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Derivação sem alimentador de células da crista neural progenitoras pluripotentes humanas de célul...
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JoVE Journal Neuroscience
Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Derivação sem alimentador de células da crista neural progenitoras pluripotentes humanas de células-tronco

Full Text
14,738 Views
10:33 min
May 22, 2014

DOI: 10.3791/51609-v

Nadja Zeltner1, Fabien G. Lafaille2, Faranak Fattahi1, Lorenz Studer1

1Developmental Biology, Center for Stem Cell Biology,Sloan-Kettering Institute for Cancer Research, 2St. Giles Laboratory of Human Genetics of Infectious Diseases,The Rockefeller University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a defined protocol for generating neural crest progenitor cells from human pluripotent stem cells. The method allows for the study of neural crest-related diseases and further differentiation into progeny cells.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Stem Cell Biology
  • Developmental Biology

Background

  • Neural crest cells are crucial for various developmental processes.
  • Human pluripotent stem cells (hPSCs) can differentiate into multiple cell types.
  • Understanding neural crest cells can aid in modeling diseases.
  • Current protocols may require feeder layers, which this study aims to improve.

Purpose of Study

  • To develop a feeder-free protocol for deriving neural crest cells from hPSCs.
  • To facilitate the study of neural crest-related diseases in vitro.
  • To enable further differentiation into specific progeny cells.

Methods Used

  • Plating hPSCs in a monolayer on matrigel.
  • Using small molecules to differentiate hPSCs into neuro epithelial cells.
  • Replating neuro epithelial cells for further differentiation.
  • Isolating neural crest cells via fluorescence activated cell sorting.

Main Results

  • Successful generation of neural crest progenitor cells from hPSCs.
  • Defined protocol allows for reproducibility and efficiency.
  • Potential applications in studying neural crest diseases.
  • Facilitates further differentiation into various cell types.

Conclusions

  • The feeder-free protocol enhances the derivation of neural crest cells.
  • Provides a valuable tool for research in developmental biology.
  • May lead to advancements in cell replacement therapies.

Frequently Asked Questions

What are neural crest cells?
Neural crest cells are multipotent cells that give rise to various cell types during development.
Why is a feeder-free protocol important?
It simplifies the culture conditions and enhances reproducibility in cell differentiation.
What applications do neural crest progenitor cells have?
They can be used to study neural crest-related diseases and for potential cell replacement therapies.
How are neural crest cells isolated in this protocol?
They are isolated using fluorescence activated cell sorting after differentiation.
What is the significance of using small molecules in this protocol?
Small molecules are used to precisely control the differentiation pathways of hPSCs.
Can this protocol be adapted for other cell types?
While this protocol is specific for neural crest cells, similar methods may be adapted for other lineages.
Crista neural (CN), as células derivadas de células-tronco pluripotentes humanas (HPSC) tem um grande potencial para a modelagem de desenvolvimento humano e de doenças e para terapias de substituição celular. Aqui, uma adaptação livre de alimentador do atualmente utilizado

O objetivo geral deste procedimento é gerar células progenitoras da crista neural a partir de células-tronco pluripotentes humanas em um protocolo curto, reprodutível e definido. Essas células podem então ser usadas para o estudo de doenças relacionadas à crista neural in vitro ou para a diferenciação contínua dessas células em células de progênie. Isso é feito primeiro colocando uma alta densidade de células-tronco pluripotentes humanas em uma monocamada no matrigel.

O segundo passo é diferenciar as células em células neuroepiteliais usando uma sequência definida e uma combinação de pequenas moléculas que afetam as principais vias de sinalização. Em seguida, as células neuroepiteliais são replaqueadas e ainda mais diferenciadas em células progenitoras da crista neural. A etapa final é isolar as células da crista neuro usando a classificação de células ativadas por fluorescência.

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