%2C+assessment%2C+and+treatment+of+obsessive-compulsive+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Postgrad.+Med%22%5BJournal%5D)">The nature, assessment, and treatment of obsessive-compulsive disorder.</a> Postgrad. Med. 124, 152-165 (2012).</li>
<li>Fineberg, N. A., Brown, A., Reghunandanan, S., Pampaloni, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence-based+pharmacotherapy+of+obsessive-compulsive+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Neuropsychopharmacol%22%5BJournal%5D)">Evidence-based pharmacotherapy of obsessive-compulsive disorder.</a> Int. J. Neuropsychopharmacol. 15, 1173-1191 (2012).</li>
<li>Dove, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Medications+for+adolescents+and+young+adults+with+autism+spectrum+disorders%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Medications for adolescents and young adults with autism spectrum disorders: a systematic review.</a> Pediatrics. 130, 717-726 (2012).</li>
<li>Doyle, C. A., McDougle, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacotherapy+to+control+behavioral+symptoms+in+children+with+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Pharmacotherapy to control behavioral symptoms in children with autism.</a> Expert Opin. Pharmacother. 13, 1615-1629 (2012).</li>
<li>Albelda, N., Joel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+animal+models+of+obsessive+compulsive+disorder%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Current animal models of obsessive compulsive disorder: an update.</a> Neuroscience. 211, 83-106 (2012).</li>
<li>Albelda, N., Joel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+obsessive-compulsive+disorder%3A+Exploring+pharmacology+and+neural+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Biobehav.+Rev%22%5BJournal%5D)">Animal models of obsessive-compulsive disorder: Exploring pharmacology and neural substrates.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 36, 47-63 (2012).</li>
<li>Wang, L., Simpson, H. B., Dulawa, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+the+validity+of+current+mouse+genetic+models+of+obsessive-compulsive+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Assessing the validity of current mouse genetic models of obsessive-compulsive disorder.</a> Behav. Pharmacol. 20, 119-133 (2009).</li>
<li>Joel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+animal+models+of+obsessive+compulsive+disorder%3A+a+critical+review%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neuropsychopharmacol.+Biol.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Current animal models of obsessive compulsive disorder: a critical review.</a> Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 30, 374-388 (2006).</li>
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<li>Moy, S. S., Nadler, J. J., Magnuson, T. R., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+autism+spectrum+disorders%3A+the+challenge+for+behavioral+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Med.+Genet.+C+Semin.+Med.+Genet%22%5BJournal%5D)">Mouse models of autism spectrum disorders: the challenge for behavioral genetics.</a> Am. J. Med. Genet. C Semin. Med. Genet. 142, 40-51 (2006).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+behavioral+assays+relevant+to+the+symptoms+of+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mouse behavioral assays relevant to the symptoms of autism.</a> Brain Pathol. 17, 448-459 (2007).</li>
<li>Silverman, J. L., Yang, M., Lord, C., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+phenotyping+assays+for+mouse+models+of+autism%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Behavioural phenotyping assays for mouse models of autism.</a> Nat. Rev. Neurosci. 11, 490-502 (2010).</li>
<li>Angoa-Perez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+depletion+of+brain+5HT+reveals+a+common+molecular+pathway+mediating+compulsivity+and+impulsivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Genetic depletion of brain 5HT reveals a common molecular pathway mediating compulsivity and impulsivity.</a> J. Neurochem. 121, 974-984 (2012).</li>
<li>Kane, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mice+genetically+depleted+of+brain+serotonin+display+social+impairments%2C+communication+deficits+and+repetitive+behaviors%3A+possible+relevance+to+autism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mice genetically depleted of brain serotonin display social impairments, communication deficits and repetitive behaviors: possible relevance to autism.</a> PLoS One. 7, (2012).</li>
<li>Deacon, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+nest+building+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Assessing nest building in mice.</a> Nat. Protoc. 1, 1117-1119 (2006).</li>
<li>Thomas, D. M., Angoa Perez,, Francescutti-Verbeem, D. M., Shah, M. M., Kuhn, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+endogenous+serotonin+in+methamphetamine-induced+neurotoxicity+to+dopamine+nerve+endings+of+the+striatum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">The role of endogenous serotonin in methamphetamine-induced neurotoxicity to dopamine nerve endings of the striatum.</a> J. Neurochem. 115, 595-605 (2010).</li>
<li>Gyertyan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+marble+burying+response%3A+marbles+serve+to+measure+digging+rather+than+evoke+burying%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Analysis of the marble burying response: marbles serve to measure digging rather than evoke burying.</a> Behav. Pharmacol. 6, 24-31 (1995).</li>
<li>Thomas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marble+burying+reflects+a+repetitive+and+perseverative+behavior+more+than+novelty-induced+anxiety%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Marble burying reflects a repetitive and perseverative behavior more than novelty-induced anxiety.</a> Psychopharmacology. 204, 361-373 (2009).</li>
<li>Hayashi, E., Kuratani, K., Kinoshita, M., Hara, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacologically+distinctive+behaviors+other+than+burying+marbles+during+the+marble+burying+test+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Pharmacologically distinctive behaviors other than burying marbles during the marble burying test in mice.</a> Pharmacology. 86, 293-296 (2010).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Os testes de enterramento de mármore e trituração de ninhos são bons exemplos de métodos comportamentais para estudar comportamentos repetitivos e compulsivos em camundongos. Ambos os testes apresentam excelente validade de face, construto e preditiva para os distúrbios humanos que modelam6-11. Esses comportamentos repetitivos são naturais e espontâneos em roedores e sua frequência e intensidade podem variar após modificações genéticas, como mostrado atualmente, ou após traumatismo craniano e tratamento de ind...

Modelos de camundongos de comportamentos humanos, e particularmente transtornos psiquiátricos, constituem abordagens experimentais importantes e essenciais para o estudo dos mecanismos da doença e para o desenvolvimento de novas terapias. Muitas doenças psiquiátricas permanecem extremamente difíceis de modelar em animais (por exemplo, esquizofrenia). No entanto, os animais exibem um grande número de comportamentos naturais e distintos que podem ser facilmente ligados a comportamentos semelhantes em humanos. O movimento ou atividade locomotora é um exemplo de comportamento em animais que tem uma contrapartida em humanos. Os roedores geralmente se envolvem em uma variedade de comportamentos repetitivos e os exemplos incluem escovar ou cavar. Uma condição psiquiátrica que envolve a exibição de comportamentos recorrentes e indesejados em humanos é o transtorno obsessivo-compulsivo (TOC). Os comportamentos altamente característicos do TOC incluem verificação, contagem e lavagem ou higiene excessiva. O TOC é um transtorno psiquiátrico altamente prevalente (afeta 1-3% da população) e debilitante1. Um grande número de abordagens farmacológicas e comportamentais tem sido usado para tratar o TOC. Muitos deles ficam aquém de fornecer alívio a longo prazo e a recaída é comum no final de um regime de tratamento2,3. Outra condição psiquiátrica que envolve a expressão comportamentos repetitivos é o transtorno do espectro autista (TEA). Os ASDs são caracterizados por déficits na comunicação e interação social e comportamentos repetitivos e estereotipados que incluem girar, balançar, sacudir ou bater os dedos e movimentos corporais complexos. Os Centros de Controle e Prevenção de Doenças estimaram que cerca de 1 em cada 88 crianças são diagnosticadas com TEA. As opções de tratamento para esse distúrbio são extremamente limitadas em número e eficácia4,5. A intensidade e a frequência de ocorrência de comportamentos repetitivos no TOC e TEA podem se tornar grandes o suficiente para substituir a maioria dos outros comportamentos normais e interações sociais em pacientes com essas condições. À luz da prevalência e natureza debilitante das condições psiquiátricas caracterizadas por comportamentos repetitivos, e considerando a pouca compreensão de suas causas e opções limitadas de tratamento, o uso de modelos animais para estudar esses comportamentos assume maior urgência.
Um grande número de modelos animais de comportamentos repetitivos, como visto no TOC e ASDs, foi desenvolvido nos últimos 30 anos e inúmeras revisões excelentes descrevendo esses modelos foram publicadas6-14. Em geral, esses modelos estabelecidos podem ser classificados como genéticos, farmacológicos, neurodesenvolvimentais e comportamentais e a maioria apresenta boa validade de face, construto e preditiva6,7. Usamos dois modelos comportamentais - enterramento de mármore e trituração de ninhos - para avaliar comportamentos repetitivos em camundongos geneticamente depletados de serotonina15,16. Esses métodos têm inúmeras vantagens, entre as quais a facilidade de uso, a precisão com que os comportamentos podem ser pontuados, a exibição espontânea desses comportamentos em roedores e seu uso na triagem de alto rendimento de camundongos geneticamente modificados para fenótipos comportamentais anormais. Além disso, cada teste é realizado em gaiolas de alojamento de roedores padrão e familiares contendo a mesma cama usada nas gaiolas domésticas dos sujeitos, minimizando a necessidade de habituação de camundongos a novas câmaras de teste. A restrição de comida e / ou água não é necessária para "motivar" os ratos a se apresentarem. O teste de enterramento de mármore aproveita a propensão dos ratos a cavar em ambientes naturais (por exemplo, tocas, túneis de fuga) e em camas de gaiola padrão, e o teste de fragmentação de ninhos capitaliza o fato de que os ratos são animais nidificantes por natureza que constroem ninhos para proteção de si mesmos e de seus filhotes contra as condições ambientais (por exemplo,som, luz, temperatura). Usando materiais de alojamento de roedores não especializados e comumente disponíveis, as tarefas de enterrar mármore e triturar ninhos são ensaios comportamentais simples e poderosos de comportamentos repetitivos e compulsivos em camundongos.

<table><tbody><tr><td>Mármores de brinquedo de vidro</td><td>loja de brinquedos local</td><td>N/A</td><td>estilos variados, cores, claro e opaco</td></tr><tr><td>Nestlets Gaiola</td> de rato <td>da série</td> N10 <td>Ancare</td> NES3600 <td></td></tr><tr><td></td> Gaiola padrão para roedores <td>Ancare</td><td>N10HT</td><td>com topo de arame</td></tr><tr><td>Gaiola para ratos da série R20</td><td>Gaiola padrão para</td><td>roedores Ancare R20 com tampo de arame</td><td></td></tr><tr><td>Bed-o'Cobs</td><td>The Andersons</td><td>8B</td><td>Cama padrão para roedores a granel, 1/8 pol</td></tr></tbody></table>

enterrar mármore e triturar ninhos como testes de comportamentos repetitivos e compulsivos em camundongos

Marble Burying and Nestlet Shredding as Tests of Repetitive, Compulsive-like Behaviors in Mice

O transtorno obsessivo-compulsivo (TOC) e os transtornos do espectro do autismo (TEA) são condições psiquiátricas graves e debilitantes e cada um constitui um problema significativo de saúde pública, particularmente em crianças. Ambas as condições são destacadas pela expressão repetida de comportamentos sem sentido. Indivíduos com TOC geralmente apresentam verificação, lavagem frequente das mãos e contagem. Crianças com TEA também se envolvem em batidas repetitivas, bater o braço ou a mão e balançar. Esses comportamentos podem variar amplamente em intensidade e frequência de expressão. Formas mais intensas de comportamentos repetitivos podem até resultar em lesões (por exemplo, higiene excessiva, lavagem das mãos e autoestimulação). Esses comportamentos são, portanto, muito perturbadores e dificultam o discurso social normal. As opções de tratamento para comportamentos repetitivos no TOC e TEA são um tanto limitadas e há grande interesse em desenvolver terapias mais eficazes para cada condição. Numerosos modelos animais para avaliar comportamentos compulsivos foram desenvolvidos nas últimas três décadas. Talvez os modelos animais com maior validade e facilidade de uso sejam o teste de enterramento de mármore e o teste de trituração de aninhas. Ambos os testes aproveitam o fato de que os comportamentos-alvo ocorrem espontaneamente em camundongos. No teste de enterramento de mármore, 20 bolinhas de gude são dispostas na superfície da cama limpa. O número de bolinhas enterradas em uma sessão de 30 minutos é pontuado por investigadores cegos para o tratamento ou status dos sujeitos. No teste de trituração do ninho, um ninho composto de fibra de algodão despolpado é pré-pesado e colocado em cima da cama da gaiola e a quantidade do ninho que permanece intacta após uma sessão de teste de 30 minutos é determinada. Atualmente, descrevemos protocolos e mostramos documentação de filmes de enterramento de mármore e trituração de ninhos. Ambos os testes são pontuados com facilidade e precisão e cada um é sensível a pequenas mudanças na expressão de comportamentos compulsivos que resultam de manipulações genéticas, doenças ou traumatismo craniano.

Uma vantagem primária dos testes de enterramento de bolinhas de gude e de destruição de ninhos é o fato de que cada um depende de comportamentos naturais e espontâneos de camundongos que podem ser quantificados após a conclusão do teste, permitindo que um único pesquisador monte um experimento e permaneça fora da sala de testes até o término das sessões. Um componente crítico do teste de enterramento de bolinhas de gude é a remoção cuidadosa do animal da gaiola após o teste. Camundongos geralmente tentam evitar a captura...

Doenças, traumatismo craniano, modificações genéticas e tratamento de camundongos com drogas podem ter efeitos profundos no comportamento. Utilizando abordagens bem caracterizadas e validadas, como enterrar mármore e triturar ninhos, comportamentos compulsivos podem ser documentados com precisão em camundongos como modelos de transtorno obsessivo-compulsivo humano e transtorno do espectro do autismo.

Enterrar mármore e triturar ninhos como testes de comportamentos repetitivos e compulsivos em camundongos

Obsessive-compulsive disorder (OCD) and autism spectrum disorders (ASD) are serious and debilitating psychiatric conditions and each constitutes a ...

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar a simplicidade do teste de enterramento de bolinhas de gude e do teste de rasgamento de ninho como paradigmas confiáveis para avaliar e demonstrar comportamentos repetitivos e compulsivos semelhantes. Em roedores, para o teste de enterramento de bolinhas de gude, uma gaiola é preparada com 20 bolinhas de gude dispostas uniformemente sobre a superfície da cama. Em seguida, o camundongo é introduzido na gaiola e mantido sem interferência com as bolinhas de gude por 30 minutos.Após esse período, o camundongo é removido e as bolinhas enterradas são contadas para o teste do Nestle. Um Nestle intacto é colocado na gaiola antes da introdução do camundongo. Após 30 minutos, o camundongo é removido e o Nestle é deixado secar durante a noite antes de calcular a porcentagem de Nestle rasgado.No final, podem ser demonstradas diferenças no comportamento de manipular bolinhas de gude, enterrar e rasgar ninhos entre camundongos knockout e do tipo selvagem. As demonstrações dos procedimentos serão feitas por Denise Briggs, aluna de pós-graduação, Mariana Ango Perez, pós-doutoranda e Dean of Francescutti, pesquisadora associada do meu laboratório. Todos os animais são mantidos em um ciclo claro-escuro de 12 horas, com livre acesso a alimento e água.Para obter os melhores resultados, manipule cada camundongo suavemente uma vez ao dia durante três a cinco dias antes do teste. Quando os animais estiverem prontos para serem testados, transporte as gaiolas para a sala de testes 60 minutos antes de iniciar o primeiro teste.Para o teste com esferas rolantes, utilize gaiolas padrão de policarbonato para ratos com tampas filtrantes ajustadas. Adicione material fresco e sem perfume para cama de camundongo em cada gaiola até uma profundidade de cinco centímetros e nivele a superfície da cama inserindo outra gaiola do mesmo tamanho. Isso tem a vantagem adicional de imprimir um molde de linhas paralelas na superfície da cama. Lave.Lave exaustivamente bolinhas de vidro comum com detergente laboratorial fraco, enxágue com água destilada ionizada e seque antes de cada uso. Quando pronto, pressione suavemente as bolinhas na superfície da cama. Prepare cronômetros ou temporizadores para cronometrar as sessões em cinco fileiras de quatro bolinhas cada.Para iniciar o teste, posicione o camundongo voltado para o canto da gaiola o mais distante possível dos vidrinhos. Coloque a tampa com filtro sobre a gaiola e deixe o camundongo em repouso com os vidrinhos por 30 minutos. Ao final do período de teste, remova o camundongo e devolva-o à sua gaiola de origem.Tenha extrema cautela para não mover ou deslocar as bolinhas de gude durante o processo de remoção do animal da gaiola. De dois a três pesquisadores que desconhecem as condições do tratamento devem então registrar o número de bolinhas de gude enterradas. Uma bolinha de gude é considerada enterrada.Se dois terços de sua área superficial estiverem cobertos por camação, calcule a média dos escores do número de bolinhas enterradas para cada camundongo. Por fim, recolha as 20 bolinhas e descarte a camação. Utilize gaiolas padrão de policarbonato para camundongos com tampas filtrantes ajustadas.Para o teste de desfibrar da Nestle, adicione material fresco e sem perfume para cama de camundongo a cada gaiola até uma profundidade de 0,5 centímetros e compacte a cama conforme mostrado anteriormente. Em seguida, pese os ninhos de fibra de algodão comercialmente disponíveis e coloque um ninho sobre a cama. Em cada gaiola de teste, prepare cronômetros ou temporizadores para cronometrar a sessão.Quando pronto, coloque um camundongo em um canto da gaiola, voltado para a parede. Coloque a tampa com filtro sobre a gaiola e deixe o camundongo em repouso com o ninho por 30 minutos. Após esse período, remova o camundongo e devolva-o à sua gaiola de origem.Remova do viveiro o material de ninho intacto remanescente e deixe secar durante a noite. No dia seguinte, pese o ninho não desfiado e divida esse peso pelo peso inicial para calcular a porcentagem de desfibramento do material de ninho.Por fim, descarte o material restante do ninho desfiado e a cama. São mostradas aqui gaiolas representativas antes e depois do teste de enterramento de mármores. Poucos mármores foram enterrados ou deslocados de sua posição inicial ao testar camundongos selvagens.No entanto, o camundongo com duplo knockout do TPH enterrou 17 das 20 bolinhas de gude. As bolinhas de gude restantes não enterradas estão indicadas com setas. Esta vista lateral demonstra alterações na superfície da cama de material.Após o teste, compare a superfície relativamente inalterada das gaiolas de animais selvagens com a superfície irregular, contendo grandes depressões e picos, dos animais knockout. O desempenho típico no teste de enterramento de bolinhas de gude é resumido aqui. Camundongos knockout do TPH2 enterraram significativamente mais bolinhas de gude em comparação com camundongos selvagens.Essas fotografias mostram ninhos representativos após o desfiamento. Aqui, os ninhos de camundongos selvagens apresentam pequenas quantidades de desfiamento em comparação com os ninhos das gaiolas de camundongos knockout para TPH dois. Este gráfico mostra o desempenho típico de camundongos selvagens e camundongos knockout para TPH dois no teste de desfiamento de ninho.Os camundongos com dupla deleção de TPH destroem significativamente mais material Nestle do que os camundongos selvagens. Uma vez dominadas, essas técnicas podem ser realizadas em duas horas, se executadas corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar-se de ser consistente com os critérios para definir se uma bolinha de gude está enterrada e de remover os pedaços destroçados de Nestle do material seco e não destroçado restante.Após este procedimento, camundongos podem ser injetados com medicamentos usados para tratar transtornos obsessivo-compulsivos em humanos, como ISRSs, a fim de determinar se essas drogas reduzem comportamentos semelhantes ao compulsivo em camundongos.

marble-burying-nestlet-shredding-as-tests-repetitive-compulsive-like

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Enterro de Mármore e Trituração de Nestlet como Testes de Comportamentos Repetitivos e Compulsivos em Ratos

**Observação:** As traduções de termos técnicos ou específicos, como "Marble Burying" e "Nestlet Shredding", podem não ter equivalentes diretos em português. No entanto, foram mantidos o mais próximos possível do significado original.

Construção de galerias, de nidificação e açambarcamento são espécies típicas atividades que os ratos prontamente executar em laboratório. Este artigo descreve como podem ser simplesmente mais barato avaliados. Estes protocolos são extremamente sensíveis à tensão mouse, lesões cerebrais e doenças. Além disso, eles constituem "enriquecimento ambiental" para os ratos, e encarnar o "refinamento" aspecto do "3 Rs" 18.

Avaliar buraqueira, Construção Nest, e Hoarding em Ratos

Inchworming é um movimento de escavação síncrona altamente repetitivo exibido pelo BTBR T + ITPR 3TF / J (BTBR) camundongos quando colocado em uma gaiola de testes com roupa de cama de serragem suficiente. O procedimento é uma modificação do protocolo de interacção social, juvenil e é utilizado aqui para avaliar estereotipias motoras repetitivas relevantes para Transtorno do espectro do autismo.

Inchworming: A Novel Motor Estereotipia no BTBR<em&gt; T<sup&gt; +</sup&gt; Itpr3<sup&gt; Tf</sup</em&gt; / J Rato modelo de autismo

Comportamentos repetitivos e restritos de ordem superior (RRBs) perturbam a vida dos indivíduos afetados.  Esses comportamentos são difíceis de modelar em roedores, dificultando a pesquisa biomédica básica sobre possíveis tratamentos ou intervenções para RRBs.  Aqui, descrevemos a exploração de novos objetos como um ensaio potencial para RRBs de ordem superior em camundongos.

Exploração objeto romance como um ensaio de Potencial de ordem superior comportamentos repetitivos em Ratos

Descreve-se aqui uma abordagem de rastreio comportamental escalonada que pode ser utilizada para pesquisar compostos que exibem eficácia in vivo sobre comportamentos motores cognitivos e funcionais em modelos de ratinho transgénicos de β-amiloidose e tauopatia. Esses métodos são otimizados para pesquisar compostos para atividades em tarefas de memória de curto prazo e de trabalho.

Avaliação de Alternância Espontânea, Reconhecimento de Objetos Novos e Clasping de Membros em Modelos de Rato Transgênico de Neuropatologia Amilóide-β e Tau

Este protocolo mede aprendizagem espacial e memória usando o labirinto de Barnes. Um novo paradigma de donzela em apuros é usado para avaliar a atividade locomotora e comportamento pró-social em camundongos.

Analisando a aprendizagem espacial e comportamento pró-social nos ratos usando o labirinto de Barnes e paradigmas de donzela em apuros

Uma bateria de testes comportamentais abrangente das habilidades motoras, humor — incluindo a interação social, depressão e ansiedade — e cognição destina-se a avaliação repetida das alterações comportamentais relacionadas à neurodegeneração em camundongos.

Uma bateria de testes comportamentais para a avaliação repetida das habilidades motoras, humor e cognição em ratos

Aqui, nós apresentamos um protocolo para quantificar o comportamento do edifício do ninho nos ratos, que é sabido para ser danificado em diversas desordens e doenças neurológicas. Este protocolo examina a utilidade de quatro materiais e oferece a oportunidade de quantificar a concordância do avaliador na pontuação, melhorando a validade e a confiabilidade do ensaio.

Comportamento do edifício ninho como um indicador precoce de déficits comportamentais em camundongos

Este manuscrito apresenta um conjunto de testes comportamentais altamente reprodutíveis para validar um modelo de camundongo com síndrome de Angelman.

Caracterização comportamental de um modelo de camundongo com síndrome de Angelman

Modelos de roedores são ferramentas valiosas para estudar comportamentos centrais relacionados ao transtorno do espectro do autismo (TEA). Neste artigo, expomos dois testes comportamentais para modelar as principais características do TEA em camundongos: auto-limpeza, que avalia o comportamento repetitivo, e o teste de interação social de três câmaras, que documenta deficiências sociais.

Estratégias para avaliar comportamentos semelhantes aos autistas em camundongos

Um modelo de compulsão alimentar foi estabelecido em camundongos usando acesso intermitente a M&amp;M's (um alimento altamente palatável feito de gordura e açúcar). Camundongos com acesso intermitente a esse alimento rico em gordura e açúcar mostraram comportamentos semelhantes ao estresse, aumento da ingestão calórica e preferência por esse alimento em relação à ração padrão em comparação com camundongos com acesso contínuo ou nenhum acesso ao alimento.

Modelo de ingestão periódica intermitente em camundongos

Aqui, apresentamos um protocolo para induzir hipóxia em camundongos neonatais, entregando-os em ambientes controlados com concentrações variáveis de oxigênio. Modelos de camundongos submetidos a variações de oxigênio ao nascimento variaram de forma duradoura a expressão de miRNAs envolvidos na indução de alterações fenotípicas comportamentais, como o autismo.

Hipóxia altera os níveis de miRNAs envolvidos na herança não mendeliana do transtorno do espectro autista em camundongos

Aprenda a usar os testes de enterrar mármore e triturar ninho para avaliar comportamentos repetitivos e compulsivos em camundongos. Esses métodos ajudam a modelar transtornos psiquiátricos humanos.

Enterrar mármore e triturar ninhos como testes de comportamentos repetitivos e compulsivos em camundongos

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