O transplante de válvula pulmonar Usando um modelo do rato de Heterotópica Transplante de Coração

O objetivo geral deste procedimento é investigar os mecanismos celulares e moleculares subjacentes à formação de neo tecido, espessamento da válvula e desenvolvimento de estenose dentro de uma válvula cardíaca de engenharia de tecido. Isso é feito primeiro colhendo a válvula cardíaca pulmonar do tecido cardíaco do camundongo doador. Na segunda etapa, todo o coração é colhido de um segundo doador.

A válvula cardíaca pulmonar do doador é então implantada no coração do doador e o coração com a nova válvula cardíaca é transplantado heterotopicamente para um camundongo receptor. Em última análise, a função do coração transplantado e o fluxo sanguíneo através da válvula pulmonar podem ser monitorados com um sistema de ultrassom de alta frequência no modo Doppler de onda de pulso. A principal vantagem do uso do modelo de camundongo sobre outros modelos animais de grande porte é que o uso de um modelo murino nos permite tirar proveito de uma ampla gama de reagentes moleculares que nos permitem estudar os mecanismos moleculares celulares subjacentes à formação de neo tecido vascular no desenvolvimento de estenose e válvulas cardíacas de engenharia de tecidos, Geralmente, indivíduos novos neste método terão dificuldades devido à complexidade da sobrevivência. Microcirurgia.

A demonstração visual deste método é crítica, pois a osmose adequada nos locais de transplante é difícil de aprender e porque é difícil realizar a osmose nos vasos de pequeno calibre sem hemorragia Para colher a válvula cardíaca pulmonar do doador, primeiro corte a área do tórax de uma doadora de seis a oito semanas de idade, C 57 camundongo preto seis, e coloque o mouse em uma posição dorsal reclinada. Depois de fazer uma toracotomia, exponha o coração, faça um pequeno corte no átrio direito e perfunda o ventrículo esquerdo com soro fisiológico gelado. Em seguida, disseque a artéria pulmonar da aorta ascendente e, em seguida, corte a válvula pulmonar junto com um manguito de dois milímetros da artéria pulmonar e armazene a válvula pulmonar em uma solução fria, heparina e salina por até duas horas antes do transplante no coração do doador para colher o coração do doador.

Depois de realizar uma toracotomia em uma doadora sacrificada de seis a oito semanas de idade, C 57 camundongo preto de seis, como acabamos de demonstrar sem rodeios, separe o coração, a veia inferior cva, a veia superior cva, a aorta ascendente, a artéria pulmonar e a veia pulmonar. Examina o AVC da veia inferior com gelo, solução salina fria e estéril e, em seguida, liga a veia AVC inferior, a veia AVC superior e a veia pulmonar com sutura de seda 6.0, depois corta superior às ligaduras, corta a aorta e a artéria pulmonar com um manguito de dois milímetros e corta a válvula pulmonar para transplantar a válvula cardíaca pulmonar para o coração doador. Primeiro, coloque a válvula no coração do doador e oriente o tecido.

Em seguida, use suturas de monofilamento de 10 oh em agulhas cônicas para colocar um ponto no lado direito da válvula para prendê-la. Em seguida, coloque cinco a seis pontos contínuos ao longo do outro lado da válvula pulmonar. Depois de terminar a frente da válvula, gire o coração horizontalmente e suture a parte de trás da válvula pulmonar no coração do doador.

Em seguida, ligue a veia pulmonar do coração do doador e extraia o coração. Em seguida, coloque o coração em uma solução salina de heparina fria por até duas horas antes da implantação no camundongo receptor. Agora confirme a sedação de uma receptora de seis a oito semanas, C 57 camundongo preto de seis por pinça de dedo do pé.

E depois de cortar os pelos abdominais e lubrificar os olhos com pomada oftálmica estéril, coloque o camundongo em decúbito dorsal, desinfete o abdômen com Betadine e compressas com álcool e cubra o camundongo com uma cortina estéril, deixando a área da incisão apenas exposta. Em seguida, faça uma incisão de laparotomia na linha média abaixo do xifóide até a região suprapúbica. Em seguida, insira um afastador auto-retentor e envolva os intestinos em gaze umedecida com solução salina.

Sem rodeios, defina a aorta infrarrenal e a veia cva. Em seguida, coloque duas suturas de seda de seis oh e ligue proximal e distalmente ao redor da aorta e da veia inferior da AVC. Para restringir a circulação sanguínea, use uma agulha de calibre 30 para fazer uma autotomia AOR na aorta abdominal e venotomia na veia inferior cva.

Estenda a abertura com uma tesoura até o tamanho da aorta doadora e da artéria pulmonar. Coloque o coração doador no lado direito da aorta abdominal e cubra-o com gaze estéril hidratada e hidrate-o. Prenda a aorta doadora com um ponto na extremidade proximal da abertura na aorta abdominal e, em seguida, coloque quatro a cinco pontos contínuos a partir da extremidade distal da aorta abdominal.

Vire o coração para o lado esquerdo. Cubra-o com gaze infundida com solução salina e suture a extremidade distal da aorta abdominal com mais quatro a cinco suturas contínuas. Prenda a artéria pulmonar doadora com um ponto na extremidade proximal da abertura na veia cava inferior e, em seguida, coloque quatro a cinco pontos contínuos a partir da extremidade distal da veia cava inferior.

Em seguida, lave o lúmen do AVC da veia inferior com heparina e solução salina. Feche a parede direita da artéria pulmonar doadora e do AVC da veia inferior do receptor com suturas contínuas até a extremidade distal. Agora remova a ligadura distal e aplique um agente hemostático estéril absorvível tópico para controlar a hemorragia.

Quando a hemorragia parar completamente, remova a sutura proximal e controle a segunda hemorragia da mesma forma que o coração transplantado começará a bater dentro de cinco minutos após a anastomose bem-sucedida. Em seguida, retorne os intestinos e use seis suturas oh para fechar a musculatura abdominal e a pele em duas camadas. Finalmente, por via subcutânea, injete 0,5 mililitros de solução salina e coloque o camundongo em uma gaiola de recuperação em uma almofada de aquecimento até que o animal esteja totalmente móvel.

Após a recuperação, coloque o mouse sozinho até que esteja totalmente recuperado em uma nova gaiola com cama de papel e administre analgésicos. Água potável por 48 horas. Nessas imagens, o coração implantado no espaço abdominal logo após o transplante cardíaco e cinco minutos após o transplante é mostrado.

Ao remover as suturas em ambos os lados da aorta e da veia inferior da cva, o coração começa a bater dentro de um a dois minutos e fica mais rosado à medida que o sangue começa a circular. Nota-se a maior dilatação no átrio direito. À medida que os batimentos cardíacos ficam gradualmente mais fortes e se tornam estáveis após 24 horas, o fluxo sanguíneo através da válvula pulmonar implantada pode ser medido por via percutânea 10 dias após o implante.

Utilizando um aparelho de ultrassom de alta frequência com modo doppler pulsado, pode-se observar a localização da válvula pulmonar implantada do ventrículo direito da aorta e da artéria pulmonar no modo B. A sobreposição amarela do volume da amostra está localizada no PV implantado, conforme ilustrado no esquema. Conforme indicado no gráfico, a onda QRS do coração do doador é detectada ritmicamente e independentemente da onda cardíaca do receptor com uma velocidade de pico de cerca de 100 milímetros por segundo.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de interromper completamente qualquer hemorragia no local do transplante da válvula pulmonar ou na osmose da aorta doadora para a aorta abdominal do receptor Após este procedimento. Outro método, como o transplante de válvulas cardíacas de engenharia de tecidos em camundongos transing, pode ser realizado para responder a perguntas adicionais sobre a fonte das células que povoam a válvula cardíaca doente. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter obtido uma boa compreensão de como colher a válvula cardíaca pulmonar, como realizar uma substituição da válvula cardíaca e transplante cardíaco heterotópico em um modelo de camundongo.