Name: Candida albicans biofilme Desenvolvimento on Foreign Bodies medicamente relevantes numa subcutânea modelo do rato Seguido por bioluminescência Imagem (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-01-27T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 31 s
Description: Aprenda a monitorar biofilmes de Candida albicans em modelo subcutâneo de camundongo usando imagem por bioluminescência. Este método permite quantificar formação de biofilmes in vivo de forma não invasiva.

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Este trabalho foi apoiado pelo KU Leuven PF 'IMIR', a comunidade de pesquisa FWO em biologia e ecologia de biofilmes bacterianos e fúngicos (FWO: WO.026.11N) e pelo projeto FWO G.0804.11. A SK agradece à KU Leuven pela bolsa PDMK 11/089 e à FWO pela bolsa de pós-doutorado. Somos gratos a Nico Vangoethem por sua ajuda na preparação das figuras. Agradecemos a Celia Lobo Romero pela assistência técnica durante os procedimentos experimentais in vivo.

NOTA: Todas as experiências com animais foram aprovados pelo comitê de ética da KU Leuven (número do projeto 090/2013). Manter animais em conformidade com as orientações de cuidados de animais KU Leuven. 1. C. Crescimento albicans <ol><li> Vinte e quatro horas antes do início da experiência animal, para preparar as placas de YPD por adição de 10 g de extracto de levedura granulado, 20 g de peptona bacteriológica, e 15 g de agar granulado. Certifique-se o volume para 900 ml com água Milli-Q e autoclave. </li><li> Adicionar 50 ml de estéril de glicose a 40%. Misture bem e despeje em placas de Petri. Deixar placas de agar para esfriar e solidificar. NOTA: Neste estudo, use duas linhagens, ou seja, do tipo selvagem C. albicans SC5314 - Gluc tensão negativa (referido como WT) e C. albicans estirpe SKCA23, que é um tipo selvagem C. albicans SC5314 transformada com Clp10 :: Act1p-gLUC59 plasmídeo 22 .Neste estirpe (nomeado SKCA23- ACTgLuc) gluc foi fundida com o gene endógeno PGA59 sob o controlo de ACT1 (actina) promotor (isto é promotor activo na levedura, bem como fase de crescimento de hifas de fungos). Esta variedade pode ser solicitado ao laboratório do Prof. Patrick Van Dijck, KU Leuven, Leuven, na Bélgica. Plasmídeo Clp10 :: Act1p-gLUC59 plasmídeo 22 foi gentilmente doado pelo Prof. C. d&#39;Enfert, Instituto Pasteur, Paris, França. </li><li> Manter ambas as estirpes em stock glicerol e armazenar a -80 ° C. </li><li> Antes de todas as estirpes experimento raia numa placa de YPD. Incubar a placa a 37 ° C durante a noite. </li></ol> 2. Cateter Pieces Preparação <ol><li> Antes do experimento, determinar quantos cateteres são necessários. É possível implantar até 6 partes de cateter por ratinho (3 cateteres no lado esquerdo e 3 do cateter no lado direito do animal (Figura 2A). </li><li> Vinte e quatro horas antes da cirurgia animal, abra o pacoteidade contendo cateter triplo-lúmen sob a cabine de segurança biológica. Remova todas as peças desnecessárias com pinças estéreis e cortar a parte ligada ao cateter com um bisturi estéril. Coloque governante no âmbito do pacote de plástico e cortar pedaços de cateter de poliuretano de exatamente um centímetro de acordo com a escala da régua (Figura 1). NOTA: É importante mencionar que este tipo de peça cateter não é fosforescente e, portanto, adequado para BLI 18,19. </li><li> Coloque um máximo de 15 peças de corte de cateter (passo. 2.2) em 2 ml microtubos. Sempre preparar 3 peças adicionais, que são usadas para enumerar a quantidade de células de Candida em anexo no dispositivo após o período de adesão. </li><li> Suplemento cateteres com aproximadamente 1,8 ml de 100% de soro fetal bovino (FBS). </li><li> Vortex vigorosamente e adicionar adicional 100-200 ul de 100% de FBS. Cobrir completamente todas as peças de cateter com soro. </li><li> Incubar a 37 ° C durante a noite. </li&gt; </ol> 3. Animais e supressão do sistema imunitário <ol><li> Mantenha feminino camundongos BALB / c (cerca de 8 semanas de idade) no topo gaiolas com filtro ventilado individualmente com acesso livre à comida padrão e água ad libitum. </li><li> Iniciado supressão do sistema imunológico 24 horas antes da cirurgia de animais adicionando dexametasona (0,4 mg / L) na água de beber dos animais. A fim de evitar qualquer contaminação bacteriana do hospedeiro, completar a água potável com antibiótico, por exemplo, pó de ampicilina de sódio (0,5 g / L). </li><li> Manter imunossupressão dos animais durante toda a experiência (até 6 dias). </li></ol> 4. Substratos poliuretano ex vivo C. albicans Aderência em FBS revestidas <ol><li> Transferir cada peça cateter revestido de soro para um tubo de 1,5 mL de microcentrífuga fresco. </li><li> Raspe alguns C. albicans células cultivadas em placas de YPD (Passo 1) e suspendê-las em 1 ml de PBS. </li><li> Diluir Candida células (1: 100) em um tubo de microcentrífuga separados. Tomar 10 ml da amostra diluída e aplicá-lo em uma câmara de contagem de células. Contagem pelo menos 16 pequenos quadrados. </li><li> Preparar as células de Candida (cada estirpe em separado) em meio RPMI 1640 para uma concentração final de 5 x 10 4 células / ml. </li><li> Adicionar 1 ml de suspensão de células a cada pedaço do cateter revestido de soro. </li><li> Vigorosamente vórtice e garantir que os cateteres estão submersos no meio e não flutuando em cima. </li><li> Incubar cateteres em 37 ° C durante 90 min (tempo de adesão). </li><li> Remover cateteres com pinças estéreis e lavar duas vezes com 1 ml de PBS. Durante esta etapa, certifique-se de que o líquido de lavagem passa através do lúmen, mantendo o cateter em posição vertical durante a lavagem muito suavemente os cateteres. É importante notar que não utilize um fluxo forte que pode conduzir à eliminação de células ligadas. </li><li> Transferência de cada cateter lavada para um tubo de microcentrífuga limpo (uma peça por tuser). </li><li> Coloque no gelo e manter lá até a cirurgia. </li></ol> 5. Anestesia <ol><li> Prepare a anestesia por mistura de 75 ul de cetamina (100 mg / ml) com 100 ul de medetomidina (1 mg / ml) e 825 ul de solução salina estéril. Administrar por via intraperitoneal (ip) de 60-80 ul de coquetel de anestésico por 10 g de peso corporal, o que resulta em uma dose de 45-60 mg / kg de cetamina e 0,6-0,8 mg / kg de medetomidina. </li><li> Para inversão da anestesia, diluir 50 ul atipamezol (5 mg / ml) em 4,95 ml de solução salina, administrar ip 100 ul por 10 g de peso corporal como antídoto, resultando numa dose de 0,5 mg / kg. </li><li> Após a injeção de anestesia, colocar o animal em uma gaiola separada e esperar até que esteja totalmente adormecido. </li><li> Confirme anesthetization adequada do animal por pitada pele clara e pitada toe, que não causam qualquer dano à pele. Qualquer movimento observado indica que o animal não é suficientemente anestesiados para realizar a cirurgia. Se isso acontecer, espere um couple de minutos a mais até que o animal não mostra qualquer sinal de movimento sobre a pele ou toe pitada. </li></ol> 6. Cirurgia animal <ol><li> Transferência anestesiados animal a partir da gaiola sobre um tecido limpo colocado sobre a almofada de aquecimento, pré-aquecido a 37 ° C (Figura 2A, (1)). NOTA: Uma alternativa mais barata é usar cobertores elétricos. É também possível a utilização de almofadas de isotérmicas, que deve ser aquecido no forno de microondas, antes da cirurgia animal. </li><li> Aplicar pomada oftálmica para os olhos. </li><li> Raspar a parte inferior das costas do animal com um barbeador elétrico. Remova todos os pêlos de animais e transferir animais em um tecido limpo. Desinfecção da pele (por exemplo, com 1% de isopropanol iodo ou clorexidina 0,5% em álcool a 70%) e deixar a área desinfectada para secar durante cerca de 1 min (Figura 2A, (2)). </li><li> Fazer uma pequena incisão na pele (um à esquerda e uma no lado direito do animal) (aproximadamente 0,5 &amp;# 8211; 1 cm) (Figura 2A, (3)). </li><li> Dissecar o tecido subcutâneo com uma tesoura para criar dois túneis subcutâneos. Cada túnel deve ser de aproximadamente 1,5 centímetros de comprimento e 1 cm de largura. </li><li> Insira três peças cateteres, previamente infectados com Candida, em cada túnel. Certifique-se de que os cateteres caber ao lado uns dos outros numa disposição horizontal, e que eles não cobrem o outro para permitir a implantação de seis fragmentos de cateter no total (Figura 2A, (4)). </li><li> Feche as incisões com suturas. Alternativamente, usar Dermabond para fechar a ferida. </li><li> Desinfectar a ferida muito suavemente com 0,5% de cloro-hexidina em 70% de álcool ou de isopropanol com iodo (1%). </li><li> Aplicar anestésico local (xilocaína gel, 2%) directamente na ferida. </li><li> Administrar reversão da anestesia (protocolo de 5, passo 2): por via intraperitoneal 100? L por 10 g de peso corporal. </li><li> Transferência dos animais a uma gaiola limpa previamente colocados sobre uma placa de aquecimento. Mantenha o animalseparado e quente até que o animal está completamente acordado. Enquanto isso, continue com a operação e implante do próximo animal. Uma vez que todos os animais operados está totalmente acordado. Transfira para uma gaiola. Monitorar os animais regularmente. </li></ol> 7. A bioluminescência Imagem: Preparação de celenterazina (CTZ), o substrato para G. luciferase princeps <ol><li> Preparar fresco coelenterazina (CTZ) solução estoque por dissolução de 5 mg / ml em etanol acidificado CTZ ou de acordo com as instruções do fabricante. </li><li> Preparar a solução de trabalho de 1,2 mM, por diluição da solução de reserva de 1:10 em PBS estéril. NOTA: injectar 100 ul CTZ soluções de trabalho por via subcutânea na área em torno dos cateteres. Use seringas de insulina por injecção subcutânea de CTZ. </li><li> Sempre mantenha CTZ no escuro (por exemplo, cobrir microtubos contendo CTZ com folha de alumínio). Guardar a solução estoque a -80 ° C durante a duração das experiências. </li></ol&gt; 8. A bioluminescência Imagem <ol><li> Inicializar a câmera BLI. </li><li> Anestesiar os animais utilizando uma caixa de indução. Utilize uma mistura gasosa de isofluorano em oxigénio, N 2 O / O 2, ou ar em 2-3%. </li><li> Após a indução, manter a anestesia na caixa de indução e na câmara de imagem em 1,5-2%. </li><li> Antes de iniciar a sessão de imagem, colocar a placa de imagiologia, na posição A, que corresponde a um campo de visão de 10 cm. Certifique-se que a posição correta dos pontos de venda de anestesia e os animais, colocando um animal dormir na caixa. </li><li> Tire algumas fotografias até que animal é na posição de imagem desejada, no campo de visão direita sob a câmera. </li><li> Prepare duas seringas de insulina, cada um contendo 100 ul da solução de trabalho CTZ. </li><li> Coloque um animal no banco e mantê-lo no sono por meio de um cone do nariz proporcionando anestesia gás. </li><li> Traga as agulhas das seringas num local circundante cateteres e injectar subcutaneamenteo CTZ simultaneamente no topo dos cateteres. </li><li> Imediatamente após a injeção, coloque o animal na chapa quente na caixa de câmera e começar a aquisição de imagem de bioluminescência. </li><li> Adquirir verificações consecutivas com tempos de aquisição que variam de 20 a 60 segundos (dependendo da intensidade do sinal) até que a intensidade máxima do sinal é alcançado. Durante a aquisição do quadro seguinte, medir a intensidade de sinal BLI dos quadros previamente adquiridos pela colocação de um ROI sobre cada trio cateteres e medindo o fluxo de fotões através desta ROI. </li><li> Repita a partir do passo 7 para o animal seguinte (s). </li><li> Depois de imagem, retornar os animais para sua gaiola. Repita BLI durante o curso de um experimento para longitudinal, não-invasivo follow-up de formação de biofilme. </li><li> Analisar os dados BLI usando Viver software de imagem. Coloque um ROI retangular de tamanho fixo em cada trio cateter e medir o fluxo de fótons (radiação) por cada ROI. Repita esse procedimento para cada animal. </li><li> Relatórioa intensidade do sinal de cada BLI trio cateter como fluxo de fótons por segundo. Representam os dados BLI numa escala logarítmica através da representação gráfica da média e desvio padrão de fluxo de fotões por segundo para cada grupo. Realizar análise estatística sobre os log 10 dados transformados. </li></ol> 9. Cateter Explant <ol><li> Preparar tubos de microcentrífuga contendo 1 ml de PBS, uma para cada dispositivo de cateter e mantê-los em gelo. </li><li> Eutanásia dos animais por deslocamento cervical (Figura 2B, (1)). </li><li> Desinfecção da pele do dorso com 0,5% de cloro-hexidina em 70% de álcool ou com isopropanol iodo (1%). </li><li> Realizar uma incisão (cerca de 3 cm) acima dos cateteres. </li><li> Corte o tecido subcutâneo e remover os fragmentos de cateter, um por um de debaixo do tecido subcutâneo utilizando pinças estéreis (Figura 2B, (2)). </li><li> Pega cateter suavemente na posição vertical e lavá-lo duas vezes com 1 ml de PBS estéril. Coloque cada cateterpedaço para um tubo de microcentrífuga separados (preparado na Fase 1). </li></ol> 10. As células A quantificação do biofilme-associados por Formadoras de Colônias Conde Units (UFC) e Análise estatística dos resultados <ol><li> Sonicar cateteres colocados previamente em 1 ml de PBS durante 10 min a 40.000 Hz, em um banho de água sonicador e colocá-los em gelo. </li><li> Depois de ultra-sons, vigorosamente vortex por 30 segundos e coloque novamente no gelo. </li><li> Preparar dois tubos de microcentrífuga adicionais contendo 900 ul de PBS. </li><li> Adicione 1:10 e 1: 100 a partir de diluições sua amostra original (aquele que contém o cateter) e manter todos os tubos de microcentrífuga em gelo. </li><li> Placa de 100 ul das amostras originais, 1:10 e 1: 100 diluições em placas de YPD-agar em duplicado. </li><li> Incubar as placas durante 2 dias a 37 ° C e contagem de UFC. </li><li> Contar as colônias cultivadas em placas de ágar YPD (valor contábil de colônias, máximo de 300 colônias / placa) e multiplicá-los pelo bom Dilufator mento (1x-original, 10x ou diluição 100x). Além disso multiplicar cada pedaço de cateter por 10x, o que corresponde ao valor final das colônias em um tubo ml contendo o cateter. Traga o montante final das colônias para log 10 células / pedaço de cateter com desvio padrão (SD). Expresso de dados como a média ± SD. </li><li> Coloque todos os valores para cada cateter e grupo específico para um programa de folha de cálculo e / ou estatístico, para realizar os cálculos e as análises estatísticas acima mencionados. Indique grupos específicos para comparar, ou seja, WT vs. mutante ou 2 dias vs. 6 dias de formação de biofilme e realizar teste t não pareado e ANOVA com pós-teste de Tukey com os dados transformado-log10. <ol><li> Expresse o nível de significância por um valor de p. Neste estudo indicam significância, se o valor de p &lt;0,05, representado como se segue: * p &lt;0,05, ** p &lt;0,005, *** p &lt;0,0005. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Yapar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+and+risk+factors+for+invasive+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Ther+Clin+Risk+Manag%22%5BJournal%5D)">Epidemiology and risk factors for invasive candidiasis.</a> Ther Clin Risk Manag. 10, 95-105 (2014).</li>
<li>Tournu, H., Van Dijck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+biofims+and+the+host%3A+models+and+new+concepts+for+eradication%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Candida biofims and the host: models and new concepts for eradication.</a> Int J Microbiol. 2012, 845352(2012).</li>
<li>Taff, H. T., Mitchell, K. F., Edward, J. A., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+Candida+biofilm+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of Candida biofilm drug resistance.</a> Future Microbiol. 8 (10), 1325-1337 (2013).</li>
<li>Mathé, L., Van Dijck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+insights+into+Candida+albicans+biofilm+resistance+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Genet%22%5BJournal%5D)">Recent insights into Candida albicans biofilm resistance mechanisms.</a> Curr Genet. 59 (4), 251-264 (2013).</li>
<li>Kucharíková, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activities+of+systematically+administered+echinocandins+against+in+vivo+mature+Candida+albicans.+biofilms+developed+in+a+rat+subcutaneous+model%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Activities of systematically administered echinocandins against in vivo mature Candida albicans. biofilms developed in a rat subcutaneous model.</a> Antimicrob Agents Chemother. 57 (5), 2365-2368 (2013).</li>
<li>Kuhn, D. M., George, T., Chandra, J., Mukherjee, P. K., Ghannoum, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifungal+susceptibility+of+Candida+biofilms%3A+Unique+efficacy+of+amphotericin+B+lipid+formulations+and+echinocandins%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Antifungal susceptibility of Candida biofilms: Unique efficacy of amphotericin B lipid formulations and echinocandins.</a> Antimicrob Agents Chemother. 46 (6), 1773-1780 (2002).</li>
<li>Ramage, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liposomal+amphotericin+B+displays+rapid+dose-dependent+activity+against+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Liposomal amphotericin B displays rapid dose-dependent activity against Candida albicans biofilms.</a> Antimicrob Agents Chemother. 57 (5), 2369-2371 (2013).</li>
<li>Andes, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+an+in+vivo+central+venous+catheter+Candida+albicans+biofilm+model%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of an in vivo central venous catheter Candida albicans biofilm model.</a> Infect Immun. 72 (10), 6023-6031 (2004).</li>
<li>Schinabeck, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+model+of+Candida+albicans+biofilm+infection%3A+liposomal+amphotericin+B+antifungal+lock+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Rabbit model of Candida albicans biofilm infection: liposomal amphotericin B antifungal lock therapy.</a> Antimicrob Agents Chemother. 48 (5), 1727-1732 (2004).</li>
<li>Lazzell, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+prevention+of+Candida+albicans+biofilms+with+caspofungin+in+a+novel+central+venous+catheter+murine+model+of+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Antimicrob+Chemother%22%5BJournal%5D)">Treatment and prevention of Candida albicans biofilms with caspofungin in a novel central venous catheter murine model of candidiasis.</a> J Antimicrob Chemother. 64 (3), 567-570 (2009).</li>
<li>Nett, J. E., Marchillo, K., Spiegel, C. A., Andes, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+an+in+vivo+Candida+albicans+biofilm+denture+model%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">Development and validation of an in vivo Candida albicans biofilm denture model.</a> Infect Immun. 78 (9), 3650-3659 (2010).</li>
<li>Wang, X., Fries, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+for+catheter+associated+Candiduria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A murine model for catheter associated Candiduria.</a> J Med Microbiol. 60 (10), 1523-1529 (2011).</li>
<li>Harriott, M. M., Lilly, E. A., Rodriguez, T. E., Fidel, P. L. J., Noverr, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+forms+biofilms+on+the+vaginal+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Candida albicans forms biofilms on the vaginal mucosa.</a> Microbiology. 156 (12), 3635-3644 (2010).</li>
<li>Dongari-Bagtzoglou, A., Kashleva, H., Dwivedi, P., Diaz, P., Vasilakos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characerterization+of+mucosal+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Characerterization of mucosal Candida albicans biofilms.</a> PloS One. 4, e7976(2009).</li>
<li>Ricicová, M., Kucharíková, S., Tournu, H., Hendrix, J., Bujdáková, H., Van Eldere, J., Lagrou, K., Van Dijck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+albicans+biofilm+formation+in+a+new+in+vivo+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol%22%5BJournal%5D)">Candida albicans biofilm formation in a new in vivo rat model.</a> Microbiol. 156, 909-919 (2010).</li>
<li>Kucharíková, S., Tournu, H., Holtappels, M., Van Dijck, P., Lagrou, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+efficacy+of+anidulafungin+against+Candida+albicans+mature+biofilms+in+a+novel+rat+model+of+catheter-associated+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">In vivo efficacy of anidulafungin against Candida albicans mature biofilms in a novel rat model of catheter-associated candidiasis.</a> Antimicrob Agents Chemother. 54 (10), 4474-4478 (2010).</li>
<li>Bink, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nonsteroidal+antiinflammatory+drug+diclofenac+potentiates+the+in+vivo+activity+of+caspofungin+against+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">The nonsteroidal antiinflammatory drug diclofenac potentiates the in vivo activity of caspofungin against Candida albicans biofilms.</a> J Infect Dis. 206 (11), 1790-1797 (2012).</li>
<li>Van de Velde, G., Kucharíková, D., Schrevens, D., Himmelreich, U., Van Dijck, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+non-invasive+monitoring+of+pathogen-host+interactions+during+Candida+albicans+biofilm+formation+using+in+vivo+bioluminescence%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Towards non-invasive monitoring of pathogen-host interactions during Candida albicans biofilm formation using in vivo bioluminescence.</a> Cell Microbiol. 16 (1), 115-130 (2014).</li>
<li>Van de Velde, G., Kucharíková, S., Van Dijck, P., Himmelreich, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+of+fungal+biofilm+development+in+live+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging of fungal biofilm development in live animals.</a> Methods in Molecular Biology. 1098, 153-167 (2014).</li>
<li>Gahan, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bacterial+lux+reporter+system%3A+applications+in+bacterial+localisation+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">The bacterial lux reporter system: applications in bacterial localisation studies.</a> Curr Gene Ther. 12 (1), 12-19 (2012).</li>
<li>Doyle, T. C., Nawotka, K. A., Kawahara, C. B., Francis, K. P., Contag, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+fungal+infections+in+living+mice+using+bioluminescent+pathogenic+Candida+albicans+strains+transformed+with+the+firefly+luciferase+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Pathog%22%5BJournal%5D)">Visualizing fungal infections in living mice using bioluminescent pathogenic Candida albicans strains transformed with the firefly luciferase gene.</a> Microb Pathog. 40 (2), 82-90 (2006).</li>
<li>Enjalbert, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multifunctional+synthetic+Gaussia+princeps+luciferase+reporter+for+live+imaging+of+Candida+albicans+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Infect+Immun%22%5BJournal%5D)">A multifunctional synthetic Gaussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections.</a> Infect Immun. 77 (11), 4847-4858 (2009).</li>
<li>Mosci, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+bioluminescence+mouse+model+for+monitoring+oropharyngeal+candidiasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">A novel bioluminescence mouse model for monitoring oropharyngeal candidiasis in mice.</a> Virulence. 4 (3), 250-254 (2013).</li>
<li>Van Wijngaerden, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foreign+body+infection%3A+a+new+rat+model+for+prophylaxis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Antimicrob.+Chemoth%22%5BJournal%5D)">Foreign body infection: a new rat model for prophylaxis and treatment.</a> J. Antimicrob. Chemoth. 44 (5), 669-674 (1999).</li>
<li>Nobile, C. J., Mitchell, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cell-surface+genes+and+biofilm+formation+by+the+C.+albicans+transcription+factor+Bcr1p%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cell-surface genes and biofilm formation by the C. albicans transcription factor Bcr1p.</a> Curr. Biol. 15 (12), 1150-1155 (2005).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

O uso de modelos animais, e modelos especialmente roedores, para estudos dedicados a biofilmes microbianos é muito importante porque o sistema imune do hospedeiro é um fator essencial na formação de biofilme que modelos in vitro não pode dar conta. Neste estudo, descrevemos um C. subcutânea relativamente simples albicans modelo biofilme rato, que pode ser facilmente adotada em um laboratório de pesquisa e não requer habilidades técnicas fortes. Este modelo foi inicialmente desenvolvido para es...

Cândida albicans é um organismo comensal, que pode ser encontrada em diferentes locais de indivíduos saudáveis, por exemplo sobre a pele ou como uma parte do tracto gastrointestinal e a flora vaginal. No entanto, em hospitalizados, e especialmente pacientes imunocomprometidos, pode causar uma grande variedade de infecções 1. Nesses indivíduos, o sistema imunológico enfraquecido permite que as células de Candida de divulgar para a corrente sanguínea e invadir tecidos mais profundos causando infecções potencialmente fatais. Além disso, a presença de substratos abióticas, tais como cateteres venosos centrais e urinários, válvulas cardíacas artificiais, e as juntas podem proporcionar um nicho para Candida de fixação 2. Adesão ao tais substratos é um pré-requisito para um maior desenvolvimento de biofilme, o que representa uma camada de levedura e hifas células embutidos em material polimérico extracelular, que consiste principalmente de polissacarídeos 2. C. cateter -associated infecções albicansestão associados a alta taxa de mortalidade. A característica geral de biofilmes é a sua sensibilidade diminuída ao antifúngicos conhecidos, tais como azoles 3,4. Apenas as classes mais novas de drogas antifúngicas, como equinocandinas e formulação lipossomal da anfotericina B mostrou-se ativa contra as infecções associadas ao uso de cateter 5-7. Por causa do biofilme resiliência aos antifúngicos, abordagens terapêuticas são muito limitados, muitas vezes levando a remoção do cateter e sua posterior substituição como uma solução única. A maioria de nossa compreensão atual do C. albicans desenvolvimento do biofilme se origina a partir de estudos in vitro sobre substratos abióticas, tais como poliestireno, ou plásticos utilizados para o fabrico dos dispositivos acima mencionados, ou seja, silicone, poliuretano 2. Estes modelos são bastante avançado e tentar simular a situação in vivo, tanto quanto possível. No entanto, estes sistemas não envolvem o fluxo sanguíneo contínuo e tele sistema imune do hospedeiro. Isto resultou no desenvolvimento de sistemas modelo in vivo, tais como o modelo de cateter venoso central (CVC) 8-10, o modelo de estomatite dentadura candidíase oral 11 e um modelo murino para associada a cateter candidúria 12. Além disso, C. albicans desenvolvimento de biofilme foi estudado in vivo sobre as superfícies das mucosas, tais como aqueles a partir da vagina 13 e cavidade oral 14. Nosso laboratório contribuiu com a criação de um C. subcutânea albicans modelo biofilme, que se baseia no implante de peças cateter infectados no dorso de ratos Sprague-Dawley 15. Este modelo foi utilizado com sucesso em nosso laboratório para testar a suscetibilidade biofilme ao fluconazol ea equinocandina drogas 5,16, para estudar o efeito da terapia combinatória de diclofenaco e caspofungin 17. Mais recentemente, este sistema adaptado para utilização em ratinhos BALB / c 18,19. Emcomparação com outros modelos in vivo, a principal vantagem deste modelo subcutânea é a possibilidade de estudar vários biofilmes por animal desenvolvido no interior do lúmen do cateter implantado peças. Para reduzir o número de animais de laboratório, que se adaptaram este modelo para estudar o desenvolvimento de C. albicans biofilmes não-invasiva usando imagem de bioluminescência (BLI) 18,19. Este método provou ser uma técnica poderosa que pode ser utilizada para quantificar os biofilmes medindo o sinal específico BLI na região de interesse (no nosso caso, a área de cateteres implantados), evitando-se o sacrifício dos animais. Em comparação com as bactérias, o que pode expressar o gene e o substrato necessário para a reacção de bioluminescência devido à introdução de um operão lux específico 20, a maioria dos organismos eucariotas, incluindo C. albicans, são dependentes da expressão heteróloga de um gene da luciferase, juntamente com oadministração externa de um substrato específico, tal como D-luciferina ou coelenterazina 21. Provavelmente devido à presença da parede da célula fúngica e C. morfogénese albicans, a entrega intracelular do substrato para a enzima luciferase foi um desafio principal 21. A fim de resolver este problema, Enjalbert et al. 22 de engenharia em que uma estirpe de um C. sintético albicans versão optimizada do codão para o gene naturalmente secretada Gaussia princeps luciferase (GLIC) foi fundida com a da C. gene albicans PGA59, um GPI- ancorada proteínas da parede celular. Devido à presença de luciferase na parede celular, problemas de disponibilidade intracelular do substrato pode ser evitada. Este sistema em particular foi utilizado para estudar as infecções superficiais causadas por C. albicans 22. Muito recentemente, a BLI também foi utilizado para seguir a progressão da candidíase orofaríngea e a sua postratamento e 23. Tais resultados suportam o uso de BLI como uma técnica promissora para estudar infecções causadas por células de vida livre, mas também infecções associadas aos dispositivos. Neste estudo, descrevemos a C. albicans desenvolvimento de biofilme em peças de cateter de poliuretano em camundongos BALB / c e sua quantificação usando BLI. Nós fornecer um protocolo detalhado de colonização in vitro de cateteres de poliuretano durante o período de adesão, seguido pela implantação em ratinhos e subsequente desenvolvimento de biofilme em animais vivos. Para além de medir o sinal emitido pelo BLI C. células albicans, nós também determinar a unidades formadoras de colónias de comparação com a técnica padrão para biofilme fúngico carga quantificação.

<table><tbody><tr><td>Extrato de levedura granulado</td><td>Merck</td><td>MERC1.03753.0500</td><td></td></tr><tr><td>Peptona bacteriológica</td><td>Oxoid</td><td>LP037B</td><td></td></tr><tr><td>Ágar granulado</td><td>Difco</td><td>214530</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-glicose</td><td>Fluka</td><td>49159-5KG</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato tamponado salino&nbsp;</td><td>Preparado em laboratório</td><td></td><td>para 1L de PBS 10x: 80 g de NaCl, 2 g de KCl, 14,4 g de Na2HPO4, 2,4 g de KH2PO4</td></tr><tr><td>RPMI1640 com L-glutamina e sem carbonato de sódio&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>R6504-1L Prepare-se</td><td>de acordo com o protocolo para teste de suscetibilidade a medicamentos de Candida albicans&nbsp;</td></tr><tr><td>Ácido 3-(N-morfolino)propanossulfônico (MOPS)</td><td>Sigma</td><td>M1254</td><td>MOPS é usado para ajustar o pH do meio RPMI (pH 7.0)</td></tr><tr><td>soro fetal bovino (FBS)</td><td>Sigma</td><td>F7524</td><td></td></tr><tr><td>Peça de cateter intravenoso de poliuretano tripe-lúmen (2.4 mm de diâmetro, Certofix Trio S730)&nbsp;</td><td>BBraun</td><td>CV-15703</td><td>Parte de poliuretano cortada em pedaços de 1 cm</td></tr><tr><td>Dexametasona</td><td>Fagron SAS, França</td><td>611139</td><td>Imunossupressor (solução estoque 10 mg/ml)</td></tr><tr><td>Ampicilina&nbsp;</td><td>Duchefa Biochemie, Holanda</td><td>A0104</td><td>Profilaxia antibacteriana</td></tr><tr><td>Cetamina 1000</td><td>Pfizer</td><td>804 119</td><td>Anestésico</td></tr><tr><td>Domitor</td><td>Pfizer</td><td>134737-1</td><td>Anestésico</td></tr><tr><td>Antisedan</td><td>Pfizer</td><td>134783-2</td><td>Reversão da anestesia</td></tr><tr><td>Gel de xilocaína (2%) - este é o Linisol</td><td>AstraZeneca</td><td>352 1206</td><td>Anestésico local para a pele</td></tr><tr><td>Pomada oftálmica de terramicina/ polimixina-b</td><td>Para prevenir o ressecamento e infecção dos olhos</td>Celenterazina&nbsp;<td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Prolume (Nanolight)</td><td>NF-CTZ-FB</td><td>Agente sensível à luz (deve ser mantido no escuro)</td></tr><tr><td>Iodo isopropanol (1%)</td><td>3M&trade; DuraPrep&trade; &nbsp;</td><td></td><td>Desinfetante para a pele</td></tr><tr><td>0,5% de clorexidina em álcool 70%.&nbsp; &nbsp;</td><td>Desinfetante Cedium</td><td></td><td>para a pele</td></tr><tr><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Câmara</td><td></td><td></td><td></td>de contagem de células</tr><tr><td>Seringas de insulina (0,3 ml)</td><td>Terumo Myjector 29G</td><td>324826</td><td>Para injeção de celenterazina</td></tr><tr><td>Barbeador</td><td></td><td></td> elétrico <td>Para pequenos animais</td></tr><tr><td>Ferramentas cirúrgicas</td><td></td><td></td> estéreis <td>Tesouras, 2 pares de pinças, bisturi</td></tr><tr><td>Almofada de aquecimento</td><td>Leica</td><td>14042321474</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de pele</td><td>Johnson& Johnson</td><td>K890H</td><td>Fio cirúrgico, agulha</td></tr><tr><td>Sonicador de banho-maria</td><td>Branson 2210</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BLI camera (IVIS Spectrum)&nbsp;</td><td>Perkin Elmer, Alameda</td><td>IVISSPE</td><td></td></tr><tr><td>Software de imagem viva</td><td>Perkin Elmer, Alameda</td><td></td><td>(versão 4.2)&nbsp;</td></tr></tbody></table>

candida albicans biofilme desenvolvimento on foreign bodies medicamente relevantes numa subcutânea modelo do rato seguido por bioluminescência imagem

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

Candida albicans desenvolvimento de biofilmes em superfícies bióticos e / ou abióticos representa uma ameaça específica para os pacientes hospitalizados. Até agora, C. albicans biofilmes foram estudadas in vitro, mas predominantemente existe uma necessidade importante para uma melhor compreensão deste processo dinâmico em condições in vivo. Desenvolvemos um modelo de rato in vivo subcutânea para estudar C. formação de biofilme albicans. No nosso modelo, múltiplo (até 9) infectados com Cândida dispositivos são implantados para a parte de trás do animal. Isso nos dá uma grande vantagem sobre o sistema modelo de cateter venoso central, uma vez que nos permite estudar vários biofilmes independentes em um animal. Recentemente, nós adaptamos este modelo para estudar C. albicans desenvolvimento de biofilmes em ratinhos BALB / c. Neste modelo, amadurecer C. biofilmes albicans desenvolver dentro de 48 horas e demonstrar a arquitetura típica biofilme tridimensional. A quantificação de biofilme fúngicaé tradicionalmente analisada post mortem e exige sacrifício host. Uma vez que este requer o uso de muitos animais para realizar estudos cinéticos, aplicou-se a bioluminescência de imagem não invasiva (BLI) longitudinalmente para acompanhar amadurecem in vivo C. albicans biofilmes em desenvolvimento em nosso modelo subcutâneo. C. albicans células foram manipuladas para expressar o gene da luciferase princeps Gaussia (GLIC) ligado à parede celular. O sinal de bioluminescência é produzido pela luciferase que converte o substrato coelenterazina adicionada a luz que pode ser medida. O sinal BLI se assemelhava a contagem de células obtidas de cateteres explantados. Imagem não invasivo para a quantificação da formação de biofilme vivo fornece aplicações imediatas para a triagem e validação de drogas antifúngicas em condições in vivo, bem como para estudos baseados em interações patógeno-hospedeiro, vem contribuindo para uma melhor compreensãoing da patogenia das infecções associadas ao uso de cateter.

Neste estudo, nós mostramos o procedimento cirúrgico de implante do cateter e explante durante in vivo C. albicans desenvolvimento de biofilme em um mouse. Além disso, exibimos a quantificação dos biofilmes maduros não só por classical UFC enumeração, mas também por BLI. Como mostrado na Figura 1A, não fosforescentes peças cateter de poliuretano foram cortadas em dispositivos 1 cm e subsequentemente revestidas com soro. Esta etapa é muito importante, pois permite qu...

Apresentamos um procedimento experimental de desenvolvimento de biofilme de Candida albicans em um modelo subcutâneo de camundongo. Os biofilmes fúngicos foram quantificados pela determinação do número de unidades formadoras de colônias e por uma imagem de bioluminescência não invasiva, onde a quantidade de luz produzida corresponde ao número de células viáveis.

Candida albicans biofilme Desenvolvimento on Foreign Bodies medicamente relevantes numa subcutânea modelo do rato Seguido por bioluminescência Imagem

Candida albicans biofilm development on biotic and/or abiotic surfaces represents a specific threat for hospitalized patients. So far, C. albicans ...

O objetivo geral do experimento a seguir é validar o uso de uma cepa que expressa luciferase para o monitoramento não invasivo da formação de biofilme in vivo por células de candida albican. Isso é conseguido implantando fragmentos de cateter colonizados com uma cepa de candida albicans que expressa luciferase nas costas de um camundongo. Durante a segunda etapa, a levedura pode crescer em uma espessa camada de células embutidas em uma matriz extracelular, gerando um biofilme maduro no interior dos cateteres.Em seguida, é adicionado um substrato que será convertido pela enzima luciferase. Esta reação produz luz mensurável A imagem bioluminescente ou BLI é então usada para registrar e quantificar a formação do biofilme dentro do hospedeiro vivo. A principal vantagem desta técnica sobre outras técnicas existentes, como o sistema central de Venmo, é que podemos testar até seis biofilmes dentro de um animal, reduzindo assim o número de animais que precisamos para análise estatística.As implicações desta técnica se estendem à terapia da formação de biofilme de candida albicans, pois nosso método permite o teste fácil de componentes antifúngicos existentes e novos. Além disso, este método pode fornecer informações sobre candida albicans, biofilmes fúngicos. Também pode ser aplicado a outros micróbios, como bactérias ou outras espécies divertidas.Os procedimentos propostos são de fácil implementação em qualquer laboratório que tenha acesso a um biotério 24 horas antes do procedimento cirúrgico abrir a embalagem contendo os cateteres de triplo lúmen dentro de uma cabine de segurança biológica. Use uma pinça estéril para remover todas as partes desnecessárias e um bisturi estéril para cortar a parte presa ao cateter. Em seguida, coloque uma régua sob a embalagem plástica e corte o cateter de poliuretano em pedaços de um centímetro de comprimento.Em seguida, encha cada cateter com aproximadamente 1,8 mililitros de soro bovino 100% fetal e incube os pedaços a 37 graus Celsius durante a noite. Na manhã seguinte, transfira cada peça de cateter revestida com soro para tubos de microcentrífuga individuais de 1,5 mililitro e raspe os albicans de C albicans da placa A YPD em um mililitro de PBS em um tubo de microcentrífuga separado em uma diluição de um a 100. Após a contagem, diluir a suspensão celular até uma concentração final de cinco vezes 10 elevado ao quarto de células por mililitro.E adicione um mililitro de células a cada uma das peças do cateter revestido de soro. Deixe as células aderirem aos cateteres por 90 minutos a 37 graus Celsius. Em seguida, segurando os tubos na posição vertical com pinças estéreis.Lave suavemente cada peça através do lúmen duas vezes com um mililitro de PBS para colocar os cateteres. Comece raspando a parte inferior das costas de uma fêmea de oito semanas de idade Em seguida, desinfete a pele e faça uma pequena incisão de 0,5 a um centímetro em cada lado do animal.Em seguida, disseque o subcu com uma tesoura para criar dois túneis subcutâneos com cerca de 1,5 centímetros de comprimento e um centímetro de largura. Insira três peças de cateter em cada túnel, certificando-se de que as peças fiquem próximas umas das outras em um arranjo horizontal sem sobreposição. Feche as incisões com suturas e limpe as feridas com muito cuidado com um desinfetante.Em seguida, aplique um anestésico local diretamente nas incisões e administre um agente reversor de anestesia monitorando os animais até que estejam totalmente recuperados. Para obter imagens da formação de biofilme no momento experimental apropriado, injete 100 microlitros de bobina recém-preparada e terezin por via subcutânea em cada área que contém os cateteres em um animal anestesiado. Em seguida, adquira varreduras consecutivas com tempos de aquisição variando de 20 a 60 segundos até que a intensidade máxima do sinal seja atingida.Durante a aquisição do próximo quadro, coloque uma região de interesse sobre cada trio de cateteres para medir a imagem bioluminescente ou a intensidade do sinal BLI dos quadros previamente adquiridos. Coloque uma região retangular de interesse de tamanho fixo em uma região de controle também para medir o sinal de fundo no software de imagem viva. Meça o fluxo de fótons através das regiões de interesse para cada trio de cateteres, bem como para o fundo.Depois de repetir essas medições para cada animal e em diferentes momentos durante a formação do biofilme, a intensidade do sinal BLI de cada trio de cateter como fluxo de fótons por segundo. Os dados podem ser copiados e colados diretamente em um programa de planilha. No final do experimento longitudinal, sacrifique cada animal cortado no tecido subcutâneo e use uma pinça estéril para remover os fragmentos do cateter um por um.Lave os cateteres duas vezes em um mililitro de PBS, conforme demonstrado. Em seguida, sonicar as peças em um novo tubo de microcentrífuga em um mililitro de PBS fresco a 40.000 hertz em banho-maria. Sonicar após 10 minutos, colocar os tubos contendo os cateteres no gelo e colocar 100 microlitros das amostras originais em diluições de um a 10 e de um a 100 em placas de ágar YPD.Em duplicado. Finalmente, plote a média e o desvio padrão das unidades formadoras de colônias. E sinal BLI para cada animal em escala logarítmica.Nesta imagem, um animal representativo exibindo o sinal de bioluminescência junto com uma região de interesse denotada seis dias após o desenvolvimento do biofilme é mostrado. Observe a falta de sinalização na área de fundo de controle, confirmando a limitação do biofilme às áreas imediatamente adjacentes aos cateteres revestidos com cândida. Neste experimento representativo, um sinal claro de BLI produzido pela luciferase expressando biofilmes pode ser observado, enquanto apenas o sinal de fundo parece ser produzido pela cepa do tipo selvagem.Esse aumento no sinal segue a mesma tendência que o aumento nas unidades formadoras de colônias por biofilme e as medições de fluxo de fótons para cada grupo de animais juntos. Esses dados ilustram que o BLI é uma técnica poderosa para monitorar e quantificar in vivo a formação de biofilme de C albicans maduros em um modelo de camundongo subcutâneo. Uma vez dominado, a infecção de dispositivos com células de candida pode levar duas horas, enquanto o implante do cateter pode ser feito em 10 minutos por camundongo.A imagem BLI pode ser realizada em cinco minutos por camundongo. A grande vantagem de usar o BLI é que você pode monitorar o desenvolvimento de biomassa e biofilme repetidamente no mesmo animal. Com o tempo Após este procedimento, outros métodos, como ressonância magnética ou tomografia computadorizada, podem fornecer informações sobre a posição exata da catedral.Essas informações podem ser usadas para quantificação em modelos mais complexos, como o modelo Cathedral de veios profundos. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma compreensão muito boa de como realizar biofilme subcutâneo in vivo, ss em camundongos, e isso pode formar a base para uma análise mais aprofundada das interações do patógeno hospedeiro.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo demonstra o desenvolvimento de um modelo de camundongo in vivo para estudar a formação de biofilme de Candida albicans no tecido subcutâneo. O experimento envolve a implantação de dispositivos infectados com Candida na região posterior do animal para o desenvolvimento de biofilme.

Candida albicans Formação de biofilme em um modelo de camundongo in vivo

Aqui descrevemos um modelo murino diabético romance utilizando camundongos sem pelos para monitoramento em tempo real, não-invasivo, de infecções de ferida biofilme bioluminescentes Pseudomonas aeruginosa. Esse método pode ser adaptado para avaliar a infecção de outras espécies bacterianas e microrganismos geneticamente modificados, incluindo várias espécies biofilmes e testar a eficácia das estratégias de antibiofilm.

Venha para o lado da luz: In Vivo monitoramento de infecções por Pseudomonas aeruginosa biofilme em feridas crônicas em um modelo murino Hairless diabética

Este protocolo descreve o uso de um dispositivo personalizável microfluidic automatizado para visualizar a formação de biofilmes de Candida albicans sob condições fisiológicas do hospedeiro.

Visualização da formação de biofilmes de Candida albicans , usando um dispositivo Microfluidic automatizada

O objetivo deste protocolo é visualizar candida albicans forma celular e localização no trato gastrointestinal de mamíferos.

Visualização de candida albicans no trato gastrointestinal murina usando fluorescente in situ hibridização

Para visualizar e quantificar as características internas dos biofilmes candida albicans, preparamos amostras intactas fixas que são esclarecidas pela correspondência de índice simétrico. Em seguida, a microscopia de secção óptica pode ser usada para obter dados de imagem tridimensionais, embora a espessura total do biofilme.

Esclarecendo e Imagem Candida albicans Biofilmes

Este manuscrito descreve a administração intravesical de bactérias uropatômicas com um operon lux para induzir uma infecção do trato urinário em camundongos e posterior análise longitudinal in vivo da carga bacteriana usando imagens de bioluminescência.

Acompanhamento longitudinal de infecções do trato urinário e seu tratamento em camundongos usando bioluminescência imagem

Este manuscrito descreve um método para triagem de bibliotecas mutantes de Candida albicans de tamanho moderado para fenótipos de morfogênese durante a infecção ativa em um hospedeiro mamífero usando microscopia confocal não invasiva.

Uso de imagens in vivo para rastrear fenótipos de morfogênese em cepas mutantes de Candida albicans durante a infecção ativa em um hospedeiro mamífero

A infecção articular periprotética (PJI) causada por patógenos perigosos é comum na ortopedia clínica. Os modelos animais existentes não conseguem simular com precisão a situação real da PJI. Aqui, estabelecemos um modelo de camundongo PJI associado ao biofilme de Candida albicans para pesquisar e desenvolver novas terapêuticas para PJI.

Modelo de Infecção por Candida albicans em Articulação Periprotética em Camundongos

Estabelecemos um modelo murino de infecção relacionada ao cateter (IRC) associada a C.albicans, no qual o biofilme se forma no cateter, e a interação entre C.albicans e hospedeiro correlaciona-se bem com a IRC clínica. Esse modelo ajuda a selecionar terapias para IRC associada ao biofilme de C.albicans , estabelecendo uma base para a transformação clínica.

Modelo de Infecção por Candida albicans Relacionada a Cateter em Camundongos

Este protocolo descreve a aplicação da Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (TFDa) em um modelo murino de candidíase oral. A aPDT foi realizada usando uma mistura solúvel em água de curcuminóides e luz LED azul.

Terapia fotodinâmica antimicrobiana mediada por curcuminóides em um modelo murino de candidíase oral

Este protocolo descreve um modelo experimental único de infecções relacionadas a implantes que permite a incubação simultânea de dois implantes com bactérias sob condições idênticas em um único camundongo. Também permite uma avaliação precisa da formação de biofilme nas superfícies dos implantes usando métodos analíticos comparativos otimizados, demonstrando técnicas avançadas para avaliar as propriedades antimicrobianas dos biomateriais.

Um modelo de camundongo exclusivo para avaliação quantitativa da formação de biofilme em implantes cirúrgicos em abscesso subcutâneo

Aprenda a monitorar biofilmes de Candida albicans em modelo subcutâneo de camundongo usando imagem por bioluminescência. Este método permite quantificar formação de biofilmes in vivo de forma não invasiva.

Candida albicans biofilme Desenvolvimento on Foreign Bodies medicamente relevantes numa subcutânea modelo do rato Seguido por bioluminescência Imagem (Vídeo) | JoVE Journal

Candida albicans biofilme Desenvolvimento on Foreign Bodies medicamente relevantes numa subcutânea modelo do rato Seguido por bioluminescência Imagem

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