Name: Implantação de fibrina Gel no tapete do pulmão para o Estudo de angiogênese Lung-specific (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 52 s
Description: Aprenda a implantar gel de fibrina na superfície pulmonar de camundongos para estudar angiogênese e regeneração alveolar. Este método inovador permite investigar o microambiente específico do pulmão em processos de regeneração tecidual.

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Este trabalho foi financiado por fundos da American Heart Association (AM), Departamento de Defesa dos EUA (BC074986), e do Boston Children Hospital Faculdade Career Development Fellowship (TM, AM). Os autores agradecem a Amanda Jiang e Elisabeth Jiang para assistência técnica.

NOTA: O estudo in vivo em animais foi realizado em estrita conformidade com as recomendações do Guia para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório do Instituto Nacional de Saúde. O protocolo foi revisto e aprovado pelo Comitê de Cuidados e Uso Animal do Hospital Infantil de Boston (números de protocolo: 13-10-2526R, 14-02-2568R). Todos os medicamentos utilizados neste protocolo são de grau farmacêutico e esses medicamentos são preparados em condições estéreis. 1. Preparação de fibrina Gel <ol><li> Prepare gel de fibrina que contém o VEGF e bFGF. <ol><li> Descongelar as soluções estoque de fibrinogénio e trombina que são armazenadas a -80 ° C até à temperatura ambiente (25 ° C). </li><li> Adicionar trombina (concentração final: 2,5 U / ml), CaCl2 (concentração final: 45 mM), de VEGF (concentração final: 0-100 ng / ml) e bFGF (concentração final: 0-100 ng / ml) para o fibrinogénio solução (concentração final: 12,5 mg / ml em 0,9% sodium uma solução de cloreto 43-45) em um tubo de 1,5 ml. </li><li> Misture delicadamente por pipetagem. </li><li> Pipeta suavemente 200 ul da mistura num prato de plástico estéril de uma forma gota a gota, usando uma pipeta de ponta p200. </li><li> Incubar as gotas a 37 ° C durante 30-60 minutos até se solidificar. NOTA: O gel solidificado pode ser mantido no prato de plástico selado à temperatura ambiente (25 ° C) durante várias horas antes da implantação (Figura 1a). </li></ol></li><li> Apare o gel de fibrina em aproximadamente 3 x 3 x 3 cubos mm utilizando pequenas tesouras cirúrgicas antes da implantação. </li></ol> 2. Preparação do rato <ol><li> Anestesiar rato adulto (8-12 semanas) por injecção intraperitoneal (IP) de injecção de cetamina (100 mg / kg) e xilazina (10 mg / kg) e confirmam que o rato é adequadamente anestesiados por beliscar dedo do pé do rato. <ol><li> Use vet pomada nos olhos do mouse para prevenir o ressecamento durante o experimento. </li></ol></li><li> Shave fur sobre o lado esquerdo da caixa torácica do mouse. </li><li> Execute entubação endotraqueal do mouse. </li><li> Posicione o mouse sobre a intubação ficar em ângulo de 70 ° e segure o mouse no lugar ligando seus incisivos superiores ao longo de um pequeno anel de borracha localizado na parte superior do suporte. </li><li> Gentilmente retrair a língua de um lado usando uma pinça sem corte. </li><li> Visualizar a laringe, com o auxílio de um microscópio de pescoço de ganso iluminador de fibra óptica. </li><li> Insira endotraqueal cateter elástico (21 G) na traquéia. </li><li> Confirme se o mouse está respirando espontaneamente de uma forma suave (regular 100-150 ciclos / min, sem respiração paradoxal ou superficial). </li><li> Posicione o mouse em posição frontal sob o microscópio de dissecação. </li><li> Mecanicamente ventilar o mouse utilizando um ventilador de roedor (150 ciclos / min e 7 ml / kg volume corrente). </li><li> Contagem costelas para localizar espaço intercostal entre 4ª e 5ª costela. </li><li> Criar um campo estéril sobre a área by completamente limpando com álcool e iodopovidona. Cubra o campo cirúrgico adequadamente com um campo cirúrgico estéril. </li></ol> 3. Rato Cirurgia <ol><li> Após a injecção local de bupivacaína a 0,25% (200 ul) na pele, fazer uma incisão cutânea transversal (cerca de 1 cm de comprimento) sobre o espaço intercostal com tesouras de dissecção. </li><li> Após a injeção de bupivacaína a 0,25% (200 mL) no músculo intercostal, fazer uma incisão do músculo entre a 4ª e 5ª costela usando uma tesoura pequena multa. </li><li> Insira um afastador dissecando entre as costelas para visualizar totalmente o pulmão esquerdo. <ol><li> Raspe uma pequena área (1 x 1 mm quadrados) de pleura visceral do centro de pulmão esquerdo usando uma pinça fina. </li><li> Aplique uma leve pressão sobre a área usando um cotonete estéril até que o sangramento e vazamentos são totalmente controlados. </li><li> Coloque pequena quantidade de mistura fresca de fibrinogénio / trombina (cola de fibrina) (passo 1.1.2. 20 &amp; #181; l) sobre a área usando ponta p200 pipeta. </li></ol></li><li> Suavemente colocar um gel de fibrina (passo 1.2), utilizando pequenas pinças sobre a área (Figura 1b). <ol><li> Confirmar que o gel é bem fixo na área durante os movimentos respiratórios dos pulmões. </li></ol></li><li> Certifique-se de que não existe nem enorme vazamento de ar, nem hemorragia do pulmão. </li><li> Fechar incisões (camadas de músculo e pele) com sutura absorvível, que não tem de ser removido. </li><li> Aspirar a cavidade torácica com 27 G agulha e seringa de 1 ml para evitar pneumotórax. </li><li> Terminar ventilação mecânica. </li></ol> 4. Rato Recovery <ol><li> Verifique se o mouse está respirando espontaneamente de uma forma suave (regular 100-150 ciclos / min, sem respiração paradoxal ou superficial). </li><li> IP injectar 1 ml de pré-aquecido 0,9% de NaCl para evitar a desidratação. </li><li> Permitir mouse para recuperar na almofada de água quente circulante. </li><li> Remover o endotrachetubo al depois de confirmar que o rato tem respiração estável. </li><li> Injectar meloxicam (5 mg / kg, injecção subcutânea (SC), durante 3 dias como analgésico pós-operatório. </li><li> Monitorar os movimentos do mouse com cuidado em um mínimo de 15 minutos de intervalo até que seja esternal (capaz de rolar sua estômago e permanecer em pé) e consciente. </li><li> Após a recuperação, o retorno do mouse para uma nova gaiola isolada de ratos sem cirurgia. </li><li> Monitorar o local da cirurgia para sinais de infecção (vermelhidão, inchaço, secreção), funções biológicas básicas do animal (alimentos e água ingestão, urinar, defecar, ganho de peso corporal), bem como sinais clínicos de angústia (piloerection, reduziu a locomoção) diariamente após a procedimento cirúrgico. </li></ol> 5. A colheita do Pulmão <ol><li> 7 a 30 dias após a implantação, eutanásia do rato usando CO 2 através fonte de gás comprimido. </li><li> Faça uma incisão entre a ponta do apêndice xifóide eo esternoentalhe (esternotomia mediana) e toda a colheita de pulmão com o gel implantado para análise histológica e bioquímica, cortando a traqueia e dissecar todas as conexões com o coração, pulmões e traquéia. </li><li> Corrigir gel implantado com pulmão com solução de paraformaldeído a 4% durante a noite a 4 ºC, incorporar em composto OCT, e tomar seções passo em série de 30 mm de espessura. </li><li> Execute histológico (hematoxilina e eosina) e análises de imuno-histoquímica (marcador endotelial: CD31, marcador epitelial: aquaporin (AQP) 5 e surfactante proteína (SP) -B) usando microscópio confocal 22,37,40. </li><li> Compilar pilhas de secções ópticas (30 mm de espessura) para formar imagens tridimensionais de endotelial pulmão e células epiteliais utilizando imagem 3D software de análise de 37. </li><li> Quantificar áreas projectadas dos vasos sanguíneos recém-formados usando software de análise de imagem 46. </li></ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Este artigo apresenta um novo método para implantar biomateriais na superfície do pulmão de vida do rato adulto. Com este sistema, a angiogénese derivados de pulmão hospedeiro com sucesso, se condensa no interior do material. Este sistema permite que os investigadores para explorar a interferência entre as células endoteliais, outras células (por exemplo, células epiteliais, células mesenquimais, células imunes), e vários componentes da matriz extracelular que são necessárias para a angiogénese local, 50-5...

O objetivo geral deste protocolo é a introdução de um método para implantar gel de fibrina na superfície do pulmão de rato adulto, o que permite aos pesquisadores para caracterizar os mecanismos moleculares da vascular pulmonar e desenvolvimento alveolar, e para aproveitar esse conhecimento, a fim de desenvolver materiais biomiméticos capaz de recapitular vascular pulmonar fisiológico e formação alveolar para o tratamento de várias doenças pulmonares. Mais de 35 milhões de americanos sofrem de doenças pulmonares crônicas, incluindo doença pulmonar obstrutiva crônica e fibrose pulmonar. Esses pacientes têm sintomas crônicos de longa duração respiratórios, como falta de ar, aperto no peito, tosse persistente e cansaço, que prejudiquem significativamente a sua vida diária 1-3. Apesar de uma grande quantidade de esforço para desenvolver terapias eficazes para essas doenças pulmonares, atualmente não há cura; portanto, a qualidade de vida para estes pacientes é pobre e econômica e os custos humanos são oigh 4-7. Atualmente, o transplante de pulmão é a única maneira de salvar os pacientes em fase terminal de doenças pulmonares crônicas. No entanto, por causa da escassez de doadores de transplante, de alto custo, complicações graves, e baixa taxa de sobrevivência 11/08, o transplante não é uma abordagem ideal. Rápido progresso recente em técnicas de engenharia de tecidos tem possibilitado aos pesquisadores modificar geneticamente pulmão implantável por repovoamento todo descelulada pulmão com vários tipos de células progenitoras ou células-tronco pluripotentes induzidas (iPS) células 12,13. No entanto, esses pulmões bioengenharia são funcionais apenas em animais hospedeiros, por várias horas após a implantação 12,14,15. Utilizando biomateriais para regenerar as estruturas complexas e funções dos pulmões também tem sido bastante bem sucedida. Isso pode ser porque os processos biológicos fundamentais que regem a regeneração do pulmão adulto não têm sido bem explorado. No pulmão, a formação do sistema vascular é um dos acontecimentos mais precoces e mais importantes during desenvolvimento e regeneração 16-21. Vasculaturas recém-formados no pulmão não só fornecer oxigénio, nutrientes e os vários componentes celulares necessários para a formação de órgãos, mas também fornecem sinais reguladores instrutivos para células vizinhas 22-25. Assim, a angiogênese desempenha papel-chave na alveolarização regenerativo no pulmão adulto 24,26,27. Além disso, contribui para a angiogênese desregulamentado doenças pulmonares crônicas, como doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) 28, displasia broncopulmonar (DBP) 21-23, e fibrose pulmonar 29. Assim, o desenvolvimento de estratégias mais eficientes para a engenharia pulmões ou o tratamento de doenças pulmonares crônicas, é necessário entender os mecanismos fundamentais da angiogênese específico do pulmão. Cada órgão apresenta propriedades mecânicas e químicas únicas, que podem diferir entre as condições fisiológicas e patológicas 30-33. Estes microenviron órgão-específicamentos regular comportamentos de células endoteliais e orquestrar a formação da rede vascular de forma específica do órgão 24,34-36. Assim, o desenvolvimento de estratégias mais eficazes para a regeneração do pulmão, o mecanismo subjacente a angiogênese específico do pulmão precisa ser entendido. Embora os ensaios de angiogénese in vivo convencionais, tais como implantação subcutânea de hidrogel têm sido amplamente utilizados para pesquisa da angiogênese 37-39, esses métodos não recapitular angiogénese específica de órgão. Recentemente, um novo método para implante de Matrigel em um molde elástico no pulmão do rato tem sido desenvolvido e mostrado para recrutar com sucesso os vasos sanguíneos e células epiteliais do pulmão em 22 géis. Esta abordagem única permitirá que os investigadores para explorar o mecanismo de angiogênese específico do pulmão, bem como as interações entre os vasos sanguíneos e células pulmonares não-vasculares em condições fisiológicas e patológicas. Desde 1) Matrigel não é adequado para a aplicação clínica; 2) o emolde lastic usado para lançar o gel pode afetar interações entre hidrogéis e tecido pulmonar de acolhimento e 3) o molde elástico no pulmão potencialmente causa comprometimento da função pulmonar e dor durante a respiração, como uma abordagem mais clinicamente relevante, uma matriz de fibrina 3D contendo fatores angiogênicos (factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) / factor de crescimento de fibroblastos básico (bFGF)) foi implantado no pulmão do rato sem vazamento no molde elástico, e tem sucesso recapitulado hospedeiro angiogénese derivados de pulmão. Gel de fibrina, fibrilas de polímero gerados a partir de fibrinogénio clivada pela trombina, a armadilha é conhecida uma variedade de factores angiogénicos, tais como bFGF e VEGF para acelerar a angiogénese in vivo 40,41. Devido à sua capacidade regenerativa e natureza biodegradável 42, gel de fibrina é amplamente utilizada no campo da engenharia de tecidos. Este artigo apresenta uma abordagem inovadora e única para implantar gel de fibrina na superfície do pulmão de Adul vivot mouse e demonstra que o anfitrião angiogênese derivado do pulmão é recapitulada no interior dos géis in vivo. Este método, o qual permite aos investigadores a estudar angiogénese específica do pulmão, provavelmente irá levar ao desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas para vários tipos de doenças pulmonares e avançar significativamente os esforços para regenerar com sucesso adulto pulmão.

<table><tbody><tr><td>Fibrinogênio da placenta humana</td><td>Sigma</td><td>F4883</td><td>Para fabricação de gel de fibrina</td></tr><tr><td>Trombina de plasma bovino</td><td>Sigma</td><td>T9549</td><td>Para fabricação de gel de fibrina</td></tr><tr><td>Camundongo recombinante VEGF 164</td><td>R& D</td><td>493-MV</td><td>Para suplementação de gel de fibrina</td></tr><tr><td>Camundongo recombinante bFGF</td><td>R& D</td><td>3139-FB</td><td>Para suplementação ao gel de fibrina</td></tr><tr><td>Suporte de intubação de roedores</td><td>Braintree Scientific INC</td><td>RIS 100</td><td>Para intubação</td></tr><tr><td>Fonte de luz de fibra óptica</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-35</td><td>Para intubação</td></tr><tr><td>21 G Cateter elástico</td><td>B.Braun</td><td>4251652-02</td><td>Para intubação</td></tr><tr><td>MiniVent Ventilador</td><td>Harvard Aparelho</td><td>CGS-8009</td><td>Para </td></tr><tr><td>Stemi DV4 Steromicroscope</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-070-515</td><td>para cirurgia</td></tr><tr><td>Sutura de absobable Sutura</td><td>Ethicon</td><td>PDP304</td><td>Sutura cirúrgica</td></tr><tr><td>Anticorpo contra CD31</td><td>BD Biosciences</td><td>553370</td><td>Anticorpo de imuno-histoquímica</td></tr><tr><td>contra AQP5</td><td>Abcam</td><td>AB78486</td> Anticorpo de <td>imuno-histoquímica</td></tr><tr><td>contra SP-B</td><td>Abcam</td><td>AB40876</td><td>Imuno-histoquímica</td></tr></tbody></table>

implantação de fibrina gel no tapete do pulmão para o estudo de angiogênese lung-specific

Implantation of Fibrin Gel on Mouse Lung to Study Lung-specific Angiogenesis

Os recentes avanços significativos nas técnicas de pesquisa com células-tronco e bioengenharia têm feito grandes progressos na utilização de biomateriais para regenerar e reparar danos em tecidos simples nas áreas de ortopedia e periodontais. No entanto, as tentativas para regenerar as estruturas e as funções dos órgãos (3D) mais complexas tridimensionais, tais como os pulmões não têm sido muito bem sucedida, porque os processos biológicos de regeneração de órgãos não foram bem exploradas. Torna-se claro que a angiogênese, a formação de novos vasos sanguíneos, desempenha papel fundamental na regeneração de órgãos. Recentemente formado vasculaturas não só fornecer oxigénio, nutrientes e os vários componentes celulares que são necessários para a regeneração de órgãos, mas também fornecem sinais instrutivos para os tecidos em regeneração locais. Portanto, para regenerar com sucesso em pulmões de um adulto, que é necessário para recapitular os microambientes específicos do pulmão em que a angiogénese unidades de regeneração dos tecidos pulmonares locais. Embora conventional ensaios in vivo da angiogénese, tais como a implantação subcutânea de matriz extracelular (ECM) rico em hidrogéis (por exemplo, colagénio ou fibrina géis ou Matrigel - mistura de proteínas de ECM segregado por células de sarcoma de Engelbreth-Holm-Swarm rato), são amplamente utilizados para explorar a mecanismos gerais de angiogénese, a angiogénese específica do pulmão não tem sido bem caracterizada porque os métodos para o implante ortotópico de biomateriais no pulmão não foram bem estabelecidos. O objetivo deste protocolo é a introdução de um método único para implantar gel de fibrina na superfície do pulmão de vida do rato adulto, permitindo a recapitulação bem sucedida de acolhimento angiogênese derivado do pulmão dentro do gel. Esta abordagem permite aos investigadores para explorar os mecanismos pelos quais o microambiente-pulmão específico controla a angiogénese e regeneração alveolar em condições normais e patológicas. Desde o lançamento biomateriais implantados e fornecer sinais físicos e químicos para adjacente ltecidos ung, implantação destes biomateriais no pulmão doente pode potencialmente normalizar os tecidos doentes adjacentes, permitindo que pesquisadores a desenvolver novas abordagens terapêuticas para vários tipos de doenças pulmonares.

Para examinar se a formação vascular pulmonar derivados do hospedeiro, se condensa no interior dos biomateriais implantados no pulmão, geles de fibrina suplementado com grandes factores angiogénicos de VEGF e bFGF (0, 10 e 100 ng / ml cada) foram implantados na superfície das que vivem nos pulmões de ratinho quanto relataram o uso de Matrigel 22. 47 geles de fibrina que contêm estes factores de crescimento angiogénicos foram fabricados como se mostra na Figura 1a. Após toracotomia, uma pequen...

A recapitulação do microambiente órgão-específico, que estimula a angiogênese local, é indispensável para a regeneração bem-sucedida dos tecidos danificados. Este relatório demonstra um novo método para implantar géis de fibrina na superfície pulmonar de camundongos vivos, a fim de explorar como o microambiente específico do pulmão modula a angiogênese e a regeneração alveolar em camundongos adultos.

Implantação de fibrina Gel no tapete do pulmão para o Estudo de angiogênese Lung-specific

Recent significant advances in stem cell research and bioengineering techniques have made great progress in utilizing biomaterials to regenerate and ...

O objetivo geral do procedimento a seguir é usar o implante de gel de fibrina para estudar a regeneração vascular e alveolar no pulmão de camundongo. Isso é feito preparando primeiro gotas de gel de fibrina, suplementadas com fatores angiogênicos. Na segunda etapa, o animal experimental é ventilado mecanicamente e o tórax é aberto.Em seguida, um gel de fibrina é cuidadosamente fixado ao pulmão do camundongo com cola de fibrina. E então, na etapa final, o pulmão e o gel implantado são colhidos sete a 30 dias depois para análise histológica. Em última análise, o vaso sanguíneo e a formação alveolar dentro do implante de gel podem ser avaliados por análise imuno-histoquímica.Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da biologia vascular, como como os órgãos correm risco ao microambiente, controlam a angiogênese e a morfogênese dos órgãos, demonstrando que o procedimento será um modelo bema um colega de nosso laboratório Para preparar géis de fibrina que contenham VEGF e BFGF, comece aquecendo 80 graus Celsius negativos, estoques de fibrinogênio e trombina à temperatura ambiente. Quando os estoques estiverem totalmente descongelados, adicione trombina, cloreto de cálcio VEGF e BFGF à solução de fibrinogênio em um tubo de 1,5 mililitro. Em seguida, misture a solução pipetando.Em seguida, pipete suavemente 200 microlitros da mistura, gota a gota, em um prato de plástico estéril. Incube as gotas a 37 graus Celsius por 30 a 60 minutos até que se solidifiquem. Em seguida, use uma pequena tesoura cirúrgica para aparar os géis em cubos de aproximadamente três por três por três milímetros.Depois de confirmar a sedação completa em um camundongo de oito a 12 semanas de idade, cubra os olhos do animal com pomada veterinária para evitar o ressecamento e, em seguida, raspe o pelo sobre o lado esquerdo da caixa torácica. Para intubação endotraqueal, coloque o mouse em um suporte de intubação inclinado a 70 graus e prenda os incisivos superiores sobre um pequeno elástico localizado na parte superior do suporte para manter o animal no lugar. Use uma pinça romba para retrair suavemente a língua para um lado e, em seguida, visualize a laringe com o auxílio de um iluminador de microscópio pescoço de ganso de fibra óptica.Em seguida, insira um cateter elástico endotraqueal de calibre 21 na traqueia. Confirme se o camundongo está respirando espontaneamente suavemente e, em seguida, coloque o animal em decúbito ventral sob o microscópio de dissecação. Use um ventilador de roedores para ventilar mecanicamente o animal a 150 respirações por minuto e sete mililitros por quilograma de volume corrente.E então conte as costelas para localizar o espaço intercostal entre a quarta e a quinta costela. Em seguida, limpe bem a área com álcool e iodopovidona para criar um campo estéril e cubra a área cirúrgica com um tra estéril para colocar o gel no pulmão. Em seguida, faça uma incisão transversal de um centímetro na pele sobre o espaço intercostal.E então faça uma incisão muscular entre a quarta e a quinta costela. Insira um afastador de dissecação entre as costelas para visualizar completamente o pulmão esquerdo e, em seguida, use uma pinça fina para raspar um por um milímetro quadrado de pleura visceral do centro do pulmão esquerdo usando um cotonete estéril. Em seguida, aplique uma leve pressão na área até que o sangramento e os vazamentos de ar estejam completamente controlados e, em seguida, dispense uma pequena quantidade de cola de trombina de fibrinogênio solidificada sobre a área.Em seguida, coloque suavemente um gel de fibrina na cola e observe os movimentos respiratórios do pulmão para determinar se o gel está bem fixado. Em seguida, feche as incisões com uma sutura absorvível. Aspire a cavidade torácica com uma seringa de um mililitro equipada com uma agulha de calibre 27 para evitar pneumotórax e, em seguida, termine a ventilação mecânica.Depois de confirmar que o camundongo está respirando suavemente, injete um mililitro de cloreto de sódio a 0,9% intraperitoneal pré-guerra para evitar a desidratação e permitir que o camundongo se recupere em uma almofada de água morna circulante. Assim que o animal apresentar respiração estável, remova o tubo endotraqueal e injete um analgésico pós-operatório. Quando o animal estiver totalmente recuperado, devolva-o a uma nova gaiola isolada de camundongos sem cirurgia, monitorando o animal diariamente em busca de sinais de infecção ou complicações.Sete a 30 dias após o implante, eutanasiar o camundongo por protocolo e fazer uma incisão entre a ponta do apêndice xifóide e a fúrcula esternal. Em seguida, corte a traqueia dissecando todas as conexões do pulmão ao coração e à traqueia, colha todo o pulmão e o gel implantado e, em seguida, fixe o gel e o tecido pulmonar em uma solução de aldeído paraforme a 4% durante a noite a quatro graus Celsius no dia seguinte, incorpore o tecido pulmonar no composto OCT e, em seguida, colete seções seriais do pulmão e do gel com uma espessura de 30 micrômetros. Manchar as seções com hematina, eoína e anticorpos contra os marcadores apropriados de interesse.E então, depois de tirar imagens Zack das seções, compile pilhas das seções ópticas para formar imagens tridimensionais das células endoteliais e epiteliais do pulmão. Usando software de análise de imagem 3D. Por fim, quantifique as áreas projetadas dos vasos sanguíneos recém-formados usando o software de análise de imagem apropriado.Sete dias após a implantação, o gel de fibrina é incorporado ao pulmão do hospedeiro A reconstrução 3D de imagens de fluorescência confocal mostrou que as células endoteliais CD31 positivas derivadas do hospedeiro formam redes vasculares dentro dos géis sete dias após a implantação de forma dependente da dose de A-V-E-G-F-B-F-F-F, as células epiteliais pulmonares positivas para aquaporina tipo um cinco e a proteína B surfactante tipo dois positivas também são recrutadas ao longo dos vasos sanguíneos recém-formados dentro dos géis que são suplementados com maiores concentrações de VGF e B, FGFH e d. A coloração de cortes histológicos revela que outros tipos de células hospedeiras também migram para o gel sete dias após a implantação. Esses achados juntos sugerem que as redes vasculares regenerativas derivadas do pulmão do hospedeiro e a formação alveolar são construídas com sucesso dentro dos géis de fibrina após a suplementação com fatores angiogênicos e implantação na superfície do pulmão de camundongo adulto após seu desenvolvimento.Essa técnica abriu caminho para que menos pesquisadores no campo da biologia pulmonar e da medicina primária explorassem o mecanismo da angiogênese normal e como ela ocorre no estado da doença nos pulmões de camundongos.

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Na medição in vivo da camada superficial do rato pulmonar endotelial

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Aqui nós apresentamos um método eficaz para investigar a atividade antifibróticos de pilhas stromal mesenquimais humanas infundidas intravenosamente obtidas do cabo de cordão umbilical inteiro que segue a indução de ferimento de pulmão por uma injeção endotraqueal da bleomicina em C57Bl /6 ratos. Este protocolo pode facilmente ser estendido ao teste pré-clínico de outras terapêuticas.

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Aqui, apresentamos um protocolo para a implantação cirúrgica de uma janela óptica permanentemente habitante para o tórax murino, que permite imagens intravitais de alta resolução do pulmão. A permanência da janela torna-a adequada ao estudo de processos celulares dinâmicos no pulmão, especialmente aqueles que estão evoluindo lentamente, como a progressão metastática das células tumorais disseminadas.

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Este artigo descreve como criar pulmões de camundongos de bioengenharia usando métodos de descelularização e recelularização. Ele também detalha o transplante pulmonar ortotópico subsequente.

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A terapia celular oferece uma intervenção promissora para a fibrose pulmonar usando células progenitoras para reparar tecidos danificados e melhorar a função pulmonar. Como a imagem desempenha um papel fundamental no rastreamento da integração celular, descrevemos o rastreamento in vivo guiado por imagens de partículas magnéticas da terapia celular para fibrose pulmonar em um modelo de camundongo.

Rastreamento in vivo guiado por imagem de células progenitoras epiteliais pulmonares distais transplantadas para fibrose pulmonar usando imagens de partículas magnéticas

Aprenda a implantar gel de fibrina na superfície pulmonar de camundongos para estudar angiogênese e regeneração alveolar. Este método inovador permite investigar o microambiente específico do pulmão em processos de regeneração tecidual.

Implantação de fibrina Gel no tapete do pulmão para o Estudo de angiogênese Lung-specific

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