Name: Assessment of Vascular regeneração no SNC Usando o rato Retina (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-23T18:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: Aprenda a avaliar a regeneração vascular no SNC utilizando um modelo de retinopatia induzida por oxigênio em camundongos. Este método permite estudar mecanismos de crescimento de vasos sanguíneos após lesão isquêmica.

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PS tem um Canada Research Chair em Biologia Celular da retina e do Instituto de Pesquisa Alcon New Investigator Award. Este trabalho foi financiado por subvenções dos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde (221.478), a Canadian Diabetes Association (OG-3-11-3329-PS), Ciências Naturais e do Conselho de Pesquisa do Canadá Engenharia (418637) e A Fundação Fighting Blindness Canadá. O suporte também foi fornecido pelo Réseau de Recherche en Santé de la Visão du Québec.

Declaração de Ética: Todos experimentação animal adere as diretrizes de cuidados de animais estabelecidas pela Associação de Pesquisa em Visão e Oftalmologia (ARVO) Declaração para o uso de animais em Ophthalmic and Vision Research e pelo Conselho Canadense de Cuidado Animal. 1. Oxigênio Induzida Retinopatia (OIR) <ol><li> Registar a data de nascimento de filhotes de rato como P0. </li><li> Registre todos os pesos dos animais aquando da entrada em O 2 para garantir uma faixa de peso adequado. Nota: Para C57BL / 6 ratos em P17, o peso corporal deve variar entre 5 e 7,5 g de NV máxima 32. A fim de manter a consistência do ambiente, é recomendado o uso da mesma ninhada de controlo (para ratinhos geneticamente modificados, bem como ratinhos que receberam tratamentos experimentais). Ao avaliar os efeitos de um vetor viral, deve-se considerar o tropismo do vírus e dar tempo suficiente para a plena expressão de transgenes por vírus entregues. Rapidamente expressar viralOs vectores, tais como os lentivírus 3 ª geração 24, 25, 33 são recomendados. </li><li> Filhotes lugar do mouse no P7 (C57BL / 6 ou desejado tensão) e um CD1 fomentar mãe em uma câmara de oxigênio fixado em 75% O 2 por 5 dias 27. Umidade e temperatura ambiental foram mantidas constantes durante toda a exposição O 2. Nota: As instalações de investigação equipados com uma fonte central de O 2 são ideais e limitar a substituição pesado de O vazio 2 tanques. Se estiver trabalhando com camundongos transgênicos ou nocaute, é importante para garantir que o controle e os ratos experimental são adquiridos do mesmo fornecedor para limitar desvios genéticos dentro das mesmas cepas 30, 29. </li><li> Em P12, remover ratinhos a partir da câmara de oxigénio e retornar os animais ao ambiente de O 2. </li></ol> 2. Injeção intravítrea para entrega de Compostos para o Inner Retina (When avaliar os efeitos de um composto farmacológico ou proteína recombinante) <ol><li> No P14, anestesiar ratos com 2% de isoflurano em oxigênio 2 L / min (ou proteção animal aprovado pelo comitê de anestésico de escolha). A fim de verificar a eficácia da anestesia, sequencialmente beliscar a cauda, ​​pé de trás e da orelha com uma pinça. </li><li> Posicione o mouse sobre o ventre. </li><li> Usando uma seringa esterilizada de 10 mL equipado com uma agulha de vidro puxado chanfrada, realizar uma injecção de um volume máximo de 1 ml de solução contendo o composto a ser investigada ou veículo (solução salina fisiológica) no limbo posterior do olho, com um 45 ° ângulo de evitar a lente. Nota: A-agulha de vidro puxado está ligado à seringa utilizando uma gota de epoxi-resina. </li><li> Aplique uma gota de pomada oftálmica lubrificante (de preferência com antibiótico) com um cotonete para o olho do mouse. </li><li> Retorne o mouse de volta para a jaula com a promoção mãe. Ratos são, então, cuidadosamente monitorizados até recoberto e totalmente ambulatorial. </li></ol> 3. Avaliação da perfusão navio e função de barreira (Integridade) por Angiofluoresceinografia <ol><li> Anestesiar ratos com isoflurano a 2% em oxigênio 2 L / min (ou proteção animal aprovado pelo comitê de anestésico de escolha). A fim de verificar a eficácia da anestesia, sequencialmente beliscar a cauda, ​​pé de trás e da orelha com uma pinça. Nota: Esta é normalmente realizada no P17 quando a regeneração é avaliada. Também levar a cabo a análise em P19 e P21 para determinar se a integridade vascular é preservada ao longo do tempo. </li><li> Uma vez anestesiados, pesar o mouse. </li><li> Faça uma incisão na linha média do abdome com uma tesoura de dissecação. Nota: Os instrumentos de dissecação devem ser regularmente verificados e afiada. </li><li> Cortar costelas lateralmente e levantar a caixa torácica com o auxílio de uma pinça. Nota: É necessário cortar lateralmente como possível, para evitar danos no coração. </li><li> Após a remoção peripHeral tecido do coração, prender a aorta descendente com pinça hemostática. </li><li> Lentamente injetar fluoresceína-dextrano para o ventrículo esquerdo usando uma agulha G 25. Nota: Se a função de barreira vascular é investigado, 70 kDa fluoresceína-dextrano é empregado como ele vai vazar para fora dos vasos quando a integridade dos vasos é comprometida. Se o investigador quer fundido vasos sanguíneos, 2 MDa fluoresceína-dextrano é usado. As etapas críticas: 1) Para garantir uma repartição homogênea, centrífuga fluoresceína-dextrano e injetar o sobrenadante, 2) a fim de evitar a constrição dos vasos, injetar solução de fluoresceína-dextrano aquecido, 3) O seu tempo de circulação não deve excesso de 4 min. </li><li> Decapitar ratos 2 min após a injeção com uma tesoura de operação. </li></ol> 4. Enucleação e Eye Fixation Nota: Ao avaliar as taxas de regeneração vascular, primeiro coletar retinas no P12 e, adicionalmente, no P14 e P17. Aumentar o número de ponto de tempo amostrados para determinação mais precisa das taxas de revascularização 24. <ol><li> Incline a cabeça do rato e colocá-lo de lado. </li><li> Retire a pele e as pálpebras cobrem os olhos com uma tesoura de dissecação. </li><li> Coloque uma pinça curva abaixo do olho e puxe-o até que o nervo óptico é cortada. </li><li> Vire a cabeça do rato para seu outro lado e realizar os mesmos passos (passos 4.2 e 4.3). </li><li> Para garantir uma melhor penetração do fixador, perfurar um buraco na câmara anterior do olho usando 30 G agulha. </li><li> Transferir os olhos para um tubo contendo 4% de paraformaldeído (PFA) e fixar durante 1 hora à temperatura ambiente. </li><li> Remover e lavar os olhos PFA 4 vezes com uma solução de PBS gelado. </li></ol> 5. Dissecção da retina <ol><li> Coloque rato olhos em uma placa de Petri contendo PBS frio e realizar dissecção das retinas sob microscópio estereoscópico. </li><li> Retire a gordura / tecido extra em torno do olho com micro-dissecção scissors. </li><li> Corte a córnea com uma tesoura micro-dissecção. </li><li> O uso de dois pares de pinças, minuciosamente descascar a esclera distância a partir da periferia em direcção ao nervo óptico e descartar. </li><li> Aperte a lente (bola esbranquiçada abaixo da córnea) com uma pinça e extraí-lo do copo olho. Utilizar um par de pinças, como um apoio, e a outra para agarrar e levantar cuidadosamente e remover a lente. </li><li> Separar os vasos hialóide da face interna da retina utilizando escovas pequenas (tamanho 0) e uma pinça. </li><li> Retirar feixes de vasos hialóide ligados ao disco óptico usando uma pinça. </li><li> Transferência dissecados retinas de dois tubos ml de microcentrífuga contendo PBS e colocar em gelo antes de se iniciar o processo de coloração. </li></ol> 6. Retinal Vascular Coloração <ol><li> Incubar as retinas dissecados durante a noite com agitação suave a 4 ° C em uma solução de fluorescência acoplado a isolectina B4 (rodamina-lectina ou outra) em PBS contendo 1 mM de CaCl2 </sub&gt; (uma diluição de uma solução B4 2 mg / ml isolectina é recomendado 1:100). Durante o procedimento de coloração inteira, cobrir os tubos com folha de alumínio ou uma película opaca para proteger da luz. </li><li> No dia seguinte, remover a solução de corante e lavar retinas 3x em PBS durante 10 min à temperatura ambiente. </li></ol> 7. Preparação de retina Flatmounts <ol><li> Retinas, do lado fotorreceptor para baixo de transferência, sobre uma lâmina de microscópio e fazer quatro incisões radiais equidistantes profundas utilizando um bisturi cirúrgico para dividir a retina em quatro quadrantes de igual tamanho. Durante as incisões, a cinta da retina, com uma escova, de modo que ele não se mova. </li><li> Usando duas escovas embebidas em PBS, alise cuidadosamente a quadrantes fotorreceptor side-down e mergulhe a retina em meio de montagem para evitar a foto-branqueamento. Em seguida, coloque cuidadosamente uma lamela sobre a superfície da retina montado sem a aplicação de pressão e garantir que as bolhas de ar não se acumulam sob a lamínula. &lt;/ Li&gt; </ol> 8. Imagem e Quantificação de Vasoobliteration (VO) e neovascularização (NV), como descrito anteriormente 31 <ol><li> Tire fotos de retinas inteiras montado com um microscópio de epi-fluorescência com uma ampliação de 10x. </li><li> Abra a imagem da retina em software de edição de fotos, unir e medir a área total da retina, ea área avascular. Área pode ser expressa em pixels. </li><li> Determinar a extensão de VO, dividindo o número de pixels na área avascular pelo número de pixels na área total da retina. </li><li> Determinar a extensão da NV-se dividindo o número de pixels de NV pelo número de pixels na área total da retina, tal como descrito 31. </li></ol>

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<li>Robinson, R., Barathi, V. A., Chaurasia, S. S., Wong, T. Y., Kern, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+animal+models+of+diabetic+retinopathy%3A+from+molecular+approaches+to+mice+and+higher+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Update on animal models of diabetic retinopathy: from molecular approaches to mice and higher mammals.</a> Dis Model Mech. 5, 444-456 (2012).</li>
<li>Chia, R., Achilli, F., Festing, M. F., Fisher, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origins+and+uses+of+mouse+outbred+stocks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">The origins and uses of mouse outbred stocks.</a> Nat Genet. 37, 1181-1186 (2005).</li>
<li>Jenuth, J. P., Peterson, A. C., Shoubridge, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+selection+for+different+mtDNA+genotypes+in+heteroplasmic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific selection for different mtDNA genotypes in heteroplasmic mice.</a> Nat Genet. 16, 93-95 (1997).</li>
<li>Mattapallil, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Rd8+mutation+of+the+Crb1+gene+is+present+in+vendor+lines+of+C57BL%2F6N+mice+and+embryonic+stem+cells%2C+and+confounds+ocular+induced+mutant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmolog.%2C+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">The Rd8 mutation of the Crb1 gene is present in vendor lines of C57BL/6N mice and embryonic stem cells, and confounds ocular induced mutant phenotypes.</a> Investigative ophthalmolog., & visual science. 53, 2921-2927 (2012).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Qual é a maneira mais eficaz de estimular o crescimento de novos vasos saudáveis ​​no tecido nervoso isquêmico? É terapeuticamente válida para interferir e acelerar ocorrem naturalmente rebrota vascular? Em patologias neuro-isquêmica, como retinopatias isquêmicas ou acidente vascular cerebral, degeneração vascular está associado à redução da função neuronal 35-38. Daí para combater lesão precoce, restabelecendo micro-circulação regional durante o segmento de imediato / precoce da doença pode ser benéfico. Em ...

Ao longo do desenvolvimento do SNC, nervos, células do sistema imunológico e vasos sanguíneos estabelecer redes notavelmente acoplados para garantir adequada perfusão tecidual e permitir a transmissão de informações sensoriais 1-5. O colapso dos sistemas vascular resulta na oxigenação dos tecidos ea oferta insuficiente metabólica comprometida e é cada vez mais reconhecida como um importante contribuinte para a patogênese de doenças neurodegenerativas 6. Abandono vascular e a deterioração da unidade neurovascular dentro do cérebro, por exemplo, está associado com a demência vascular, lesões vasculares da matéria branca do cérebro 7 e doença de Alzheimer com estenose de arteríolas e vasos de pequeno calibre 8. Além disso, a função de barreira vascular prejudicada é pensado para contribuir esclerose múltipla 9 e esclerose lateral amiotrófica 10. De relevância direta para o modelo de retina descrito neste protocolo, cegandodoenças tais como a retinopatia diabética 11 e retinopatia da prematuridade 12, 13 são caracterizados por uma fase de degeneração vascular precoce. O estresse isquêmico que se seguiu na retina neurovascular desencadeia uma segunda fase de neovascularização excessiva e patológica que provavelmente se origina como uma resposta compensatória ao oxigênio restabelecer o fornecimento de energia e 14-16. Uma estratégia atractiva para superar o stress isquémico que é central para a progressão da doença é o de restaurar redes vasculares funcionais especificamente nas zonas isquêmicas do sistema neuro-retina (Figuras 2 e 3). Provocar uma resposta angiogênico controlado pode vir transversalmente como um contra-senso para uma condição em que os tratamentos anti-angiogênicos, tais como anti-VEGF são considerados tratamentos adaptados. No entanto, a evidência para a validade desta abordagem é montagem. Por exemplo, aumentando a rebrota vascular &quot;fisiológico-like&quot; em ischemretinopatias ic foi elegantemente demonstrado através da introdução de células precursoras endoteliais 17, a inibição da Müller VEGF expresso de células na supressão induzida de outros fatores angiogênicos 18, injeção de células progenitoras mielóides 19, a inibição da NADPH oxidase a apoptose induzida por 20, aumentando dietético ω-3 fatty poliinsaturados ingestão de ácido 21, o tratamento com um fragmento do terminal carboxilo do triptofano tRNA 22, e a administração directa de VEGF ou FGF-2, para a protecção de células gliais 23. Além disso, foi demonstrado que o modulando pistas de orientação neuronais clássicos, tais como netrinas Semaforinas ou em retinopatias isquêmicas acelera a regeneração vascular de vasos saudáveis ​​dentro da retina e, consequentemente, reduz a angiogénese patológica 24, 25. De relevância clínica direta, vários dos estudos realizados em animais acima mencionados fornecem evidências de que a promoção re vasculargeração durante a fase isquêmica precoce de retinopatias pode reduzir significativamente risco de vista pré-retinal neovascularização 19, 23, 24, 26, provavelmente através da redução da carga isquêmica. Elaboração de estratégias terapêuticas que estimulam a regeneração dos vasos funcionais continua a ser um desafio significativo para os biólogos vasculares. Aqui nós descrevemos um sistema experimental que utiliza o modelo do rato de retinopatia induzida por oxigênio (OIR), para explorar estratégias para modular a rebrota vascular dentro da retina. Desenvolvido por Smith et al., Em 1994, 27, este modelo serve como um proxy para retinopatias proliferativas humanos e consiste em expor filhotes P7 rato para 75% O 2 até P12 e, posteriormente, re-introduzir os filhotes para a sala ambiente O 2-tensão (Figura 1). Este paradigma vagamente imita um cenário onde um bebê prematuro é ventiladocom o O 2. A exposição de filhotes de rato à hiperóxia provoca degeneração dos capilares da retina e microcirculação, e produz uma área reprodutível de vaso-obliteração (VO) normalmente avaliada em saída de O 2 no P12, embora a área VO máxima é atingida aos 48 hr (P9) após exposição ao O 2 28. No ratinho, as zonas avasculares VO regenerar-se espontaneamente ao longo da semana seguinte re-introdução de ar ambiente e, eventualmente, as zonas de VO são completamente re-vascularização (figura 2). Re-introdução de ar ambiente, de ratinhos submetidos a OIR também provoca neovascularização pré-retinal (NV) (máximo a P17), que é tipicamente avaliada para determinar a eficácia de paradigmas de tratamento anti-angiogénicos. Na sua forma mais pura, o modelo OIR fornece uma ferramenta altamente reprodutível e quantificável para avaliar a degeneração vascular induzida por oxigénio e determinar a extensão da neovascularização destrutiva pré-retiniana 29-31. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Vários paradigmas de tratamento exploratório que modulam a regeneração vascular CNS pode ser investigado usando o modelo OIR incluindo o uso de compostos farmacológicos, terapia genética, deleção do gene e muito mais. A propensão de uma determinada abordagem para influenciar rebrota vascular é avaliada passo a passo na janela entre P12 (VO máxima após saída da hiperóxia) e P17 (NV máxima). A avaliação dos resultados do tratamento na NV patológico pode ser rapidamente e facilmente determinada em paralelo e foi exaustivamente descrito por Stahl e colegas 30, 31. Aqui nós fornecemos um procedimento simples passo-a-passo para investigar a modulação da revascularização fisiológica dentro da retina neural por compostos farmacológicos, terapêuticos potenciais, vetores virais ou para estudar a influência dos genes candidatos em camundongos transgênicos ou nocaute.

<table><tbody><tr><td>Camundongos C57Bl/6 (Outras cepas podem ser usadas; a resposta angiogênica varia de uma cepa para outra)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mães que amamentam CD1</td><td>Fornecedor de escolha</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de operação reta</td><td>World Precision Instruments</td><td>14192</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de dissecação reta</td><td>World Precision Instruments</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de olho Vannas</td><td>Pinça de</td> Íris <td>Harvard Apparatus 72-8483</td><td></td></tr><tr><td>, curvada, serrilhada</td><td>Escovas World Precision Instruments</td><td>15915</td><td></td></tr><tr><td>362R tamanho 0</td><td>Pinça Dynasty</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dumont #3; reta</td><td>World Precision Instruments</td><td>500338</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina Cirúrgica, tamanho 10</td><td>Bard-Parker</td><td>371110</td><td></td></tr><tr><td>Rhodamine Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I</td><td>Vector Laboratories, Inc</td><td>RL-1102</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de microscópio</td><td>VWR</td><td>16004-368</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount G</td><td>Microscopia Eletrônica Sciences</td><td>17984-25</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Axio Observer Z1 Microscópio de Fase Invertida e Fluorescência</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica MZ9.5 Estereomicroscópio</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoticianato de fluoresceína-dextrano, 70000</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>46945</td><td></td></tr></tbody></table>

assessment of vascular regeneração no snc usando o rato retina

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

A retina roedor é, talvez, o sistema de mamífero mais acessível que a investigar interacção neurovascular dentro do sistema nervoso central (SNC). É cada vez mais reconhecido que várias doenças neurodegenerativas, como a doença de Alzheimer, esclerose múltipla e esclerose lateral amiotrófica apresentam elementos de comprometimento vascular. Além disso, as causas mais importantes de cegueira em populações pediátricas e de trabalho idade (retinopatia da prematuridade ea retinopatia diabética, respectivamente) são caracterizadas por degeneração vascular e insuficiência de rebrota vascular fisiológico. O objetivo deste documento técnico é fornecer um protocolo detalhado para estudar a regeneração vascular CNS na retina. O método pode ser utilizado para elucidar os mecanismos moleculares que conduzem à falha de crescimento vascular após lesão isquémica. Além disso, possíveis modalidades terapêuticas para acelerar e restaurar plexos vasculares saudáveis ​​podem ser exploradas. Achados obtained utilizando a abordagem descrita pode fornecer meios terapêuticos para retinopatias isquêmicas, tais como diabetes ou que de prematuridade e possivelmente beneficiar outros distúrbios vasculares do SNC.

O modelo OIR é amplamente utilizada para estudar a degeneração vascular induzida por oxigênio e neovascularização patológica induzida por isquemia na retina e tem sido fundamental para o desenvolvimento de tratamentos atualmente empregados anti-angiogênicos para doenças oculares 27, 29, 30. Os resultados obtidos com este modelo pode ser vagamente extrapolados para retinopatias isquêmicas, como a retinopatia diabética proliferativa e retinopatia da prematuridade 30. Aqui...

A retina de roedores tem sido reconhecida como uma janela de acesso para o cérebro. Neste documento técnico que proporcionam um protocolo que utiliza o modelo de ratinho de retinopatia induzida por oxigénio para estudar os mecanismos que levam à insuficiência de regeneração vascular dentro do sistema nervoso central após a lesão isquémica. O sistema descrito também pode ser aproveitada para explorar estratégias para promover o crescimento de vasos sanguíneos funcionais dentro da retina e do SNC.

Assessment of Vascular regeneração no SNC Usando o rato Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

O objetivo geral deste procedimento é explorar estratégias para promover o regrowth de vasos sanguíneos funcionais na retina e no SNC após lesão isquêmica. Isso é realizado primeiramente utilizando um modelo murino de retinopatia induzida por oxigênio. Em seguida, compostos são administrados no olho por meio de injeções intravítreas.A perfusão do vaso e a função de barreira são então verificadas por angiografia com fluoresceína. O passo final é extrair o olho e isolar a retina. A retina é então corada e montada antes da aquisição de imagens.Por fim, a microscopia de imunofluorescência é utilizada para avaliar as taxas de regeneração vascular após tratamentos intravítreos ou em camundongos com modificações genéticas. A técnica que estamos apresentando fornece um sistema altamente reprodutível e simples para avaliar a regeneração vascular no sistema nervoso central. Baseia-se no modelo de retinopatia induzida por oxigênio de Smith e pode ser bastante útil no desenvolvimento de estratégias terapêuticas para corrigir a isquemia no sistema nervoso central.Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais sobre os mecanismos moleculares que promovem ou impedem a regeneração func

assessment-of-vascular-regeneration-in-the-cns-using-the-mouse-retina

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Fonte: Portela-Lomba, M., et. al. Cocultura de neurônios ganglionares da retina de ratos axotomizados com glia de revestimento olfativo, como um modelo in vitro de regeneração axonal adulta. J. Vis. Exp. (2020). Este vídeo demonstra imagens e quantificação da regeneração axonal em neurônios ganglionares da retina (RGNs) de ratos axotomizados co-cultivados com células da glia olfativas humanas imortalizadas. Os RGNs são imunomarcados, com somas vermelhos e axônios verdes. As imagens foram...

Imagem e quantificação da regeneração axonal em neurônios ganglionares retinianos de ratos axotomizados

A retina de murino neonatal fornece um modelo fisiológico bem caracterizado da angiogénese, que permite investigações dos papéis dos diferentes genes ou drogas que modulam a angiogénese...

Whole Mount coloração de imunofluorescência do Rato Retina Neonatal para investigar angiogênese<em&gt; In vivo</em

Este vídeo ilustra um método, usando um scanner T clínica 3, por MR com contraste de imagem da projeção visual ingênuo do mouse, para estudos in vivo repetitivos e longitudinais de degeneração do nervo óptico associados com lesão por esmagamento do nervo óptico aguda e degeneração do nervo óptico crônica em camundongos knock-out (KO p50).

Imagem in vivo da fibra óptica Nerve Integrity por ressonância magnética com contraste em Ratos

As ferramentas usadas para visualizar a regeneração vascular requerem métodos para contrastar as árvores vasculares. Este filme demonstrou uma técnica de injeção delicada usada para obter o contraste ideal das árvores vasculares e ilustrar os benefícios potenciais resultantes de uma análise detalhada do espécime resultante usando μCT e cortes seriados histológicos.

Visualização dos Vascular e parênquima regeneração após 70% hepatectomia parcial em ratos normais

A imagem in vivo é uma ferramenta poderosa para o estudo da biologia na saúde e na doença. Este protocolo descreve imagens transpupilares da retina de camundongos com um microscópio padrão de dois fótons. Também demonstra diferentes métodos de imagem in vivo para marcar fluorescentemente múltiplas coortes celulares da retina.

Imagem transpupilar de dois fótons in vivo da retina do rato

Este protocolo descreve um método detalhado para a preparação e a coloração da imunofluorescência de montagem e análise plana de retina de camundongos. O uso de fluoresceína fundus angiography (FFA) para filhotes de camundongos e processamento de imagem também são descritos em detalhes.

Monitoramento do crescimento dinâmico dos vasos retinais no modelo de rato de retinopatia induzido pelo oxigênio

Este artigo descreve um ensaio bem estabelecido e reprodutível de manchas de lectina para toda a preparação da retina do montagem e os protocolos necessários para a medição quantitativa dos parâmetros vasculares frequentemente alterados em retinopatias proliferativas e não proliferativas.

Quantificação de Parâmetros Vasculares em Retinas inteiras de Camundongos com Retinopatias Não Proliferativas e Proliferativas

Aqui, apresentamos três protocolos de análise de dados para angiografia fluoresceína (AF) e tomografia de coerência óptica (OCT) no estudo da Oclusão da Veia Retiniana (RVO).

In vivo Leituras de lesões vasculares na retina de camundongos para promover a reprodutibilidade

Este protocolo descreve uma maneira simples e barata para quantificar a atividade de cis-regulatórias elementos (ie, enhancer / promotores) na vida retinas do mouse via eletroporação explante. Preparação de DNA, a dissecção da retina, eletroporação, a cultura de explantes de retina, e pós-fixação análise e quantificação são descritos.

Quantificar a atividade de Cis Elements-Regulação na retina do rato por Eletroporação Remoção

Neste artigo, apresentamos rápido micro-iontoforese de neurotransmissores como uma técnica para investigar a integração de sinais de pós-sinápticos com alta precisão espacial e temporal.

Rápido Micro-iontoforese de glutamato e GABA: uma ferramenta útil para investigar Integração Synaptic

Aprenda a avaliar a regeneração vascular no SNC utilizando um modelo de retinopatia induzida por oxigênio em camundongos. Este método permite estudar mecanismos de crescimento de vasos sanguíneos após lesão isquêmica.

Assessment of Vascular regeneração no SNC Usando o rato Retina

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