Name: Avaliação Comportamental do Envelhecimento Rato Sistema Vestibular (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-07-11T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: Aprenda a avaliar o desempenho do equilíbrio em ratos envelhecidos usando estímulo rotatório não invasivo. Este método simples mede alterações no controle motor e na coordenação vestibular.

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Os autores gostariam de agradecer à Garnett Passe and Rodney Williams Memorial Foundation e ao Bosch Institute Animal Behavioural Facility.

1. Animais <ol><li> Ratos (C57/BL6) de idades de 1, 9 e 13 meses de idade foram obtidos a partir do Centro de Recursos Animais (Perth, Austrália). Estes ratos foram alojados em gaiolas de rato padrão na instalação Bosch Roedor na Universidade de Sydney em um ciclo claro / escuro 12/12 horas de luz com acesso a comida e água ad libitum. Os procedimentos descritos a seguir foram aprovados pelo Comitê de Ética da Universidade de Sydney animal. </li><li> Traga gaiolas de rato para a sala de teste antes de cada teste, durante 10 min para permitir que os ratos a aclimatar ao ambiente de teste. </li></ol> 2. Rotarod <ol><li> Configure o aparelho rotarod (Figura 1A): <ol><li> Instale as buchas em cada pista do rotarod. Nota: Neste exemplo buchas de ratos (70 mm de diâmetro) são usados ​​em vez de buchas de rato (32 mm de diâmetro) para desencorajar os ratos do apego ao passador e realizando rotações &quot;passivos&quot; 10. </li><li> Positião as plataformas de aterragem magnéticas sobre o fio situado na parte inferior de cada pista do cilindro rotativo para garantir que eles não são inclinando para tocar no piso do cilindro rotativo e são colocados tão perto quanto possível da parede direita magnético de cada pista sem tocar. Nota: Durante os ratos de teste rotarod são obrigados a andar para a frente para ficar em as buchas rotativas e acelerando. Quando um rato não é mais capaz de permanecer no passador, eles caem e deslocar a plataforma de desembarque que, posteriormente, ativa um sensor magnético. O tempo que demora a cair do cavilha rotativo, a rotação do passador no tempo de queda e a distância percorrida é calculada automaticamente para cada rato e gravado no visor na frente do cilindro rotativo. </li><li> Deslize dois painéis de plástico transparente na frente de cada pista rotarod com os painéis mais curtos na parte inferior e os painéis mais acima. </li><li> Entrada de parâmetros de ensaio, utilizando o teclado localizado na parte frontal do cilindro rotativo. Siga ruaeps 2.1.4.1 a 2.1.4.6 para os parâmetros de teste rotarod acelerando e etapas 2.1.4.7 a 2.1.4.12 para os parâmetros de teste rotarod de velocidade fixa. <ol><li> Defina a duração máxima do teste para 60 seg. </li><li> Definir o número de pistas a ser utilizado (ou o número de murganhos a ser testado). </li><li> Defina a velocidade inicial do teste para 5 rpm. </li><li> Defina a velocidade máxima do teste a 44 rpm. </li><li> Defina a velocidade de rampa do teste para 60 seg. </li><li> Defina o tamanho dos passadores escolhidos e do sentido de rotação para buchas de ratos em rotação para a frente. </li><li> Defina a duração máxima do teste a 240 seg. </li><li> Defina o número de vias a serem utilizados para 1, como os ratos são testados individualmente. </li><li> Defina a velocidade de partida da prova a 15 rpm. </li><li> Defina a velocidade máxima do teste a 15 rpm. </li><li> Defina a velocidade de rampa de teste para 0 seg. </li><li> Definir o tamanho da cavilha escolhida e do sentido de rotação de um passador de rato rotativa num forwadireção rd. Nota: As definições acima podem ser alterados para se adequar às necessidades de diferentes experimentos. </li></ol></li><li> Coloque uma câmara em frente do cilindro rotativo para o teste rotarod velocidade fixa, de modo que o comportamento do rato durante os ensaios podem ser gravados e os vídeos usado para posterior análise para determinar a duração de tempo os ratinhos foram capazes de permanecer no cilindro rotativo. </li></ol></li><li> Siga os passos 2.2.1 a 2.2.4 para o teste rotarod aceleração: <ol><li> Coloque um mouse em cada passador parado por 5 minutos para permitir que os ratos para aclimatar à rotarod. </li><li> Suavemente empurrar os ratos para enfrentar a volta do cilindro rotativo e inicia o teste rotarod quando todos os sujeitos são virada nessa direcção (ver Figura 1B). </li><li> Retornar todos os ratos para suas gaiolas quando eles caíram de as buchas rotativas e deixá-los descansar por 10 min com acesso a comida e água. </li><li> Repita os passos 2.2.1 a 2.2.3 para completar um total de 8 ensaios certificando-se de limparas buchas, pistas, e plataformas de desembarque da rotarod para urina e fezes, e mover as plataformas de pouso de volta à sua posição inicial betwen cada ensaio. Nota: Os primeiros 3-5 ensaios são utilizados como testes de treinamento para permitir que os ratos a se familiarizar com a tarefa. O tempo de queda, a distância percorrida e final rpm da bucha, no momento da queda de cada tentativa subsequente é gravadas para posterior análise (Figura 2). </li></ol></li><li> Siga os passos 2.3.1 a 2.3.8 para o teste rotarod velocidade fixa: <ol><li> Coloque um mouse em um passador por 5 minutos para permitir que ele se acostumar com o rotarod. Retorne o mouse de volta para sua gaiola. </li><li> Iniciar a gravação de vídeo na câmera e começar a pressionar no rotarod. Em seguida, coloque o mouse sobre o passador rotativo garantindo que enfrenta a parte de trás do rotarod. </li><li> Pare a gravação de vídeo na câmera quando o rato cai das buchas rotativas, e retornam o mouse para suas gaiolas por 10 minutos com acesso a comida e água. </li><li> Repita os passos 2.3.2 e 2.3.3, até um total de 8 ensaios é adquirido certificando-se de limpar as buchas, pistas, e plataformas de desembarque da rotarod por fezes e urina, e mover as plataformas de pouso de volta à sua posição inicial entre cada ensaio . </li><li> Ligue o costume construído rotador em 3 Hz por 20 segundos para permitir que os ratos para familiarizar-se com o som. Pare o rotator após 20 seg desligando a broca e colocar as mãos em cada lado da roda de corrida para impedi-lo de continuar a girar passado a 20 seg inicial. Nota: O rotador si consiste de uma roda de corrida roedor preso a uma broca (Figura 3A). No centro da roda de funcionamento é uma pequena câmara com uma tampa de malha em que o rato é colocado (Figura 3B). O rotor gira no sentido anti-horário em torno do eixo vertical. A magnitude do estímulo é, de acordo com estudos anteriores que mostram estimulações rotativos variando de 0,2 a 3 Hz são suficientes para gecomeu VOR e VCR respostas 4,11,12. </li><li> Colocar o rato dentro da câmara no centro do rotor e substituir a tampa. </li><li> Ligue o rotator em sua configuração mais baixa de 3 Hz por 20 s. Inicie o rotarod e começar a gravação de vídeo na câmera durante este tempo de preparação para a próxima prova. Desligue a broca no final dos 20 segundos e coloque as mãos em cada lado da roda de corrida para parar de girar. Teste novamente o mouse sobre a rotarod imediatamente depois, transferindo-o o mais rápido possível para o pino de rotação. </li><li> Pare a gravação de vídeo na câmera quando o rato cai do passador e retornar o mouse para sua gaiola. </li></ol></li><li> Limpe os painéis de plástico transparente com um detergente / mix e água leve o buchas cilíndricas, pistas e plataformas metálicas de desembarque da rotarod com etanol 70%, quando todos os ratos foram testados. </li></ol> 3. Trave com Vestibular Desafio <ol><li> Configure o baAparelho feixe lança como visto na Figura 4A. Nota: O aparelho de feixe de equilíbrio foi adaptado a partir de um aparelho descrito em Carter et al (2001) 13.. Para este ensaio, ratinhos andar a partir da extremidade inferior da viga, que é 52,5 centímetros acima do solo, para uma caixa escurecida gol (13 x 22 cm, com um 5 x 6 cm porta) situada a 60 cm acima do solo (Figura 4A ). Ratos naturalmente procuram a escuridão e proteção da caixa de meta em favor do feixe expostos e são ainda encorajados a atravessar o feixe pela ligeira inclinação que explora o seu mecanismo de fuga natural para correr em uma direção para cima 14. A viga em si é de 1 m de comprimento e tem uma secção transversal circular com um diâmetro de 14 mm. A gama de diâmetros adaptados feixe pode ser usado o qual permite que o experimentador para ajustar a sensibilidade do teste ou acomodar indivíduos maiores. Na extremidade inferior do feixe de equilíbrio de uma linha branca indica a linha de partida. Outra linha foitraçada 60 cm da linha de partida no ponto mais alto do feixe para indicar a linha de chegada (Figura 4A). <ol><li> Posição 2 câmaras, uma de cada lado da viga de equilíbrio, na extremidade inferior da trave (Figura 4B). Nota: Estas câmeras deveriam ser inclinado para capturar todo o comprimento da trave de equilíbrio e garantir que as linhas de partida e de chegada marcada na trave de equilíbrio são claramente visíveis. Essas câmeras serão usados ​​para gravação de vídeo o comportamento dos camundongos, enquanto atravessam a trave de equilíbrio, com vídeos resultantes sendo usado para análise posterior. </li><li> Forre o chão da caixa de meta com toalha de papel, para facilitar a limpeza de urina e fezes depois de testar cada rato, e coloque a cúpula habitação da gaiola assuntos casa no interior da caixa do gol. </li><li> Coloque espuma adequada ou outro material de enchimento por baixo da viga levantada para proteger todos os assuntos que caem do aparelho. Ratos que caem vai ser pego imediatamente pelo experimentoer e colocado dentro da caixa de meta para descansar. </li></ol></li><li> Coloque um rato na caixa de meta por 2 min para que se torne familiarizado com este ambiente. Cubra a abertura da caixa de gol com a mão enluvada por 5 segundos, se o rato tenta andar na trave durante este tempo para desencorajar este comportamento. </li><li> Treinar o mouse, colocando-o na trave do lado de fora a abertura da caixa de meta e permitindo-lhe caminhar na caixa de gol. Continue a treinar o mouse, colocando-o na trave progressivamente mais longe da caixa de meta até que o mouse é capaz de andar a partir da linha de partida para a caixa de meta sem assistência e hesitação mínimo. Deixe o mouse para descansar na caixa de meta para 1 min após cada ensaio. </li><li> Comece a testar o mouse quando a formação é completa. <ol><li> Iniciar a gravação de vídeo em câmeras. </li><li> Posicione o mouse na linha de partida da viga e esperar enquanto ele atravessa o feixe na direção da caixa de meta. </li><li> Pare a gravação de vídeo em caMeras quando o mouse chega ao caixa. </li><li> Deixe o mouse para descansar na caixa de meta para 1 min. Remova qualquer urina ou fezes, que pode ter sido depositado durante o julgamento enquanto espera. </li><li> Repita os passos de 3.4.1 a 3.4.4, até um total de cinco ensaios foram concluídos. </li></ol></li><li> Ligue o costume construído rotador em 3 Hz por 20 s (como no teste rotarod velocidade fixa) para permitir que os ratos a se familiarizar com o som. Pare o rotator após 20 seg desligando a broca e colocar as mãos em cada lado da roda de corrida para impedi-lo de girar. </li><li> Colocar o rato dentro da câmara no centro do rotor e substituir a tampa. </li><li> Ligue o rotator em sua configuração mais baixa de 3 Hz por 20 s. Iniciar a gravação de vídeo nas câmeras durante este tempo, em preparação para o próximo julgamento. Desligar a broca na extremidade da 20 seg e colocar as mãos em ambos os lados da roda de corrida para impedi-lo de continuar a girar passado a 20 seg inicial. Transferência o mouse para o início da trave de equilíbrio o mais rápido possível e aguarde enquanto o rato atravessa o feixe de caixa do gol. </li><li> Pare a gravação de vídeo em câmeras quando o mouse chega a caixa de meta e retornar o mouse para sua gaiola. </li><li> Limpe o equipamento trave de equilíbrio com 70% de etanol e mudar a toalha de papel na caixa de gol depois de cada rato foi testado. </li></ol>

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</ol>

Os autores declaram não ter interesses financeiros concorrentes.

Etapas críticas dentro do Protocolo Os trabalhos anteriores mostraram que é fácil entrar em overtraining camundongos, tanto no rotarod e aparelhos trave de equilíbrio e, como conseqüência, a aquisição de medições precisas pode ser um desafio 15. Por exemplo, overtraining no rotarod pode levar a camundongos intencionalmente pulando as buchas durante os períodos de aclimatação e de ensaio, enquanto overtraining na trave podem levar a parada mais freqüentes (comportamento exploratório) ...

Nosso senso de equilíbrio é, talvez, um dos componentes vitais ainda mais negligenciados do mesmo as atividades motoras mais básicas, incluindo caminhadas e de viragem. O equilíbrio é influenciado por inúmeros fatores, incluindo a força muscular, coordenação motora e função vestibular, e é apenas na presença de neuropatias vestibular ou durante o envelhecimento normal que a importância de um sistema de equilíbrio em pleno funcionamento é apreciado. Distúrbios do sistema vestibular são frequentemente associados com experiências de vertigem ou tontura e desequilíbrio, resultando em um aumento do risco de quedas e lesões subseqüentes 1. Isto é particularmente crítico em populações mais antigos, onde as quedas são uma das principais causas de lesão 2. Testes de função vestibular são geralmente baseados nos reflexos vestibulares, em particular, o vestíbulo-ocular (VOR) ou do reflexo vestibulo-collic (VCR). O VOR e VCR são essenciais para a estabilização de imagens ema posição de retina e da cabeça durante os movimentos da cabeça e do corpo, respectivamente. Comumente, as medições VOR requer implantação invasivo de bobinas de pesquisa para medir os movimentos dos olhos ou monitoramento de vídeo de movimento dos olhos 3. Este é um desafio em camundongos devido ao pequeno natureza do olho do rato e da dificuldade em detectar o aluno para a análise de vídeo 3. Como alternativa, o VCR tem sido utilizado para medir a estabilização da cabeça em resposta aos movimentos do corpo em ratos sem a necessidade de cirurgia invasiva 4. Apesar disso, poucos estudos incidem especificamente sobre como o sistema vestibular funciona como um todo, e mais importante, como ele muda durante o envelhecimento. Para avaliar o desempenho geral do equilíbrio de forma simples e não invasiva modificamos dois testes comportamentais comumente usados. Os testes dos balanceiros rotarod e inclinadas avaliar diferentes aspectos do desempenho do motor em roedores e em estudos anteriores tenham sido usados ​​de uma bateria de testes para adquirir uma completaperfil de capacidade motora. Esta capacidade pode ser afetada por uma doença ou modificação genética, e também é sensível aos processos associados com o desenvolvimento normal e envelhecimento 5-7. Trabalhos anteriores usando o rotarod mostrou que a coordenação motora em ratos diminui após 3 meses de idade 8. Além disso, os ratos apresentam déficit de equilíbrio visíveis com o aumento da idade no teste trave de equilíbrio 9. Este artigo descreve o uso dos testes rotarod e feixe de equilíbrio em conjunto com um estímulo vestibular, a fim de desafiar o sistema vestibular e caracterizar o impacto sobre o desempenho subseqüente equilíbrio em jovens e mais velhos ratos. Enquanto os métodos simples e não invasivos descritos não são concebidos como medidas independentes da função vestibular periférica, eles não fornecem uma medida comportamental útil e simples para comparar as alterações celulares e subcelulares em vários estágios de processamento vestibular durante o envelhecimento normal em camundongos.

<table><tbody><tr><td>Rotarod</td><td>IITC Ciências da Vida Inc.</td><td>#755</td><td>"Buchas de rato" = 70 mm de diâmetro. Não permita que o etanol entre em contato com o perspex.</td></tr><tr><td>iPhone</td><td>Apple</td><td></td><td>Pode usar qualquer tipo de câmera. Velcro fixado à superfície traseira para fixação ao braço articulado 3D.</td></tr><tr><td>Braço articulado 3D</td><td>Fisso/Baitella</td><td>Classic 3300-28</td><td>Qualquer tipo de suporte vertical estável seria adequado. O Velcro é fixado na extremidade apical do braço para fixação do iPhone.</td></tr><tr><td>Viga de madeira: tira de madeira lisa de 1 m de comprimento com uma secção circular de 14 mm de diâmetro</td><td></td><td></td><td>Uma gama de diâmetros e formas de secção transversal pode ser utilizada para se adequar aos parâmetros experimentais</td></tr><tr><td>Caixa de baliza de madeira (130 x 140 x 220 mm) feita de tábuas</td><td></td><td></td><td></td>de 11 mm de espessura</tr><tr><td>Suporte de suporte feito de vigas de 41 x 41 mm: 2 vigas verticais a 525 e 590 mm do solo nas extremidades inicial e final, respectivamente; Viga horizontal de 803 mm que corre ao longo do solo diretamente sob a viga móvel; duas vigas de 20 mm de comprimento atuam como "pés", unindo as vigas horizontais e verticais em cada extremidade; um bloco de 21 x 21 x 36 mm talhado na extremidade apical da viga vertical de "partida"; uma abertura de 13 x 13 mm cortada no centro deste bloco, formando um túnel que corre perpendicularmente à viga móvel.</td><td></td><td></td><td>Apoie todas as juntas com pequenos suportes de aço.</td></tr><tr><td>Tinta preta (à base de água)</td><td>Handycan</td><td>Acrílico Preto Mate</td><td>2-3 demãos para todas as superfícies de madeira do aparelho de trave de equilíbrio</td></tr><tr><td>Acabamento claro</td><td>Wattle Estapol</td><td>Poliuretano Matt</td><td>Camada única para todas as vigas. Camada dupla para todas as outras superfícies do aparelho de trave</td></tr><tr><td>de equilíbrio Espuma, material</td><td></td><td></td><td>de embalagem Para amortecer qualquer queda da trave de equilíbrio</td></tr><tr><td>70% Etanol, toalhas de</td><td></td><td></td> papel <td>Limpe a viga e a caixa de gol entre cada animal.</td></tr><tr><td>Compressas de gaze/toalhas de</td><td></td><td></td> papel <td>Para forrar o chão da caixa do gol</td></tr><tr><td>Casa do rato (da gaiola de casa)</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

avaliação comportamental do envelhecimento rato sistema vestibular

Behavioral Assessment of the Aging Mouse Vestibular System

Declínio relativo à idade no desempenho da balança está associada à deterioração da força muscular, coordenação motora e função vestibular. Embora uma série de estudos mostram mudanças no equilíbrio fenótipo com a idade em roedores, muito poucos isolar a contribuição vestibular para equilibrar tanto sob condições normais ou durante a senescência. Usamos dois testes comportamentais padronizados para caracterizar o desempenho do equilíbrio de ratos em pontos etárias definidas ao longo da vida: o teste rotarod eo teste trave inclinada. É importante ressaltar, porém, um rotor personalizado construído também é usado para estimular o sistema vestibular de ratos (sem indução de sinais evidentes de doença de movimento). Estes dois ensaios foram utilizados para mostrar que as mudanças no vestibular desempenho de equilíbrio mediada estão presentes ao longo da vida de murino. Os resultados preliminares revelam que tanto o teste rotarod e o teste de feixe de equilíbrio modificada pode ser utilizada para identificar alterações no desempenho do equilíbrio durante o envelhecimento como uma alternativa a mais dificuldades encontradastécnicas ult e invasivos, como medições vestíbulo-ocular (RVO).

Rotarod O desempenho motor de ratos foi descrito como o tempo para cair (TTF) registrados para cada mouse sobre 8 ensaios. Utilizando estas medições de TTF, curvas de formação para cada rato pode ser traçada. Figura 2 mostra exemplos de o desempenho do motor de um rato 1 mês de idade e um rato 9 meses de idade, ao longo de 8 ensaios. Estas curvas mostram um aumento de formação de TTF durante os primeiros ensaios 3-5, seguido por um patamar subsequente. Medidas de TTF gravadas a...

Controlo do motor e desempenho da balança são conhecidos por se deteriorar com a idade. Este artigo apresenta uma série de testes comportamentais não invasivos padrão com a adição de um estímulo rotativo simples de desafiar o sistema e mostrar vestibulares mudanças no desempenho do equilíbrio em um modelo murino de envelhecimento.

Avaliação Comportamental do Envelhecimento Rato Sistema Vestibular

Age related decline in balance performance is associated with deteriorating muscle strength, motor coordination and vestibular function. While a number of ...

O objetivo geral do experimento a seguir é identificar alterações no desempenho do equilíbrio em um modelo murino de envelhecimento. Isso é alcançado primeiramente treinando os camundongos em um aparelho, para permitir que eles se acostumem com ele, além de aprenderem a tarefa como segundo passo. Os camundongos são testados no aparelho para avaliar sua coordenação motora e equilíbrio.Em seguida, os camundongos são submetidos ao estímulo vestibular e retestados no aparelho. Novamente, os resultados mostrarão alterações no equilíbrio com a idade com base nos dados do rotor-rod e da trave de equilíbrio. A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes, como o teste do reflexo vestíbulo-ocular, que rastreia os movimentos oculares, é que se trata de um método simples e não invasivo para medir o desempenho do equilíbrio.Embora este método possa fornecer informações sobre alterações relacionadas à idade no desempenho do equilíbrio em camundongos, ele também pode ser aplicado a outros sistemas, como distúrbios eritroides e neuromusculares. A demonstração dos procedimentos será realizada por Victoria Tongue, candidata ao doutorado no meu laboratório, Edward Dabney, assistente de pesquisa no laboratório, e Thomas Burton, gerente da Instalação de Comportamento Animal do Instituto Bosch da Universidade de Sydney.No teste da barra rotatória, os camundongos devem caminhar ao longo de hastes giratórias e aceleradas. Quando perdem o equilíbrio, ativam um sensor magnético. Os parâmetros avaliados são registrados pelo aparelho da barra rotatória.Comece instalando pinos em cada canal do rotor. São fornecidos pinos de diferentes tamanhos para camundongos e ratos. No entanto, o uso de pinos para ratos em camundongos funciona bem e evita que os camundongos se agarrem aos pinos em vez de cair.Em seguida, posicione as plataformas magnéticas de pouso sobre o fio abaixo de cada fileira da haste do rotor. Certifique-se de que as plataformas não estejam inclinadas de modo a tocar o chão e de que estejam o mais próximas possível da parede magnética do lado direito, sem tocá-la. Por fim, deslize dois.Painéis plásticos transparentes na frente de cada fileira da haste do rotor. O painel mais curto é colocado abaixo e o painel mais longo é colocado acima. Leve as gaiolas dos camundongos para a sala de testes 10 minutos antes de iniciar os ensaios, enquanto os camundongos se aclimatam.Insira os parâmetros do teste da haste rotatória aceleradora. Primeiro, defina a duração máxima do teste como 60 segundos. Em seguida, defina o número de pistas a serem usadas ou o número de camundongos a serem testados.Em seguida, ajuste as velocidades. Configure o teste para iniciar em cinco RPM e defina o máximo em 44 RPM. Aumente a velocidade progressivamente ao longo de 60 segundos.Por último, configure os parâmetros do bastão para o uso de bastões para ratos girando em direção horária. Quando os camundongos estiverem prontos, coloque o primeiro grupo a ser testado sobre os bastões parados por cinco minutos, permitindo que se aclimatizem. Em seguida, empurre suavemente os camundongos para que fiquem voltados para a parte traseira da barra rotatória e inicie o teste quando todos os camundongos estiverem voltados na direção correta.Após os camundongos caírem, levante-os e devolva-os às suas gaiolas por 10 minutos com livre acesso a alimento e água entre os ensaios, enquanto os animais descansam. Nesse período, remova os resíduos animais das pistas de pinos e das plataformas de pouso. Além disso, reconfigure as plataformas de pouso para o próximo teste. Repita o processo por um total de oito ensaios por camundongo.Os primeiros três a cinco ensaios são utilizados como ensaios de treinamento. Após todos os oito ensaios, limpe cuidadosamente os trilhos e plataformas de pouso da barra rotativa com etanol a 70% e limpe os painéis de plástico transparente com um detergente suave. Neste teste, os camundongos caminham sobre uma viga exposta de um metro de comprimento e 14 milímetros de diâmetro, ao longo de uma ligeira inclinação, em direção ao seu objetivo.Uma câmara escura contendo a cúpula de alojamento do sujeito. Duas câmeras são posicionadas em lados opostos da trave de equilíbrio. Cada uma delas é inclinada para capturar todo o comprimento da trave. As gravações em vídeo documentam os ensaios abaixo da trave.O piso é coberto com material amortecedor. Os camundongos que caírem devem ser recolhidos imediatamente e colocados dentro da caixa-alvo para se recuperarem. O interior da caixa-alvo é forrado com uma toalha de papel para facilitar a remoção dos resíduos animais entre os testes.A caixa é grande o suficiente para acomodar uma cúpula de abrigo em seu interior. Antes de testar um camundongo, coloque-o na caixa de destino por dois minutos. Se um camundongo tentar sair da caixa de destino, cubra a abertura do feixe por cinco segundos com a mão enluvada para desencorajá-lo de sair novamente.Em seguida, o camundongo deve ser treinado para a tarefa. Coloque-o sobre a barra logo fora da caixa-alvo e permita que caminhe até a caixa-alvo. Em seguida, deixe-o descansar por um minuto, depois coloque-o mais abaixo na barra e permita que caminhe novamente em direção ao topo.Sempre dê ao camundongo um minuto na caixa de meta entre os ensaios de treinamento. Mantenha o camundongo cada vez mais distante na trave, até que ele caminhe a partir da linha de partida sem assistência. Para realizar um teste, inicie a gravação e, em seguida, coloque o camundongo na linha de partida.Interrompa a gravação quando o camundongo alcançar a caixa ou quando cair da barra entre as tentativas. Deixe o camundongo descansar por um minuto na caixa de destino e, nesse meio tempo, limpe qualquer urina ou fezes da barra e da espuma subjacente. Cada camundongo deve ser testado cinco vezes dessa maneira.Para adicionar um desafio vestibular adicional a este teste, aplique primeiro o rotador, habituando os camundongos ao som do rotador em três hertz. Opere-o por 20 segundos. Em seguida, transfira o camundongo para a câmara sobre o rotador.Se estiver tendo dificuldades para abaixar o camundongo na câmara, ofereça ao camundongo um objeto para segurar antes de abaixar ambos na câmara. Uma vez que o camundongo estiver dentro da câmara, remova o objeto, substitua a tampa e acione o rotador por 20 segundos. A três hertz, inicie as gravações de vídeo enquanto o equipamento estiver girando.Após 20 segundos, desligue o rotativo e pare manualmente a roda o mais rapidamente possível. Em seguida, mova imediatamente o camundongo até a linha de partida e permita que ele complete o teste. Como de costume, este teste pode ser realizado de uma a três vezes antes que os camundongos deixem de cooperar.Nunca se esqueça de limpar a barra da balança e trocar a toalha de papel entre os camundongos para o rotor de haste. Teste o tempo de queda para um. Um camundongo com um mês de idade e outro com nove meses de idade aumentaram constantemente durante os ensaios de um a cinco e, portanto, foram considerados ensaios de treinamento.Os dados de onde o escore se estabiliza, indicados por uma linha tracejada, foram utilizados para a análise. Camundongos com um mês de idade foram capazes de permanecer na haste rotatória significativamente mais tempo do que camundongos com nove meses de idade. Os dados provenientes de um tamanho amostral pequeno são representados como a média mais ou menos um desvio padrão.O impacto da estimulação vestibular sobre o desempenho no equilíbrio foi também maior com a idade. Um 22º giro a três hertz antes do ensaio aumentou o tempo necessário para percorrer a trave de equilíbrio entre as linhas de início e de término em camundongos de nove e treze meses de idade, mas não em camundongos jovens. A significância foi avaliada utilizando medidas repetidas na Nova com um teste post hoc TUI.Ao realizar esta tarefa, é importante lembrar de transferir o animal do desafio vestibular para o aparelho o mais rápido possível, para minimizar a chance de o animal se recuperar do estímulo antes de concluir a tarefa, seguindo este procedimento. Outras técnicas, como PCR, imagem de cálcio e eletrofisiologia por patch clamp, podem ser utilizadas para responder perguntas adicionais, como se alterações no desempenho motor e no equilíbrio podem ser correlacionadas com mudanças na função dos cabelos celulares vestibulares.

behavioral-assessment-of-the-aging-mouse-vestibular-system

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Nos distúrbios da doença de Parkinson e de movimento, em geral, os ensaios comportamentais sensíveis e fiáveis ​​são essenciais para testar novas terapêuticas potenciais. Aqui, descrevemos uma bateria gerenciável de testes sensório-motores para os ratos que são sensíveis a diferentes graus de lesão no sistema nigroestriatal e útil para estudos pré-clínicos.

Avaliação da função sensório-motora em rato modelos de doença de Parkinson

Análise da função das células ciliadas vestibular é complicada por sua localização profunda na parte mais difícil do crânio, no osso temporal petroso. A maioria dos estudos com células capilares funcionais têm utilizado intensamente as células ciliadas isoladas. Aqui nós descrevemos uma preparação semi-intactos do epitélio vestibular rato para estudos eletrofisiológicos e de microscopia de dois fótons.

Uma preparação semi-intactas isolada do Rato Vestibular epitélio sensorial de Eletrofisiologia e de alta resolução Microscopia de dois fótons

Testes comportamentais é utilizado em ensaios pré-clínicos para avaliar os efeitos fenotípicos de uma doença ou tratamento no bem-estar do animal. Para globalmente avaliar o funcionamento do motor, nós selecionamos testes para locomoção geral, força muscular e coordenação: teste do campo aberto, a malha e o teste de rotarod, respectivamente.

Bateria de comportamental testes de avaliação geral de locomoção, coordenação e força Muscular em camundongos

Este protocolo descreve o vestibulotóxicos cirúrgico de um rato, que é um método útil para o estudo do sistema vestibular.

Vestibulotóxicos cirúrgico do rato para estudar o sistema Vestibular

Neste estudo, vamos mostrar o uso da análise cinemática da marcha com base no plano ventral da imagem latente para monitorar as mudanças sutis na coordenação motora, bem como a progressão de neurodegeneração com o avançar da idade em modelos do rato (por exemplo, endophilin mutante linhas de rato).

Análise de marcha de idade-dependente de perturbações Motor em camundongos com neurodegeneração

O protocolo apresentado produz um persistente conflito sensorial para experimentos vista estudar aprendizagem a longo prazo. Permanentemente usando um dispositivo fixo em suas cabeças, ratos são continuamente expostos à incompatibilidade sensorial entre visuais e vestibulares entradas ao mover-se livremente em jaulas em casa.

A longo prazo conflito sensorial em livremente, comportando-se ratos

Protocolos são apresentados para avaliar os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em roedores usando movimento vertical do elevador e rotação de roda gigante.

Avaliando os efeitos autônomos e comportamentais do movimento passivo em ratos usando movimento vertical do elevador e rotação de roda-gigante

Apresentado aqui é um protocolo para fragmentação crônica do sono (CSF) modelo alcançado por um rotor orbital eletricamente controlado, que poderia induzir déficit cognitivo confirmado e comportamento semelhante à ansiedade em camundongos jovens do tipo selvagem. Este modelo pode ser aplicado para explorar a patogênese da perturbação crônica do sono e distúrbios relacionados.

Um modelo de fragmentação crônica do sono usando rotor orbital vibrante para induzir déficit cognitivo e comportamento semelhante à ansiedade em camundongos jovens do tipo selvagem

O objetivo do presente protocolo é fornecer instruções e diretrizes para avaliar a fragilidade física em camundongos de laboratório C57Bl / 6x129J. São explicados detalhes específicos sobre cada medida utilizada no índice de fragilidade física. Vários métodos para relatar resultados de fragilidade também são apresentados.

Avaliação da fragilidade em um modelo de camundongo idoso

MicroRNAs têm papéis importantes na estrutura e função cerebral. Aqui nós descrevemos um método para impor miRNA hipocampo sobre-expressão usando a injeção estereotáxica de um lentivírus miRNA-expressando engenharia. Esta abordagem pode servir como um modo relativamente rápido para avaliar...

Injeção estereotáxica de microRNA-expressando Lentiviruses ao mouse Região CA1 do hipocampo e avaliação do resultado Behavioral

Aprenda a avaliar o desempenho do equilíbrio em ratos envelhecidos usando estímulo rotatório não invasivo. Este método simples mede alterações no controle motor e na coordenação vestibular.

Avaliação Comportamental do Envelhecimento Rato Sistema Vestibular

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