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DOI: 10.3791/51321-v
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Engenharia de tecidos da matriz nativa derivada de fibroblastos é uma ferramenta emergente para gerar um substrato do estroma que suporta a proliferação de células epiteliais e de diferenciação. Aqui, um protocolo de aplicação desta metodologia para avaliar o impacto de diferentes tipos de células do estroma em biologia de células tumorais é apresentado.
O objetivo geral do procedimento a seguir é gerar uma matriz nativa de fibroblastos para avaliar a invasão de células tumorais. Isso é feito primeiro pelo cultivo de fibroblastos em plástico em um meio enriquecido com ácido sórbico para gerar a matriz nativa. Na segunda etapa, a matriz nativa é destacada e liberada da superfície plástica de crescimento e, em seguida, essa matriz é semeada com células tumorais e levantada para a interface ar-líquido após um período fixo.
Essas culturas 3D são colhidas para análise histológica da invasão de células tumorais. Em última análise, os efeitos da matriz nativa de fibroblastos na invasão de células tumorais podem ser avaliados por análise imunohistológica. Portanto, a vantagem dessa técnica para gerar culturas típicas 3D é que podemos avaliar a matriz nativa produzida pelos próprios fibroblastos na ausência de substratos sintéticos ou estranhos, como colágeno tipo um de espécies cruzadas Comece semeando 200.000 fibroblastos por poço em seis placas de poço em meio de fibroblasto, suplementado com ácido IC recém-preparado.
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