Injeções intravenosas em Neonatal Ratos
11 de novembro de 2014
Modelos animais de doença pediátrica pode experimentar início precoce e progressão da doença agressiva. Clinicamente entrega terapia relevantes para jovens modelos de mouse pode ser tecnicamente difícil. Este protocolo descreve um método de injecção intravenosa não-invasiva para a ratinhos recém-nascidos nos dois primeiros dias pós-natais de vida.
O objetivo geral deste procedimento é administrar por via intravenosa um artigo de teste a um camundongo recém-nascido. Isso é feito identificando primeiro os camundongos de um a dois dias a serem tratados. O segundo passo é preparar os materiais de injeção.
Em seguida, a injeção é realizada. A etapa final é devolver os camundongos tratados e acordados à mãe. Em última análise, um ensaio a jusante é necessário para determinar se o artigo de teste tem o efeito desejado.
Geralmente, os indivíduos novos nesse método lutam mais para identificar e direcionar a veia apropriada. Para começar, reúna todo o equipamento necessário para o procedimento de injeção. Além disso, prepare o corante azul de Evans 1% em PBS e uma seringa de insulina com uma agulha de calibre 30 por animal a ser injetado.
Em seguida, remova a barragem para uma gaiola separada enquanto manipula os filhotes. Quando estiver pronto. Coloque um único filhote diretamente no gelo úmido por 30 a 60 segundos.
Para anestesiar. Não deixe o animal no gelo por muito tempo devido ao risco de complicações relacionadas à hipotermia enquanto o animal estiver no gelo. Lotus com 30 microlitros de corante azul de Evan.
Quando o animal estiver totalmente anestesiado, confirmado pela falta de movimento no gelo enquanto ainda respira, mova-o sob o microscópio para uma injeção com a mão direita, coloque o focinho do animal no lugar certo. O dedo indicador esquerdo no focinho e o dedo médio esquerdo se aconchegaram ao fone de ouvido de modo que o fone de ouvido fique entre os dedos indicador e médio. Examine logo anterior ao fone de ouvido em busca de um capilar superficial que se move quando a pele é manipulada.
Este capilar não é o alvo. No entanto, a identificação é importante para a identificação da veia temporal. Em seguida, localize uma veia escura e sombria inferior ao capilar que permanece fixa independentemente da posição da pele.
A veia temporal parece sombria, corre dorsal a ventral e alimenta a veia jugular. Entre na veia temporal com a agulha chanfrada para cima. Se inserido corretamente.
É possível visualizar o enchimento do bisel da agulha com sangue através da pele. Em seguida, pressione o êmbolo lentamente e observe o branqueamento da veia na lateral do rosto. Deixe a agulha permanecer dentro da veia por mais 10 a 15 segundos para evitar o refluxo da injeção.
Após uma injeção adequada, o filhote deve ficar azul. Quase imediatamente. Remova a agulha e use uma força suave para aplicar um cotonete no local da injeção até que o sangue coagule.
Deixe o filhote de dois a três minutos se recuperar e reaquecer. Confirme se o filhote está consciente, ereto e em movimento. Antes de retornar à gaiola, os filhotes podem ser colocados nas mãos enluvadas do investigador para fornecer calor adequado para ajudar na recuperação.
Como alternativa, coloque uma almofada de aquecimento sob a gaiola doméstica para facilitar o aquecimento do filhote injetado. Coloque o filhote de volta na gaiola e cubra com a roupa de cama. Para garantir a aceitação da recarga pela mãe, use uma nova seringa e cotonete para cada filhote para manter a esterilidade após a injeção intravenosa do recém-nascido de um AV nove Inod A expressão do transgene GFP é vista em todo o cérebro, incluindo o estriado anterior, bem como a ponte e o cerebelo.
A expressão de GFP também é detectada na medula espinhal e é observada nos neurônios motores espinhais e nos neurônios dos gânglios da raiz dorsal. A imunofluorescência de GFP é detectável no camundongo adulto, coração e fígado após injeção intravenosa neonatal de GFP auto-complementar AAV nove. Em comparação, a expressão de GFP está ausente no coração e no fígado de camundongos injetados unin, uma vez dominados.
Esta técnica deve levar de três a cinco minutos por animal. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como realizar injeções intravenosas em camundongos recém-nascidos.
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Visão Geral
Este protocolo descreve um método não invasivo para injeção intravenosa em camundongos recém-nascidos, facilitando a entrega de artigos de teste para pesquisa de doenças pediátricas. O procedimento é projetado para camundongos nos primeiros dois dias de vida pós-natal, abordando desafios na entrega de terapias.
Componentes-Chave do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Modelos de doenças pediátricas
Fundamentos
- Modelos animais de doenças pediátricas frequentemente mostram início precoce e progressão rápida.
- Entregar terapias para camundongos jovens pode ser tecnicamente desafiador.
- Métodos não invasivos são essenciais para uma entrega eficaz do tratamento.
Objetivo do Estudo
- Fornecer um método confiável para injeção intravenosa em camundongos neonatais.
- Facilitar o estudo de efeitos terapêuticos em modelos de doenças pediátricas.
- Melhorar a precisão da entrega do tratamento nas fases iniciais da vida.
Métodos Utilizados
- Identificação de camundongos de um a dois dias de idade para tratamento.
- Preparação dos materiais de injeção.
- Execução da injeção intravenosa.
- Retorno dos camundongos tratados à sua mãe após a injeção.
Principais Resultados
- Entrega bem-sucedida de artigos de teste a camundongos neonatais.
- Estresse mínimo aos animais durante o procedimento.
- Facilitação de ensaios subsequentes para avaliar os efeitos do tratamento.
Conclusões
- O método descrito é eficaz para a entrega intravenosa em camundongos recém-nascidos.
- Esta abordagem pode aprimorar a pesquisa sobre doenças pediátricas.
- Estudos futuros podem se basear neste protocolo para várias avaliações terapêuticas.
Perguntas Frequentes
Executive Industry Relevance
Intravenous injection in neonatal mice enables early therapeutic intervention in pediatric disease models with rapid onset, addressing a critical gap in preclinical target validation. This technique supports mechanistic de-risking by allowing systemic delivery of biologics such as AAV vectors during a narrow postnatal window, facilitating whole-body transgene expression. It enhances predictive confidence in lead identification by providing a clinically relevant route of administration that mirrors potential human neonatal therapies.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables interrogation of therapeutic hypotheses in disease models with early postnatal phenotype onset.
- Operational Value: Provides a reproducible method for systemic delivery of test articles to neonates, supporting target engagement studies.
- Predictive Value: Facilitates assessment of transgene distribution and expression patterns critical for validating CNS and peripheral targets.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Prepares validated biological systems for downstream biodistribution and pharmacodynamic assays following intravenous delivery.
- Operational Value: Standardizes injection volume (up to 50 µL) and procedure timing (1-2 min) to ensure assay consistency across litters.
- Scalability: Enables platform reuse across multiple therapeutic modalities, including viral vectors and protein therapeutics, during the perinatal sensitivity window.
Translational & Preclinical Research
- Translational Continuity: Supports extrapolation from neonatal rodent models to infant therapeutic dosing strategies through clinically relevant IV delivery.
- Mechanistic De-risking: Allows longitudinal tracking of transgene expression (e.g., GFP in brain, spinal cord, heart, liver) to assess durability and off-target effects.
- Risk-Adjusted Advancement: Enables early evaluation of therapeutic distribution, informing go/no-go decisions prior to costly GLP studies.
Pipeline & Workflow Integration
This method fits within the discovery continuum from target validation through lead identification to preclinical evaluation, particularly for therapies requiring neonatal intervention.
- Discovery Biology: Supports hypothesis testing by enabling delivery of modulators to neonatal tissues during critical developmental windows.
- Screening: Delivers test articles with quantitative precision, enabling reliable compound or vector evaluation in vivo.
- Analytics: Facilitates downstream quantitative readouts such as transgene expression levels and tissue-specific biodistribution.
- Translational Research: Connects early-life intervention studies to preclinical validation through consistent, scalable delivery.
- Enterprise Reuse: Establishes a standardized neonatal IV injection capability applicable across multiple projects and therapeutic areas.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in target validation by enabling systemic exposure in disease-relevant neonatal models.
- Operational Value: Ensures procedural standardization and reproducibility across users and litters, reducing variability in pharmacokinetic outcomes.
- Strategic Value: Improves capital efficiency by enabling early biological de-risking of neonatal therapies before significant investment.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of candidates demonstrating favorable distribution and target engagement in vivo.
Implementation Considerations
- Requires expertise in neonatal handling and microsurgical visualization under dissecting microscope.
- Dependence on specialized equipment including insulin syringes, 30-gauge needles, and cooling platforms for transient anesthesia.
- Necessitates cross-team standardization of injection technique and post-procedure recovery protocols to ensure animal welfare and data consistency.
- Limited to postnatal days 1-2 due to temporal vein visibility, requiring precise timing in breeding and treatment schedules.
- Procedural success depends on operator skill in vein identification and injection technique to avoid extravasation or hemorrhage.
