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DOI: 10.3791/51991-v
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Modelos de cultura celular proporcionar um controle detalhado sobre as condições ambientais e, assim, proporcionar uma plataforma poderosa para elucidar vários aspectos da biologia celular neuronal. Nós descrevemos um método rápido, barato e confiável para isolar, dissociar e cultura neurônios sensoriais a partir de embriões de galinha. Os detalhes da preparação substratos e imunocitoquímica também são fornecidos.
O objetivo geral deste procedimento é cultivar uma população enriquecida de neurônios sensoriais primários dissociados de embriões de galinha. Isso é feito coletando gânglios da raiz dorsal intactos do dia embrionário, sete a 10 embriões de galinha em um tubo cônico e, posteriormente, quebrando-os em sua suspensão celular dissociada. Como uma segunda etapa dissociada, as células DRG são colocadas em uma placa de cultura para incubação.
Depois, a placa de cultura é enxaguada suavemente para desalojar preferencialmente os neurônios. A etapa final inclui o revestimento dos neurônios sensoriais dissociados nos substratos bem definidos, como lamínulas lavadas com ácido e cozidas pré-codificadas com altas ou baixas concentrações de laminina. Uma imunoquímica cito é usada para mostrar a presença de NCA e integrinas beta um ativadas nos corpos celulares, neuritos e cones de crescimento dos neurônios sensoriais de pintinhos embrionários cultivados dissociados.
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