Murino transplante de córnea: Um modelo para estudar a forma mais comum de Transplante de Órgãos Sólidos

O objetivo geral do procedimento a seguir é introduzir um modelo para rejeição aguda do aloenxerto da córnea. Isso é feito removendo primeiro a córnea do doador. As próximas etapas do procedimento são preparar o leito do enxerto receptor e suturar a córnea do doador no lugar.

Em seguida, a integridade do enxerto é testada e, se não houver vazamentos, a pálpebra é suturada fechada. Após uma semana, a opacidade do enxerto de córnea é avaliada para medir a rejeição do aloenxerto. Em última análise, o modelo pode ser usado, pode testar uma variedade de estratégias terapêuticas para definir os fatores mais importantes ligados à rejeição do aloenxerto Dos transplantes de órgãos sólidos.

O transplante de córnea é o mais comum nos Estados Unidos. Existem vários modelos animais disponíveis para este procedimento, mas os camundongos são os mais comumente usados. Este modelo tem sido utilizado para definir fatores que envolvem tanto a rejeição quanto a aceitação do transplante de córnea.

Depois de anestesiar os camundongos doadores e receptores e confirmar seus estados anestesiados por uma pitada no dedo do pé, aplique pomada lubrificante pura nos olhos que não estão sendo submetidos à cirurgia. Em seguida, prenda a cabeça com o olho doador na horizontal a um suporte móvel e resistente usando uma tira de fita adesiva no pescoço. Agora, usando um dente de dois milímetros de diâmetro cuja ponta foi tingida com azul de metila, contorne o local central do enxerto de córnea.

Em seguida, com uma lâmina de faca oftálmica de 15 graus, penetre na córnea para ajudar a evitar danos à lente subjacente. Injete a solução viscoelástica na câmara anterior para que a câmara se torne mais profunda. Agora excise o enxerto do doador com uma tesoura de Veneza e transfira o enxerto para um prato de HBSS no gelo até o uso para obter madres, administre algumas gotas de 1% de ácido tpicante e cloridrato de 2,5% de efrin no olho receptor.

Em seguida, usando um dente de 1,5 milímetro, contorne o local do enxerto conforme descrito anteriormente, usando uma lâmina de faca oftálmica de 15 graus, penetre na córnea e injete uma solução viscoelástica na câmara anterior para aprofundá-la. Para manter o espaço entre a córnea do doador e o cristalino, isso reduz a chance de danos ao cristalino subjacente e ao endotélio do doador. Com uma tesoura de Veneza, remova o botão central da córnea delineado do recipiente e descarte.

Adicione meio viscoelástico à área desocupada pela remoção do botão da córnea para proteger as células endoteliais da córnea contra danos causados pelo contato direto com a lente. Agora coloque a córnea doadora sobre o leito do enxerto usando uma micropinça de ponta super fina. Coloque a primeira mordida de sutura de náilon 11.0 no lado doador através da córnea doadora até aproximadamente 90% da espessura total.

Em seguida, para o lado do receptor na mesma profundidade e, em seguida, amarre. Continue prendendo a córnea transplantada usando suturas interrompidas cardinais médias. Um total de oito a 10 suturas são tudo o que é necessário.

Agora reforme e lave a câmara anterior com uma injeção de solução salina. Alternativamente, injete ar na câmara anterior para reformá-la. Após a injeção, teste suavemente a integridade do enxerto usando uma esponja de celulose.

Finalmente, avalie o olho. Determine se a pupila é redonda e se a câmara anterior parece normal. Se o enxerto parecer bom, aplique pomada antibiótica e, opcionalmente, feche a pálpebra com sutura de seda 7.0 no pós-operatório.

Monitore o mouse até que ele esteja totalmente acordado e continue observando-o em sua gaiola doméstica por dois dias. Remova as suturas do camundongo anestesiado entre quatro e sete dias após a operação. Depois de remover as suturas, observe o mouse por vários dias.

Usando uma escala de opacidade, avalie cada córnea com uma pontuação de zero a cinco. Um zero indica que não há opacidade. Uma pontuação de um corresponde à opacidade superficial mínima.

Uma pontuação de dois indica opacidade leve a mais profunda com uma pupila subjacente discernível. E íris um sinal de uma pontuação de três para córneas com opacidade estromal em que a íris não pode ser vista em detalhes, com exceção das margens da pupila. Se houver opacidade estromal densa e nenhuma estrutura subjacente puder ser vista, dê ao enxerto uma pontuação de quatro.

Se, se houver opacidade completa com edema estromal intenso e a pupila e a íris estiverem completamente obscurecidas, marque o enxerto com cinco. O protocolo de texto também sugere uma escala de zero a oito na infiltração dos vasos sanguíneos. Uma grande variedade de manipulações pode ser feita usando o modelo de enxerto.

Por exemplo, as células do baço podem ser adicionadas à câmara anterior do camundongo doador. Depois que o doador for sacrificado, remova o baço e transfira-o para um filtro de células usando um êmbolo de seringa de três mililitros, rompa o baço, depois lave as células do baço em 10 mililitros de HBSS, ressuspenda as células lavadas em 10 mililitros de HBSS e conte as células com um hemocitômetro. Mantenha as células em temperatura ambiente até que sejam usadas posteriormente.

Antes de realizar o transplante de córnea, injete as células na câmara anterior do olho contralateral usando um microscópio de dissecção, injete 1 milhão de células do baço em cinco microlitros de HBSS de uma agulha de calibre 33. O modelo foi usado para testar se a tolerância sistêmica das células T ao antígeno aloantígeno expresso pelo aloenxerto de córnea do doador pode melhorar a sobrevida do enxerto. Os camundongos BC foram tolerados aos antígenos C 57 black 10 allo por injeção de células B 10 do baço na câmara anterior.

Isso não melhorou a aceitação do aloenxerto de córnea. Estudos demonstram que o estabelecimento da tolerância específica do antígeno ao antígeno alo, medido pelas respostas DTH, não afeta o resultado dos aloenxertos de pele ou córnea. Um estudo semelhante mostrou que, quando a tolerância ao DTH foi estabelecida em camundongos BAB c em relação aos antígenos B 10 alo, o enxerto de pele poupando alguns ou todos os antígenos B 10 não aumentou a sobrevida.

Assim, o intestino C com DTH específico do antígeno estabelecido não se beneficiou de forma mensurável dos aloenxertos de córnea ou pele. Como você pode ver no experimento de hoje, o transplante de córnea é um procedimento tecnicamente desafiador. No entanto, este é o melhor modelo para estudar as células e os fatores que determinam o sucesso ou fracasso do gráfico.