Avaliação da função vascular em pacientes com doença renal crônica

O objetivo geral do experimento a seguir é avaliar a função vascular Em pacientes com doença renal crônica, isso é alcançado coletando primeiro células endoteliais vasculares de pacientes. A velocidade da onda de pulso aórtico é então avaliada para medir a rigidez da artéria elástica grande. Em seguida, a dilatação mediada pelo fluxo da artéria braquial é medida para avaliar a função endotelial vascular.

Em última análise, podem ser obtidos resultados que caracterizam a função endotelial vascular. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo vascular, como o que acontece no nível celular com a expressão de várias proteínas. Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades porque é necessária prática e treinamento extensivos para dominar a imagem de ultrassom.

Demonstrando o procedimento estará Lonnie Perino, um assistente de pesquisa do meu laboratório. Para começar, prepare o local com anti-séptico tópico. Em seguida, coloque cortinas fenestradas estéreis sobre o local.

Uma enfermeira ou médico treinado deve colocar um IV e conectar um adaptador de trava hep. Coloque dois fios J nas cortinas para desenrolar a forma de J. Puxe o arco do J em ambos os fios.

Uma vez desenrolado, destampe a trava hep e alimente o JWI na veia aproximadamente oito centímetros. Empurre o fio para frente e para trás várias vezes antes de removê-lo para evitar o acúmulo de muito sangue no fio. Em seguida, use um alicate para cortar os fios de modo que caibam em um tubo cônico de 50 mililitros contendo cerca de 30 mililitros de tampão de dissociação.

Repita essas etapas para o segundo fio quando a coleta de amostras estiver concluída. Volte para o laboratório úmido. Prenda os fios com uma pinça e segure-os dentro do tubo, mas acima da solução por 10 minutos.

Use um pipetador motorizado para enxaguar os fios com tampão de dissociação do tubo. Solte o tampão para que ele escorra ao longo do comprimento dos fios e sacuda o excesso de fluido para dentro do tubo. Remova os fios e centrifugue a amostra para pellet.

Recupere as amostras e ressuspenda o pellet em PBS antes de centrifugar. Por mais cinco minutos depois, use uma ponta de pipeta na extremidade de uma mangueira de sucção para deixar cerca de dois mililitros no tubo. Aspire o resto sem perturbar o pellet.

Ressuspenda o pellet e pipete a amostra uniformemente nas áreas ovais de oito lâminas previamente rotuladas. Coloque as lâminas na incubadora a 37 graus Celsius por cinco horas antes de armazená-las a 80 graus Celsius negativos até que estejam prontas para o início da análise. O sujeito deve vestir shorts descartáveis e deitar em decúbito dorsal em uma sala silenciosa, escura e climatizada.

Quando estiver pronto para começar, posicione os eletrodos para o ultrassom e nosso dispositivo de rigidez arterial. Em seguida, coloque o manguito de pressão arterial sobre o sujeito. Comece as leituras da pressão arterial após 20 minutos, repita as leituras até que as medições estejam dentro de cinco milímetros de mercúrio.

Descansar dois minutos entre cada leitura e realizar pelo menos três. Em seguida, palpe o pulso da artéria braquial e coloque o ultrassonômetro para registrar as formas das ondas braquiais. Repita para as artérias radial, femoral e carótida.

Meça a distância para cada um desses locais a partir da incisura superesternal usando uma fita métrica para as artérias braquial, radial e carótida e uma régua personalizada para o femoral. Em seguida, calcule a velocidade da onda de pulso da carótida braquial e da carótida femoral usando software especializado. Coloque o manguito de pressão arterial do antebraço distal ao processo de reon.

Defina o software vascular para o modo de disparo e registre pelo menos 10 ciclos cardíacos da artéria braquial basal, imagens de ultrassom e medições de velocidade do fluxo sanguíneo. Um braço mecânico pode ser usado para estabilizar a sonda de ultrassom, se desejado. Em seguida, infle o manguito de pressão arterial do antebraço a 250 milímetros de mercúrio.

E comece um cronômetro. Instrua o participante a permanecer muito imóvel. Comece a registrar as velocidades quando o cronômetro marcar o disparo de quatro minutos e 45 segundos.

Solte o manguito em cinco minutos e troque o ultrassom para gravar imagens no modo B. Quando o relógio marca cinco minutos e 10 segundos. Continue gravando até que o relógio marque sete minutos.

Em seguida, meça a pressão arterial do sujeito. Se a pressão arterial sistólica for maior ou igual a 100 milímetros de mercúrio, coloque 0,4 miligramas de nitroglicerina sublingual sob a língua do sujeito e inicie o cronômetro. Comece a gravar no modo B quando o relógio marcar três minutos e pare a gravação.

Quando o relógio marca oito minutos. Para analisar as células endoteliais coradas, um único experimentador cego deve escanear as lâminas sistematicamente, as células endoteliais são identificadas por coloração positiva para caderina VE e a integridade nuclear é confirmada por coloração positiva para dapi. Além disso, as células devem ser coradas para a proteína de interesse.

Um total de 30 células por lâmina deve ser visualizado para análise posterior. Repita esse processo para cada lâmina no lote corado, incluindo a lâmina de controle VE. O software qualitativo é usado para analisar a intensidade da coloração para o anticorpo primário de interesse.

Esta imagem mostra o diâmetro basal da artéria braquial obtido durante a avaliação de um paciente com doença renal crônica após a liberação do manguito por dois minutos. Esta gravação mostra uma mudança de diâmetro no diâmetro da onda R. Essas formas de onda foram obtidas em cada uma das artérias carótida e femoral.

A diferença de tempo e distância foi usada para calcular um relatório da velocidade da onda de pulso aórtico. Aqui, as células controle e paciente foram analisadas quanto à integridade nuclear com a expressão de células endoteliais DPI com caderina VE e para a enzima oxidante N-A-D-P-H oxidase. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de obter imagens de ultrassom, formas de onda e imagens de células endoteliais da mais alta qualidade possível para uma avaliação precisa e quantitativa.

Não se esqueça de que trabalhar com amostras humanas pode ser extremamente perigoso, e precauções como o uso de equipamentos de proteção individual adequados devem sempre ser tomadas durante a execução deste procedimento.